目的:确定在多发性硬化硬化(multiple sclerosis,MS)/实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)中IL-17分泌型CD8~+T细胞亚群(Tc17细胞)的作用及其与Th17细胞作用的异同关系,并在此基础上,研究黄芪桂枝五物汤治疗EAE的效果及可能机理,以期为将来临床治疗MS提供理论和实验依据。方法:应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_(35-55)多肽(myelin oligodendrocyte glycoprotein peptides _(35-55),MOG_(35-55))、结核分支杆菌素(PTX)、完全弗式佐剂(CFA)诱导雌性C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,a EAE)动物模型(n=20)。a EAE小鼠病程通过0-5级EAE评分进行评定,在EAE评分达到3-4分(12-14天)时处死,脊髓通过苏木精和伊红染色(HE)以及Luxol快速蓝(LFB)染色进行检查;通过尼龙毛柱从脾脏分离T细胞,并使用CD4和CD8分离试剂盒纯化为CD4~+和CD8~+T细胞,然后通过流式细胞仪分析确定纯度,进而制备MOG_(35–55)特异性T细胞。培养基中辅以MOG_(35-55)、mitomycin C处理的抗原递呈细胞(APC)和IL-23来诱导Tc17和Th17细胞。用增殖反应检测其抗原特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养的Tc17和Th17细胞上清液中干扰素γ(IFN-γ)和IL-17的分泌。将激活的Tc17和Th17细胞尾静脉注射到健康小鼠体内来制备过继转移EAE模型(t EAE),通过脊髓组织学和髓鞘染色检测其致病性。完成此期实验后,再次使用MOG_(35-55)诱导雌性C57BL/6小鼠建立a EAE动物模型(n=32),当a EAE小鼠EAE评分达到3-4分(第12-14天)时,将a EAE分为4组,每组8只小鼠,以二种不同剂量(高剂量组50g/kg,低剂量组5g/kg)的黄芪桂枝五物汤作为实验组、以泼尼松(6mg/kg)作为阳性对照、以蒸馏水作为阴性对照,灌胃治疗14天(第28天)处死,通过EAE评分、体重、脊髓组织学和髓鞘染色、抗原特异性检测、ELISA测定培养的Tc17和Th17细胞上清液中IFN-γ和IL-17的分Imidazole ketone erastin泌来评估治疗效果。结果:1.纯化后的CD8~+CD3~+和CD4~+CD3~+细胞分别为总CD3~+细胞的88.2%和90.1%,然后分别诱导为Tc17细胞和Th17细胞,使用MOG_(35-55)多肽刺激这些细胞增殖实验以评估其抗原特异性。结果发现Tc17细胞对MOG_(35–55)的反应低于Th17细胞,但Tc17细胞的反应并不依赖于Th17细胞。与Th17细胞相比,Tc17细胞分泌更少的IFN-γ和IL-17。2.通过过继转移MOG_(35–55)特异性T细胞non-medicine therapy诱导EAE(t EAE)小鼠模型,与Th17细胞-t EAE相比,Tc17细胞-t EAE出现相似的EAE评分和较轻微的炎症和脱髓鞘。3.与低剂量HQGZWW组和蒸馏水相比,高剂量HQGZWW组和泼尼松组EAE评分和病理学均有显著改善。结论:1.在EAE中Tc17细胞具有独立的致病性,但程度较Th17细胞MK-1775低。抗原刺激后Tc17细胞分泌的细胞因子类型与Th17细胞类似。2.高剂量HQGZWWD对EAE评分的影响与泼尼松相似,而低剂量HQGZWWD没有这种影响。