多金属氧酸盐抗宫颈癌细胞增殖的作用研究

目的:使用设计合成的新型多金属氧酸盐(Polyoxometalate,POM)Na_7PW_(11)O_(39),作用于宫颈癌Si Ha细胞,观察其对宫颈癌Si Ha细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:选取宫颈癌Si Ha细胞作为肿瘤细胞模型,依据美国国立癌症研究所(National cancer institute,NCI)抗癌化合物体外筛选的方法,对新合成的多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)进行抗肿瘤活性筛选。按照倍比稀释的方法配制不同浓度的多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)溶液,选用顺铂溶液作为阳性对照,加入相应容积培养液作为空白对照,显微镜下观察多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)作用肿瘤细胞的存活状态并计数;采用CCK8法检测多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)对宫颈癌Si Ha细胞的毒性作用,并计算其半数抑制浓度(Inhibitory Concentration 50,IC_(50))值和宫颈癌Si Ha细胞的增殖抑制率。采用流式细胞技术检测多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)对宫颈癌Si Ha细胞周期的影响;采用Annexin V-FITC/PI荧光染色技术,通过流式细胞技术检测多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)对宫颈癌Si Ha细胞凋亡的影响。应用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-Polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39selleck抑制剂)对高危型人乳头瘤病毒16(Human papillomavirus,HPV16)E6 m RNA表达水平的影响,最后采用Western Blot检测多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)对HPV16 E6蛋白表达的影响。结果:本研究证实多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)对宫颈癌Si Ha细胞增殖具有抑制作用,与顺铂相比差异无统计学意义,并计算出其24h、48h、72h的IC_(50)值分别为419.6、359.5、212.3μmol/L,随时间推移增殖抑制率升高,进一步通过流式细胞仪检测发现多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)在0、212.3、359.5、419.6μmol/L浓度时,处于G0期细胞分别占17.4%、15.7%、5.84%、6.4%,P=0.03;处于G1期细胞分别占20.4%、15%、1.86%、0%,P=0.158;处于G2/M期细胞SB431542体内分别占16.3%、23.6%、57.9%、66%,P=0.045;处于S期细胞分别占45.9%、45.7%、34.4%、6.4%,P=0.000。流式细胞仪检测发现多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)在0、212.3、359.5、419.6μmol/L浓度时,凋亡细胞分别占总细胞的8.9%、17.8%、36.7%、42.5%,P=0.043。采用RT-PCR技术发现在多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)作用下HPV16 E6 m RNA表达水平降低,Western Blot检测结果提示多金属氧酸盐Na_7PW_(11)O_(39)作用宫颈癌Si Ha细胞中HPV16 E6蛋白的表达降低。结论:1.Na_7PW_(11)O_(39)对宫颈癌Si Ha细胞的增殖具有抑制作用,其24h、48h、72h的IC_(50)值分别为419.6、359.5、212.3μmol/L,且具有时间和剂量依赖性。2.流式细胞仪检测发现Na_7PW_(11)O_(39)阻滞medical isotope production于细胞周期中G2/M期,增殖受限。3.流式细胞仪检测发现Na_7PW_(11)O_(39)促进Si Ha细胞凋亡,且发现419.6μmol/L的Na_7PW_(11)O_(39)作用于Si Ha细胞凋亡率最高。4.采用RT-PCR技术发现在Na_7PW_(11)O_(39)作用下宫颈癌Si Ha细胞HPV16 E6的m RNA表达水平降低。5.Western Blot检测结果提示Na_7PW_(11)O_(39)抑制宫颈癌Si Ha细胞中HPV16 E6蛋白的表达。