【目的】研究灯盏乙素对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导损伤的单核/巨噬细胞RAW264.7增殖和泡沫化的影响,检测灯盏乙素干预后对CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα/β,IKB-α及NF-κB p65的m RNA及蛋白表达水平的影响,探讨灯盏乙素对巨噬细胞CD40-CD40L/TRAF6信号通路的调控作用。【方法】1.体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制ox-LDL诱导损伤模型。2.实验分组:正常对照组,ox-LDL损伤模型组,不同浓度(6.25,12.5,25,50,100μmol/L)灯盏乙素组,辛伐他汀组(10μmol/L),DRI-C21045组(CD40-CD40L通路抑制剂,17.1μmol/L),DRI-C21045+灯盏乙素组(17.1μmol/L DRI-C21045+100μmol/L灯盏乙素)。3.CCK-8法检测灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞增殖的影响。4.细胞胆固醇酯含量测定试剂盒和油红O染色法检测灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞泡沫化的影响。5.RT-q PCR法检测RAW264.7细胞的CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα,IKB-α及NF-κB p65的m RNA表达。6.免疫荧光方法检测RAW264.7细胞的CD40,CD40L,TRAF6和TAK1的蛋白表达情况。7.Western blot检测RAW264.7细胞的CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα/β,IKB-α,NF-κB p65及p-NF-κB p65的蛋白表达。【结果】1.细VE-822研究购买胞增殖实验结果显示:与正常对照组比较,给予75 mg/L的ox-LDL诱导损伤的模型组RAW264.7细胞的增殖明显增加(P<0.01),ox-LDL诱导损伤模型复制成功;与模型组比较,灯盏乙素干预后,灯盏乙素6.25μmol/L和12.5μmol/L组与模型组的细胞增殖情况无明显区别(P>0.05),而灯盏乙素25,50及100μmol/L组细胞的增殖均降低,其中灯盏乙素25μmol/L组(P<0.05),灯盏乙素50μmol/L组(P<0.01),灯盏乙素100μmol/L组(P<0.01),而辛伐他汀组,DRI-C21045组和DRI-C21045+灯盏乙素组的细胞增殖也有明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与DRI-C21045组比较,DRI-C21045+灯盏乙素组的细胞增殖略有降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。2.细胞内胆固醇酯含量检测结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞内胆固醇酯含量显著升高(P<0.01),ox-LDL诱导损伤模型复制成功;与模型组比较,灯盏乙素干预后,灯盏乙素6.25,12.5及25μmol/L组细胞内胆固醇酯含量与模型组无明显差异(P>0.05),灯盏乙素50μmol/L组和灯盏乙素100μmol/L组细胞内胆固醇酯含量显著降低(P<0.01),且辛伐他汀组,DRI-C21045组和DRI-C21045+灯盏乙素组细胞内胆固醇酯含量均显著降低(P<0.01);与DRI-C21045组相比,DRI-C21045+灯盏乙素组细胞内胆固醇酯的含量略有降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。3.油红O染色检测结果显示:与正常对照组比较,模型组RAW264.7细胞红染区域明显增加,染色程度加深(P<0.01),ox-LDL诱导损伤模型复制成功;与模型组比较,灯盏乙素干预后,灯盏乙素6.25,12.5μmol/L组细胞红染区域和红染程度均无明显变化(P>0.05),而灯盏乙素25,50,100μmol/L组细胞红染区域减少,染色程度减轻(P<0.01),且辛伐他汀组,DRI-C21045组,DRI-C21045+灯盏乙素组细胞红染区域明显减少,染色程度明显减轻(P<0.01)。与DRI-C21045组相比,DRI-C21045+灯盏乙素组细胞红染程度无明显变化(P>0.05)。4.RT-q PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα和NF-κB p65 m RNA表达均明显升高(P<0.01),而IKB-αm RNA表达降低(P<0.01);与模型组比较,灯盏乙素25,50,100μmol/L组,辛伐他汀组与DRI-C21045组的CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα和NF-κB p65 m RNA的表达均降低(P<0.01或P<0.05),而IKB-αm RNA的表达增加(P<0.01或P<0.05)。5.免疫荧光结果显示:与正常对照组比较,模型组CD40,CD40L,TRAF6,TAK1蛋白表达均明显增强(P<0.01);与模型组比较,灯盏乙素25,50,100μmol/L组,辛伐他汀组与DRI-C21045组的CD40,CD40L,TRAF6,TAK1蛋白表达均有不同程度的减少(P<0.01或P<0.05)。6.Western blot结果显示:与正常对照组比较,模型组CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα/β和p-NF-κB p65蛋白表达均升高(P<0.01),IKB-α蛋白表达降低(P<0.01),而NF-κB p65蛋白表达则无明显变化(P>0.05);与模型组比较,灯盏乙素25,50,100μmol/L组,辛伐他汀组与DRI-C21045组的CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα/β和p-NF-κB p65蛋白表达均有不同程度的降低(P<0.01或P<0.05),IKB-α蛋白表达升高(P<0.01或P<0.05),而NF-κB p65蛋白表达无明显变化(P>0.05)。【结论】1.灯盏乙素能够明显抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞RAW264.7的异常增殖和泡沫化。Belnacasan溶解度2.灯盏乙素electric bioimpedance能够明显下调ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα和NF-κB p65的m RNA表达水平,上调IKB-α的m RNA表达水平。3.灯盏乙素能够明显下调ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中CD40,CD40L,TRAF6,TAK1,IKKα/β及p-NF-κB p65蛋白的表达水平,上调IKB-α蛋白的表达水平。4.灯盏乙素对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞的异常增殖和泡沫化程度的抑制作用与CD40-CD40L/TRAF6通路的调控密切相关。