目的:研究对甲氧基肉桂酸(4-Methoxycinnamic acid,MCA)在烟曲霉菌角膜炎中发挥的治疗作用及潜在机制。方法:1.采用CCAutomated WorkstationsK8实验、细胞划痕实验评估MCA对人角膜上皮细胞(HCECs)和小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)的体外安全性,采用荧光素钠染色技术和Draize评分评估MCA在小鼠角膜的安全性;2.分别使用不同浓度的MCA(0.05-3.2m M)与烟曲霉菌共培养48小时,采用MIC实验评估MCA在体外对烟曲霉生长的抑制作用;建立烟曲霉菌感染的C57BL/6小鼠角膜炎动物模型,给予DMSO(0.01%)或MCA(3.2m M)处理,采用菌落平板计数评估MCA对烟曲霉感染角膜炎的小鼠模型的真菌负荷的影响;3.用不同浓度的MCA(0.4m M、0.8m M、1.6m M)或那他霉素(NATA,1.5μM)处理烟曲霉菌丝,采用生物膜形成抑制实验、碘化丙啶染色评估MCA对烟曲霉生物膜形成及细胞膜完整性的作用,采用细胞壁保护实验、Calcofluor white染色、RT-PCR分析MCA对真菌细胞壁完整性及其生物合成的影响;使用不同浓度MCA-NATA药物组合处理烟曲霉菌,采用微量棋盘稀释法、时间杀伤曲线评估药物组合对烟曲霉生长的抑制作用;4.建立烟曲霉菌感染的C57BL/6小鼠角膜炎动物模型,给予DMSO(0.01%)或MCA(3.2m M)处理,采用裂隙灯照相、临床评分、HE染色评估MCA在体内对于小鼠烟曲霉角膜炎的治疗作用,采用RT-PCR分析和ELISA法检测各组小鼠烟曲霉角膜炎的炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β、i NOS)的m RNA和蛋白表达水平。5.建立烟曲霉刺激的RAW264.7细胞炎症模型,给予DMSO(0.01%)或MCA(0.1m M、0.2m M、0.4Entinostat molecular weightm M)处理8小时或24小时,采用RT-PCR检测模式识别受体Mincle和炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β、i NOS)的m RNA表达水平;采用Western blot、ELISA分析MCA对Mincle、p-syk和炎症因子IL-6、TNF-α蛋白表达的影响;使用Mincle受体激动剂TDB预处理RAW264.7细胞2小时,给予DMSO或MCA处理,采用RT-PCR、Western blot检测各组Mincle、p-syk和炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β、i NOS)的表达水平。结果:1.MCA在低于0.4m M时对于人角膜上皮细胞(HCECs)和小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的生长无明显抑制作用,MCA低于3.2m M时对小鼠角膜无明显毒性;2.MCA在体外从0.4m M开始对烟曲霉菌发挥抑制作用,1.6m M时抑制80%的烟曲霉生长;在烟曲霉感染的C57BL/6小鼠角膜炎模型中,与DMSO组相比,MCA组在感染后第3天菌落计数显著降低。3.与DMSO组相比,MCA处理的烟曲霉生物膜形成减少,细胞膜和细胞壁完整性受到破坏,MCA在1.6m M时达到与NATA组相似的烟曲霉抑制作用;0.4m M的MCA可以下调烟曲霉内细胞壁合成相关因子(Rod A、Rod B)、Rho、Fks和Csh A的m RNA表达;当MCA-NATA组合处理烟曲霉时,0.4m M-0.1875μM和0.4m M-0.375μM的浓度组合能够抑制80%以上的烟曲霉生长,此时FICI≤0.5。4.与DMSO组相比,MCA处理的小鼠角膜在感染后第3、5天炎症反应减轻,临床评分显著降低。5.在RAW264.7细胞模型中,MCA能够下调炎症因子和Mincle的表达;在TDB处理细胞后,与DMSO组相比,MCA组Mincle及下游p-syk的蛋白表达水平明显降低,炎症因子(IL-1β、TNF-α、IL-6和i NOS)的m RNA表达水平下调。结论:MCA能够抑制烟曲霉的生长,MCA与那他霉素联合应用对烟曲霉生长有协同抑制作用,MCA抗真菌机制与破坏细胞膜、抑制生物膜形成及影响细胞壁生物合成及真菌黏附有关;MCA能够减轻感染烟曲霉的角膜炎小鼠的炎症水平并改善预后;MCA通过下调MincBMN 673使用方法le-syk信号通路发挥抗炎作用。