目的:为进一步提高植物雌激素毛蕊异黄酮的溶解性和生物利用度,对毛蕊异黄酮分子结构进行化学修饰,并从中筛选出抗Erastin卵巢癌活性更强的新型毛蕊异黄酮衍生物。方法:基于药物拼接原理,以毛蕊异黄酮为原料,在4-二甲氨基吡啶(DMAP)、三乙胺的作用下,通过与各种酰氯缩合得到毛蕊异黄酮衍生物H1-H10,并采用红外光谱、核磁共振、质谱进行结构验证;采用CCK8法检测各目标化合物在体外对于卵巢肿瘤细胞株增殖的影响,并从中筛选出抗卵巢肿瘤效果最好的H10为研究对象进行后续研究。采用平板克隆实验检测目标化合物H10对卵巢癌细胞株A2780、SKOV3克隆形成能力的影响;采用流式细胞术检测目标化合物H10对卵巢癌细胞株A2780、SKOV3细胞周期和凋亡的影响;采用划痕实验检测目标化合物H10对卵巢癌细胞株A2780、SKOV3迁移能力的影响;采用Transwell实验检测目标化合物H10对卵巢癌细胞A2780、SKOV3侵袭能力的影响;采用TMT定量蛋白质组学技术检测目标化合物H10作用于卵巢癌细胞SKOV3相关的差异蛋白;采用Western Blot实验检测目标化合物H10对铁死亡蛋白GPX4和周期蛋白CCKN1B、CDK1、CDC20和CCNB1表达水平的影响。结果:以毛蕊异黄酮为先导化合物,共合成了10个毛蕊异黄酮衍生物H1-H10,并采用~1NSC 119875体内实验剂量H NMR、~(13)C NMR、IR、MS等手段对目标化合物进行结构表征。H1-H10对于卵巢癌细胞增殖均表现出不同程度的抑制作用,其中以目标化合物H10作用于卵巢癌细胞株SKOV3、A2780的IC50值最低(SKOV3,IC50=2.64μM;A2780,IC50=5.23μM),且优于毛蕊异黄酮和阳性对照他莫昔芬,而H10其对人正常卵巢上皮细胞IOSE80的IC50值要高于他莫昔芬(17.51μM vs 15.29μM)。相一致地,H10可呈浓度依赖性显著抑制卵巢癌细胞SKOV3、A2780的克隆形成能力。同时,目标化合物H10可诱导卵巢癌细胞A2780、SKOV3的凋亡,并将癌细胞的生长阻滞于G0/G1期。另一方面,目标化合物H10呈浓度依赖性抑制卵巢癌SKOV3、A2780细胞的迁移和侵袭。进一步TMT定量蛋白组学分析表明,H10处理组和对照组间存在88个差异蛋白(上调21个,下调67个)。GO(Gene Ontology)分析表明,差异蛋白主immune rejection要定位于细胞核、细胞质、染色体乘客复合体,涉及大分子复合物结合、ATP结合、酶结合等分子功能,主要参与核分裂、细胞周期、有丝分裂等生物学过程。KEGG分析显示差异蛋白主要参与了9条信号通路,其中细胞周期和卵母细胞减数分裂相关通路中差异表达蛋白数量相对较多。H10呈浓度依赖性显著抑制铁死亡蛋白GPX4和周期蛋白CCKN1B、CDK1、CDC20和CCNB1的表达。结论:通过对毛蕊异黄酮的结构修饰,合成制备了H1-H10多个目标化合物,并筛选出抗卵巢癌活性最佳的毛蕊异黄酮衍生物H10。该衍生物可显著抑制卵巢癌细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,降低癌细胞迁移和侵袭能力,其作用机制可能涉及对癌细胞中铁死亡和细胞周期等信号通路的调控。