目的:本实验的目的通过脂多糖(LPS)干预A549细胞构建急性肺损伤的模型,制备宣肺达郁汤含药血清作为干预手段,通过对LPS干预的A549细胞中AAutomated DNACE2/Ang(1-7)/Mas的相关指标进行检测,研究宣肺达郁汤对于急性肺损伤的作用及其影响。方法:制备含宣肺达郁汤的含药血清,预先准备好宣肺达郁汤的处方所需的药材,将其熬制为标准为1 g/ml的药液以备后续使用。本实验随机选取60只SPF级SD大鼠,雌雄各半,分为五组:空白组(蒸馏水),宣肺达郁汤低、中、高剂量组(给药剂量分别为22.4 g·kg~(-1)、44.8 g·kg~(-1)、89.6 g·kg~(-1)),地塞米松(DEX)组(0.2 mg·kg~(-1))。分别灌胃给药三天后,从腹主动脉取血并离心,制备含药血清。对A549细胞进行培养、传代,将符合实验要求的细胞冻存以备用,在进行相关实验时复苏细胞,然后加入到含有胎牛血清、双抗的F-12培养基的培养皿中,于细胞培养箱(湿度饱和,温度37℃,二氧化碳浓度5%)内进行培养。实验组分为6组:空白组、LPS组、宣肺达郁汤低剂量(XFDYL+LPS)组、宣肺达郁汤中剂量(XFDYM+LPS)组、宣肺达郁汤高剂量(XFDYH+LPS)组、DEX+LPS组。宣肺达郁汤含药血清对经LPS干预后的A549细胞的影响进行了多方面的检测,基于CCK-8、ELISA、免疫荧光、流式细胞术、Western Bolt和q RT-PCR实验对ACE2/Ang(1-7)/Mas通路上的相关指标进行检测。结果:我们从实验结果分析研究后,可以发现宣肺达郁汤含药血清可以从一定程度改善受到LPS干预的A549细胞增殖、细胞中的ACE2、Mas蛋白含量以及IL-6、Ang(1-7)的表达。流式细胞术可以检测宣肺达郁汤含药血清对受LPS干预的A549细胞凋亡的影响。Western blot实验和实时荧光定量PCR技术则通过将A549细胞内ACE2、Ang(1-7)、Mas中的蛋白和m RNA的表达呈现,可以更直观地理解宣肺达郁汤含药血清对受LPS干预的A549细胞的影响。结果:通过CCK-8实验,我们发现宣肺达郁汤含药血清可以使本应受LPS抑制的A549细胞的生长趋势重新上升,而这种效应随着治疗的持续时间和含药血清的剂量而提升。免疫荧光实验的结果表明宣肺达郁汤含药血清可以提高ACE2和Mas的蛋白表达量。经Annexin、V-FITC/PI双染法流式细胞术实验,使用宣肺达郁汤含药血清可以一定程度上减少LPS治疗后A549细胞凋亡率,具有剂量依赖性。此外,通过ELISA、免疫荧光和Western blot的研究也表明,使用宣肺达郁汤含药血清可以有效地提升A549细胞内ACE2、Ang(1-7)以及Mas的相关表达量,而这些数据的统计研究表明宣肺达郁汤含药血清对LPS干预下的A54MRTX849小鼠9细胞对ACE2/Ang(1-7)/Mas通路的相关作用。经过q RT-PCR检测,我们发现,使用宣肺达郁汤的血清可以提高被LPSGefitinib浓度干预下的A549细胞内ACE2、Ang(1-7)以及Mas的m RNA表达量,而这种效应还受到药物的剂量的影响。结论:实验表明宣肺达郁汤含药血清能够影响LPS干预A549细胞形成的急性肺损伤模型,使细胞的生长率上升,抑制细胞凋亡,降低IL-6的表达,提高Ang(1-7)的表达,并增加ACE2、Ang(1-7)、Mas的蛋白和基因表达量。以上实验结果验证了宣肺达郁汤含药血清对LPS干预A549细胞形成的急性肺损伤模型有一定保护作用,其作用机制可能与ACE2/Ang(1-7)/Mas信号通路有关。