呼吸道合胞病毒NS2蛋白单克隆抗体的制备及初步研究

呼吸道合胞病毒（selleckchem NirogacestatRespiratory syncytial virus,RSV）是一种引起婴幼儿下呼吸道感染的RNA病毒，其非结构蛋白（Nonstructural protein 2,NS2）在病毒复制和宿主抗病毒免疫中起到关键作用，但目前尚无商品化NS2单克隆抗体。本研究选取NS2基因，经密码子优化后构建重组质粒pET-32a-NS2。将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经16℃诱导表达后，对表达蛋白进行SDS-PAGE鉴定。应用亲和层析技术纯化重组蛋白，将纯化的蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体，并将该单克隆抗体用于Western blot分析、免疫荧光检测和免疫沉淀反应。结果表明，诱导后的重组蛋白为可溶性表达，并经纯化后得到高纯度的NS2蛋白；纯化的NS2蛋白免疫小鼠后，获得了一株特异性强、反应性好的RSV NS2单克隆抗体4A4 2B2，其亚型为IgG1，且抗体效价可达1∶102寻找更多4000；使用该单克隆抗体鉴定出RSV NS2蛋白在转染和感染细胞中正Infection transmission常表达，且NS2主要分布在细胞质中，在细胞核周围形成点状聚集体；在免疫沉淀反应中，该单克隆抗体作为捕获抗体能够特异性结合细胞中表达的NS2蛋白，为NS2蛋白的功能研究奠定了基础。