【目的】炎性反应是AD发病的重要机制之一,TLR4/NF-κB信号通路在免疫和炎性反应机制中发挥重要作用。学习记忆是评价神经系统整体发育的重要指标。本研究依据补肾化痰治法选穴,观察电针“肾俞”、“丰隆”穴对AD大鼠学习记忆能力的影响,并基于TLR4/My D88/NF-κB信号通路探讨电针“肾俞”、“丰隆”穴影响AD大鼠学习记忆能力的作用机制。【方法】选用60只2月龄SPF级SD雄性大鼠(体重250±20g)作为实验对象,随机分为假手术组(A)、模型组(B)、补肾组(C)、化痰组(D)、补肾化痰组(E),每组12只。B、C、D、E组大鼠双侧脑室各注射Aβ_(25-35)5μl造模,A组给予同等剂量的生理盐水。A、B组正常喂食,不做干预处理;C、D、E组给予20min/次电针干预,1次/d,6d为1个疗程,共2个疗程,疗程间间隔1d。疗程结束后,采用MEducation medicalorris水迷宫实验(MWM)、旷场实验、新物体识别实验(NOR)检测各组大鼠行为学变化;HE染色、尼氏染色观察海马区病理改变;TUNEL染色检测大鼠脑内细胞凋亡情况;ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10浓度;免疫荧光检测大鼠海马TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10、TLR4、My D88、NF-κB阳性表达;实时定量PCR检测大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6 m RNA的表达;WB检测大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达。【结果】1.各组大鼠行为学变化:(1)MWM实验显示,在水迷宫实验中,A、C、D、E组大鼠平均逃避潜伏期小于B组,平均穿越平台次数多于B组,E组大鼠平均逃避潜伏期小于C、D组,平均穿越平台次数多于C、D组。(2)旷场实验显示,A、C、D、E组大鼠中央区活动时间均长于B组,E组大鼠中央区活动时间均长于C、D组。(3)NOR实验显示,A、C、D、E组大鼠新物体识别系数高于B组,E组大鼠新物体识别系数高于C、D组。2.各组大鼠病理改变:(1)HE染色结果显示,A组海马区神经元排列整齐,结构完整,细胞核呈圆形、染色清晰,形态正常;B组海马区神经元排列不整齐,结构不完整,排列不紧密,核固缩,边缘化、分叶明显,凋亡神经元增多;C、D、E组细胞形态趋于正常,仅有少数神经元核空泡丢失,偶见异质细胞。(2)尼氏染色结果显示,与A组相比,B组大鼠细胞结构不稳定,神经元层次模糊,排列疏松,部分胞内尼氏小体减少或消失,神经元数量相对表达量减少;与B组相比,C、D、E组大鼠细胞结构较稳定,神经元层次较清晰,排列较紧密,尼氏小体数量减少不明显,神经元数量相对表达量增加;与C、D组相比,E组大鼠神经元数量相对表达量增加。3.各组大鼠脑内细胞凋亡变化:TUNEL染色结果显示,与A组相比,B组大鼠凋亡细胞相对表达量增加;与B组相比,C、D、E组大鼠凋亡细胞相对表达量减少;与C、D组相比,E组大鼠凋亡细胞相对表达量减少。4.各组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10的表达:(1)ELISA法结果显示,与A组相比,B组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6浓度增加,IL-4、IL-10浓度减少;与B组相比,C、D、E组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6浓度减少,IL-4、IL-10浓度增加;Barasertib化学结构与C、D组相比,E组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6浓度减少,IL-4、IL-10浓度增加。(2)免疫荧光结果显示,与A组相比,B组大鼠海马TNF-α、IL-1β相对表达量增加,IL-4、IL-10相对表达量减少;与B组相比,C、D、E组大鼠海马TNF-α、IL-1β相对表达量减少,IL-4、IL-10相对表达量增加;与C、D组相比,E组大鼠海马TNF-α、IL-1β相对表达量减少,IL-4、IL-10相对表达量增加。(3)实时定量PCR结果显示,与A组相比,B组大鼠海马TNF-α、IL-1β、IL-6m RNA表达增加;与B组相比,C、D、E组大鼠海马TNF-α、IL-1β、IL-6m RNA表达减少;与C、D组相比,E组大鼠海马TNF-α、IL-1β、IL-6 m RNA表达减少。5.各组大鼠TLR4、My D88、NF-κB的表达:(1)免疫荧光结果显示,与A组相比,B组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB相对表达量增加;与B组相比,C、D、E组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB相对表达量减少;与C、D组相比,E组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB相对表达量减少。(2)实时定量PCR结果显示,与A组相比,B组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB m RNA表达增加;与B组相比,C、D、E组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB m RNA表达减少;与C、D组相比,E组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB m RNA表达减少。(3)WB结果显示,与A组相比,B组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB相对表达量增加;与B组相比,C、D、E组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB相对表达量减少;与C、D组相比,E组大鼠海马TLR4、My D88、NF-κB相对表达量减少。【结论】在行为学方面,B组大鼠学习记忆能力下降,并出现焦虑抑郁等消极情绪;在病理方面,B组大鼠海马区神经元排列不整齐,结构不完整,排列不紧密,神经元数量表达减少,部分胞内尼氏小体减少或消失,凋亡细胞表达增加,TNF-α、ILCeralasertib价格-1β、IL-6表达增加、IL-4、IL-10表达减少、TLR4、My D88、NF-κB表达增加,提示学习记忆能力、AD、炎性因子相互之间有紧密联系。电针疗法可通过下调TLR4/My D88/NF-κB信号通路蛋白的表达影响TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10等炎性因子的表达,减少凋亡细胞的表达,使神经元数量表达增加,提高AD大鼠学习记忆能力,从而有效防治AD。且根据统计结果发现,运用“补肾化痰”思路选取的组合穴疗效优于单穴。1.电针“肾俞”穴、“丰隆”穴可改善Aβ_(25-35)建立的AD模型动物学习记忆能力;2.运用“补肾化痰”治法思路选取的组合穴疗效优于单穴;3.电针“肾俞”穴、“丰隆”穴可改善AD模型动物海马神经元病理损伤、尼氏小体丢失及细胞凋亡;4.电针“肾俞”穴、“丰隆”穴可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路及下游细胞因子表达改善AD模型动物行为学、病理学方面的损伤。