目的:本研究拟阐明新近克隆的全新雌激素受体亚型ER-α25在乳腺癌细胞中的作用及LPS刺激巨噬细胞分泌的外泌体中ER-α25在乳腺癌细胞干性调节中的作用,并深入了解其作用机制。方法:(1)构建高表达ER-α25Puromycin临床试验乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞并用蛋白免疫印迹方法检测乳腺癌细胞中干性基因表达情况,干细胞球形成实验检测乳腺癌细胞的形成干细胞球能力,通过集落形成实验检测乳腺癌细胞的恶性程度。用蛋白免疫印迹方法Western blot检测高表Alternative and complementary medicine达ER-α25的T47D和MDA-MB-231乳腺癌细胞中EMT相关蛋白的表达。用细胞划痕实验和Transwell实验检测高表达ERα25乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。用蛋白免疫印迹方法Western blot分别检测高表达ER-α25乳腺癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路表达情况,以及使用Wnt信号通路抑制剂XAV939处理后乳腺癌细胞后中检测干性基因表达情况,干细胞球形成能力,集落形成能力及迁移和侵袭能力。(2)对THP-1来源的巨噬细胞分泌的外泌体进行提取,纯化与鉴定,并检测其中ER-α25的表达。(3)乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞分别与LPS刺激的巨噬细胞所分泌的外泌体共培养并检测乳腺癌细胞中干性基因及EMT相关蛋白的表达,干细胞球形成能力,集落形成能力及迁移和侵袭能力。结果:(1)高表达ER-α25的乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞中干性基因表达增强,集落形成能力和干细胞球形成能力均增强,高表达ER-α25的乳腺癌细胞中EMT相关蛋白表达升高,及迁移和侵袭能力增强。同时高表达ER-α25的乳腺癌细胞中β-catenin表达升高。提示Wnt/β-catenin信号通路可能参与ER-α25介导的乳腺Trichostatin A分子式癌细胞干性基因表达升高,并促进乳腺癌细胞集落形成能力和干细胞球形成能力,促进乳腺癌细胞迁移和侵袭能力。(2)LPS处理的巨噬细胞分泌的外泌体中有ER-α25表达。(3)LPS处理的巨噬细胞所分泌的外泌体可增强乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞中干性基因表达,增加干细胞球形成能力和集落形成能力,同时增强迁移和侵袭能力,增加EMT相关蛋白表达并促进乳腺癌细胞迁移和侵袭能力。因此Wnt/β-catenin信号通路可能参与ER-α25介导的乳腺癌细胞干性基因表达增加,乳腺癌细胞集落形成能力和干细胞球形成能力增强,及乳腺癌细胞迁移和侵袭能力增加。(2)LPS处理的巨噬细胞分泌的外泌体中有ER-α25表达。(3)LPS处理的巨噬细胞所分泌的外泌体可增加乳腺癌细胞T47D和MDA-MB-231中干性基因表达,干细胞球形成能力和集落形成能力增强,同时迁移和侵袭能力增强,EMT相关蛋白表达升高及乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的增强。结论:全新雌激素受体亚型ER-α25可能通过Wnt/β-catenin通路诱导乳腺癌细胞的干性。LPS诱导巨噬细胞分泌的外泌体可以通过ER-α25促进周围乳腺癌细胞干性基因表达,导致恶性程度增加。