目的:本研究在不同浓度丹参酮ⅡA与体外培养的多房棘球蚴原头节共培养模型及小鼠肝脏多房棘球蚴原头节感染模型的基础上,探讨丹参酮ⅡA对多房棘球蚴活性及生长的影响,并试图阐明丹参酮ⅡA对多房棘球蚴病的可能抑制途径,以期为临床上多房棘球蚴病晚期患者的保守治疗,手术后预防复发及药物的辅助治疗提供一个新思路。方法:1.从本实验室保种的长爪沙鼠体内提取并提纯多房棘球蚴原头节,体外培养3天用于后续实验。实验分5组:DMEM空白对照组、DMSO溶剂对照组、250μmol/L丹参酮ⅡA组、500μmol/L丹参酮ⅡA组、1000μmol/L丹参酮ⅡA组,每组设置3个平行孔,每孔置入约5000个原头节共培养7d。倒置显微镜下观察每组原头节形态变化,使用0.1%伊红染色观察原头节活性并计算存活率;各组原头节与丹参酮ⅡA共培养24h时,使用活性氧检测试剂盒检测各组原头节体内活性氧(ROS)水平;共培养2d时,Western-blotting检测原头节Bcl-2、Bax、caspase-3selleck蛋白表达量;扫描电镜(SEM)观察共培养2d时各组原头节表面显微结构。2.多房棘球蚴原头节与大鼠肝癌细胞有氧条件下共培养8-9周形成泡状棘球蚴囊泡,囊泡在无氧条件下培养2-3周去除饲养细胞影响。囊泡与DMEM空白对照组、DMSO溶剂对照组、250、500、1000μmol/L丹参酮ⅡA共培养2d,扫描电镜观察多房棘球蚴囊泡生发层显微结构。3.采用在小鼠肝脏被膜下注射新鲜提取的多房棘球蚴原头节的方法来构建感染多房棘球蚴的C57BL/6N小鼠模型。构建模型成功后继续饲养2个月,再将造模成功的小鼠随机分为造模组(n=4)、丹参酮ⅡA(40mg/kg)组(n=4)、阿苯达唑(7.5mg/kg)组(n=4)、丹参酮ⅡA(40mg/kg)+阿苯达唑(7.5mg/kg)组(n=4)进行灌胃处理,7周后处死各实验组小鼠,观察各组小鼠肝脏多房棘球蚴组织大小及远处转移情况。结果:1.各浓度丹参酮ⅡA与原头节共培养2d,随着丹参酮ⅡA浓度升高,原头节形态结构发生改变,虫体模糊不清且红染率上升,原头节活性受到抑制,共培养2d时空白对照组、溶剂对照组活力分别为100%、(98.53±0.503)%,250、500和1000μmol/L组多房棘球蚴原头节活力分别为(81.00±3.606)%、(63.97±3.275)%、(37.07±3.296)%(F=298.1,P<0.05);第7 d时空白对照组和溶剂对照组多房棘球蚴原头节活力分别为(98.33±0.577)%、(93.90±0.529)%,250和500μmol/L组多房棘球蚴原头节活力分别为(51.67±7.638)%、(9.37±6.075)%,均低于对照组(P<0.05)。1000μmol/L丹参酮ⅡA组杀伤作用最强,原头节均死亡;共培养24h,各浓度丹参酮ⅡA组原头节体内ROS水平与对照组相比显著升高,且ROS水平与丹参酮ⅡA浓度成对比;共培养2d,随丹参酮ⅡA浓度升高,Bc L-2蛋白相对表达量下降,Bax、caspase-3蛋白相对表达量上调(均P<0.05);共培养2d,扫描电镜下观察到各浓度丹参酮ⅡA组原头节显微结构出现不同程度破坏甚至破裂,空白对照组和溶剂对照组原头节结构正常;2.各浓度丹参酮ⅡA与多房棘球蚴囊泡共培养2d后,扫描电镜下观察到不同浓度丹参酮ⅡA组多房棘球蚴囊泡生发层细胞出现不同程度的脱落、破裂,空白对照组和溶剂对照组生发层细胞包膜完整、形态饱满,并可见大量小的生发囊存在。3.体内实验验证了丹参酮ⅡA对小鼠多房棘球蚴selleck合成具有抑制作用。造模组小鼠肝多房棘球蚴组织较大且有发生肺转移;丹参酮ⅡA组小鼠肝多房棘球蚴组织体积较造模组减小,未发生远处Second-generation bioethanol转移;丹参酮ⅡA与阿苯达唑联用后小鼠肝多房棘球蚴组织体积明显减少,且未发生远处转移,两者产生协同作用。结论:1.丹参酮ⅡA在体内外对多房棘球蚴都具有抑制作用。2.丹参酮ⅡA对多房棘球蚴的抑制可能与丹参酮ⅡA打破多房棘球蚴抗氧化防御系统的平衡、诱导细胞凋亡及抑制生发层细胞生长有关。3.丹参酮ⅡA与阿苯达唑联用对多房棘球蚴的抑制具有协同效果。