人血清中前列腺特异抗原蛋白质(PSA)是前列腺癌的肿瘤标志物,由其制作成的检测试剂盒具有大量需求。由于PSA在人血清中含量极低,需要开发分离提浓工艺。论文以建立抗干扰的PSA检测方法为出发点,设计与研究从血清中分离PSA的工艺,获得PSA分离提浓的优化工艺条件,以特征肽段-液质法对提浓PSA进行检selleckchem PCI-32765测。论文主要研究内容如下。首先建立测量PSA浓度的特征肽段-液质法,PSA浓度的准确检测是其分离工艺的基础。该方法是基于PSA的特异性肽段在液质谱上有专一响应的原理,对PSA的浓度进行检测。在建立方法时,先通过模拟酶解肽段并结合酶解实验数据,得出HR、FR和LK是PSA的特征肽段,并合成标记肽段;再以胰蛋白酶作为酶解剂将PSA酶解为特征肽段,采用单因素试验法,考察酶解剂用量和酶解时间对酶解效果的影响,实验结果表明,当酶解剂与PSA质量比为1:70时,酶解效果最好;进一步考察酶解时间因素,发现最佳酶解时间为10小时。在优化的条件下,以特征肽段-液质法对6组浓度为75.31μg/g的PSA溶液进行检测,测定浓度为74.74μg/g,RSD值为0.96%,表明本研究所建立的方法可靠准确,且由于该方法是基于特征肽段的检测方法,因此具有抗干扰性强且适用性广的特点。然后,基于PSA与制备的抗体-磁珠存在亲和作用的原理,设计分离提浓PSA的工艺。该工艺的组成单元为(1)利用抗体-磁珠富集吸附血清PSA的亲和单元;(2)利用磁吸原理分离出富集PSA的抗体-磁珠的富集分离单元;(3)通过洗脱剂洗脱与分离磁珠,获得PSA浓缩液的洗脱单元;Enfermedad por coronavirus 19(4)通过特征肽段-液质法检测PSA浓缩液浓度的检测单元。本研究以添加PSA的人血清为原料,首先在亲和单元通过表面等离子共振技术选择与PSA具有良好亲和力的抗体制备抗体-磁珠溶液,然后探究抗体-磁珠溶液体积对血清PSA富集效率的影响,发现当其与血清体积比为1:10时,PSA的富集效率达到95.53%,基本分离完全。在此基础上,采用单因素试验法,系统研究洗脱单元的洗脱剂种类、用量及洗脱时间等因素对PSA分离浓缩效果的影响。实验结果表明,以与血清体积比为1:5的5 vol%乙酸溶液为洗脱剂,洗脱2分钟时,洗脱效果最好,在优化条件下,按照设计的工艺对血清PSA进行分离实验,分离效率为61.52%,满足企业项目的分离要求。良好的分离效果主要是因为优选PSA抗体对PSA的高效亲和此网站作用,亲和单元是从血清中富集PSA的关键单元。