五种分子伴侣促进牛冠状病毒病毒样颗粒可溶性表达的研究

为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗,并对其进行免疫效果评价。本研究将五种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21(DE3)中制备伴侣感受态细胞,将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2转化至SBE-β-CD使用方法制备好的五种分pathology competencies子伴侣感受态细胞中,各种共表达菌株通过双抗板筛选、诱导剂诱导表达后,通过SDS-PAGE检测上清是否表达来筛选有效的伴侣质粒。从诱导时间和诱导剂浓度选择最佳表达条件。纯化共表达的重组蛋白,利用透射电镜观察是否形成病毒样颗粒(VLPs)。用制备好的VLPs乳化成疫苗免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中的IgG特异性抗体及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平。结果显示成功制备上清表达的BCoV VLPs,将VLPs乳化成疫苗后免疫小鼠,小鼠产生的BCoV IgG抗体水平和细胞因子水平均显著高于对照组(P<0.05)。结果表明分子伴侣pG-KJE8可以在16℃更好的促进牛冠状病毒病毒样颗粒的可溶性表达,且与分子伴侣共表达的BCoV VLPs具有免疫活性,对制备廉价高效的牛冠状病毒Taurine采购样颗粒疫苗具有重要意义。