背景急性白血病(AL)是一种恶性克隆性肿瘤,具有发病率较高,临床治疗难度较大等特点,急性髓系白血病(AML)是AL中较为常见的一种,目前临床治疗AL的方式以化疗主,可在一定程度上缓解患者病情,但疗效有限且极易复发,部分患者发展为难治性AML,为提高难治性AML患者的治疗效果,减少病情复发,积极寻求有效的临床治疗方法十分重要。沙利度胺(TLD)可抑制血管的增生,提高调节免疫作用,临床试验中也取得较好疗效,本次就沙利度胺与化疗联合治疗难治性AML进行研究观察,以期为难治性AML患者提供更为有效的治疗方案。目的本研究选用TLD联合化疗为治疗方案,观察该方案对难治性AML患者的临床效果进行分析与研究,同时探究TLD联合化疗对难治性AML细胞及HBiomass pretreatmentL-60/VCR细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和表达P-糖蛋白(P-g P)的影响。方法1.选取2021年09月～2022年09月期间安阳市人民医院收治的40例难治性AML患者,根据随机数字表法将其分为化疗组及联合组,每组各20例,另取同期体检健康者20例,为对照组。化疗组采用As_2O_3进行化疗,取10ml0.1%As_2O_3注射液,注入500ml5%葡萄糖溶液,持续滴注4～6h,1次/d,联合组在化疗的基础上口服沙利度胺,100mg/d,两组均连续治疗4个月。治疗结束后,评估患者治疗效果并计算治疗有效率,观察难治性AML患者治疗期间出现的毒副作用,评估其的安全性,同时采用Elisa试剂盒检测检测患者血浆VEGF浓度。2.培养HL-60/VCR细胞,并设置A、B、C、D、E、F、G、H组,A组不加入任何药物,B、C、D组加入不同剂量TLD(75ug/ml、150ug/ml、300ug/ml),E、F、G组加入不同剂量的As_2O_3(1umol/l、5umol/l、25umol/l),H组同时加入300ug/ml的TLD及25umol/l的As_2O_3。采集患者骨髓液,从中分离BMMNC细胞,于体外进行培养,设置a、d、f、h组,a组不加入任何药物;d组加TLD 300ug/ml,f组加入As_2O_35umol/l,h组同时加入300ug/ml的TLD及25umol/l的As_2O_3。3.采用双抗体夹心法,按照Elisa试剂盒分别检测不同时间、不同药物浓度的TLD及As_2O_3对HL-60/VCR细胞及BMMNC细胞上清液VEGF浓度的影响。4.采用流式细胞仪检测不同时间、不同浓度的TLD及As_2O_3对HL-60/VCR细胞及BMMNC细胞表面P-g P表达率的影响。5.统计学方法:实验数据分析采用SPSS 11.5软件,多个样本比较采用方差分析,实验数据用均数士标准差或百分比表示,两两分别行t检验及χ~2检验,以P<0.05表明差异有显著性。结果1.化疗组,CR2例,PR4例,NR14例,联合组CR 8例,PR 6例,NR 6例,联合组治疗有效率为70%,高于对照组的30%(P<0.05);2.化疗组不良反应主要为恶心呕吐、脱发、肝肾功能损伤等,联合组增加TLD后,出现嗜睡、腹胀等不良反应。两组难治性AML患者各项不良反应发生情况差异无显著性(P>0.05);3.难治性AML患者及健康体检者血浆VEGF浓度分别为:(339.71±24.46)ng/L,(122.70±15.30)ng/L,两组血浆VEGF浓度相比,差异有显著性(t=33.638,P<0.01);4.与培养48h的HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度比较,C、D、E、F、G、H组培养72h HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度均降低(P<0.01)。未加药组、单药组、联合用药组与比较:培养48h后,与A组比较,B、C、D、E、F组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度差异无显著性(P>0.05),G组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度降低(P<0.05);H组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度降低(P<selleck合成0.01)。培养72h后,与A组比较,B组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度差异无显著性(P>0.05),C、D、E组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度降低(P<0.05),F、G、H组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度降低(P<0.01)。联合用药组及高剂量单药组比较:培养48h后,与H组比较,D组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度升高(P<0.01),G组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度差异无显著性(P>0.05),培养72h后,与H组比较,D、G组HL-60/VCR细胞上清液VEGF浓度升高(P<0.05);5.各组48h的HL-60/VCR细胞膜表面P-g P表达率与72h大VP-g P表达率比较,差异无显著性(P>0.05)。培养48h、72h后,未加药组、单药组及联合用药组HL-60/VCR细胞膜表面P-g P表达率比较,差异均无显著性(P>0.05);6.与培养48h的BMMNC细胞上清液VEGF浓度比较,d、f、h组培养72h的BMMNC细胞上清液VEGF浓度均降低(P<0.01)。未加药组、与单药组及联合用药组比较:培养48h、72h后,与a组比较,d、f、h组BMMNC细胞上清液VEGF浓度降低(P<0.01)。联合用药组与单药组比较:培养48h、72h后,与h组比较,d、f组BMMNC细胞上清液VEGF浓度升高(P<0.01);7.各组培养48h、72h BMMNC细胞膜表面P-g P表达率差异无显著性(P>0.05);培养48h、72h后,与a组比较,d、f、h组BMMNC细胞膜表面P-g P表达率差异均无显著性(P>0.05)。结论1.TLD联合化疗能够提高难治性AML患者治疗有效率,同时未增加不良反应率,安全有效;2.难治性AML患者血浆VEGF浓度高于健康者,提示白血病细胞可以大量分泌VEGF;3.TLD和As_2O_3均能抑制HL-60/VCR及BMMNC细胞VEGF分泌的能寻找更多力,联合使用,抑制效果更明显;TLD和AS2O3未影响HL-60/VCR和BMMNC细胞膜上P-g P的表达能力;4.难治性AML患者分离出的BMMNC细胞中,血清VEGF的含量与细胞膜表面P-g P表达率能够作为监测难治性AML病情和判断预后的指标。