目的：基于高效液相-四极杆串联飞行时间质谱（HPLC-Q-TOF-MS/MS）分析温肾宣痹汤有效成分，并运用网络药理学探究温肾宣痹汤治疗膝骨关节炎（KOA）的作用靶点及通路，探讨其治疗膝骨关节炎的作用机制。方法：采用HPLC-Q-TOF-MS/MS分析温肾宣痹汤中化学成分。检索TCMSP V2.0获得温肾宣痹汤的活性成分；运用TCMSP数据库筛选活性成分靶点，利用Uniprot数据库对靶点进行标准化命名；通过“GeneCards”等数据库，查询膝骨关节炎相关靶点；利用VennDiagAMG510体内实验剂量ram得到“中药化合物疾病”共同靶点。应用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用网络图。筛选JAK/STAT抑制剂核心作用靶点，进行基因本体论（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果：在温肾宣痹汤的正、负离子模式下采用液质联用综合分析，共鉴定出24种化合物，分别归属于狗脊、附子、天麻、山萸肉、细辛、白术、木香、甘草。筛选出温肾宣痹汤181个活性成分和134个相应蛋白靶点，与膝骨关节炎的2171个疾病相关靶点相交集的核心靶点为72个。GO富集分析共筛选得到76条生物过程（BP）富集结果、12条细胞组成（CC）富集结果及29条分子功能（MF）富集结果。KEGG富集分析共筛选得到相关通路共27条。结论：温肾宣痹汤可以通过抗炎、免疫调节、抗血Clinico-pathologic characteristics管生成、抗氧化等作用，发挥治疗膝骨关节炎的功效。