研究背景:胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,其发生与Genetic compensation进展受到幽门螺杆菌感染的影响。研究表明lncRNA可以参与胃癌的发生与发展,并且其表达受到幽门螺杆菌感染及m6A修饰的影响。RNA的m6A修饰可以参与胃癌的发生发展,且课题组前期研究发现幽门螺杆菌可以调控METTL14的表达,提示lncRNA的m6A修饰可能参与幽门螺杆菌介导的胃癌发生过程,本论文就这一问题进行了探究。研究目的:本研究的目的是探索lncRNA的m6A修饰在幽门螺杆菌介导的胃癌发生发展中的关键作用及其相关机制,探寻新的胃癌诊断和治疗靶点。研究方法:通过MeRIP-seq、RNA-seq并结合MeRIP-qPCR和qRT-PCR发现幽门螺杆菌通过METTL14调节lnc-PLCB1的表达;通过核质分离实验以及FISH实验确定lnc-PLCB1的亚细胞定位;通过qRT-PCR、双荧光素酶实验和放线菌素D实验确定METTL14对lnc-PLCB1的调节机制;通过一系列功能实验检测lnc-PLCB1在体外对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响,通过裸鼠皮下成瘤以及尾静脉注射实验探究lnc-PLCB1在体内对胃癌细胞生长以及转移能力的影响;通过pulldown实验、RIP实验以及FISH/IF共染确定lnc-PLCB1下游结合蛋白;通过western blot实验检测lnc-PLCB1对DDX21蛋白水平的影响;通过qRT-PCR与western blot实验探究DDX21对其下游分子CCND1以及Slug的影响,并进行相关表达量回复实验。研究结果:1.幽门螺杆菌通过METTL14影响lnc-PLCB1的表达RNA甲基化免疫沉淀测序(MeRIP-seq)和RNA-seq结果表明幽门螺杆菌感染可以调控胃癌细胞lncRNA的m6A修饰和表达水平。通过对测序结果进一步分析以及筛选发现在胃癌细胞中,幽门螺杆菌可以通过METTL14调控lnc-PLCB1的表达。2、METTL14以m6A依赖的方式调控lnc-PLCB1的表达RNA甲基化免疫沉淀偶联qRT-PCR(MeRIP-qPCR)结果显示在胃癌细胞中过表达METTL14之后可以显著上调lnc-PLCB1的m6A修饰水平;双荧光素酶实验以及过表达METTL14野生及突变型质粒实验结果显示METTL14以m6A依赖的方式影响lnc-PLCB1的表达。3、Lnc-PLCB1在体外抑制胃癌细胞的增殖与迁移在胃癌细胞中干扰lnc-PLCB1对其增殖和迁移具有促进作用,而过表达lnc-PLCB1显示出相反的结果,并且补救实验结果表明METTL14通过lnc-PLCB1发挥抑癌作用。4、下调lnc-PLCB1在动物体内促进胃癌细胞的生长以selleck抑制剂及转移能力稳定敲低lnc-PLCB1后可以促进胃癌细胞在裸鼠体内的生长和转移能力。5、转录因子IRF2促进lnc-PLCB1的表达并受到幽门螺杆菌感染的调控转录因子IRF2可以特异性地增强lnc-PLCB1的启动子活性,并调节lnc-PLCB1的表达,同时其自身表达也受到幽门螺杆菌感染的调控;补救实验发现IRF2可以抑制幽门螺杆菌对lnc-PLCB1的抑制效果。6、Lnc-PLCB1结合DDX21蛋白并通过其发挥抑癌作用Lnc-PLCB1可以与DDX21蛋白特异性结合,并且lnc-PLCB1通过DDX21发挥作用;敲低DDX21可以在体外抑制胃癌细胞的增Bucladesine采购殖和迁移能力,补救实验表明lnc-PLCB1通过DDX21蛋白抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力。7、Lnc-PLCB1通过下调DDX21蛋白水平进而下调CCND1和Slug的表达Western blot以及qRT-PCR实验表明lnc-PLCB1可以下调DDX21的蛋白水平却不影响DDX21的mRNA水平;而DDX21又可以促进CCND1以及Slug的表达,补救实验表明lnc-PLCB1通过DDX21下调CCND1以及Slug的表达。研究结论:幽门螺杆菌感染通过IRF2的转录调节和METTL14介导的m6A修饰导致lnc-PLCB1的表达下调进而促进DDX21蛋白水平的升高,最终上调CCND1和Slug,促进胃癌的发生发展。