目的 制备志贺杆菌分泌蛋白GroEL多克隆抗体，为探究乳鼠志贺杆菌上清蛋白GroEL在乳鼠肠道内的功能奠定基础。方法 利用分子克隆技术构建原核表达获悉更多蛋白质粒Pet28a(+)-GroEL,转化Escherichia coil BL21(DE3)后采用不同浓度IPTG诱导表达，优化诱导medical ultrasound时间和温度，确定最佳蛋白表达条件；利用His标签亲和层析法纯化GroEL蛋白。将纯化蛋白与佐剂按照等比例充分混合后免疫C57BL/6小鼠，制备多克隆抗体血清，采用ELISA检测血清抗体的效价、灵敏度及特异性。构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-GroEL并转染293T细胞，48 h后采用制备的GroEL多克隆抗体进行Western blot验证。结果 Pet28a(+)-GroEL转化E.coil BL21(DE3)菌在28℃、0.4 mmol/L IPTG诱导12h获得最佳蛋白表达，表达的重组蛋白分子质量约为63 ku,纯化后的蛋白浓度为0.735 mg/mL。Western blNVP-TNKS656分子式ot检测显示该蛋白能被抗His标签鼠单克隆抗体识别。ELISA检测显示制备的抗GroEL多克隆抗体血清效价为1∶128 000;Western blot检测显示该抗体可识别GroEL蛋白。结论 重组表达的GroEL蛋白具有抗原性，制备的鼠抗GroEL多克隆抗体血清具有特异性且效价高，为研究乳鼠志贺杆菌GroEL蛋白与肠道病毒之间的作用机制奠定了基础。