疥螨(Sarcoptes scabiei,S.scabiei)是一种人畜共患的寄生虫,主要寄生在哺乳动物皮肤表皮层内。疥螨广泛分布且能感染一百多种哺乳动物,但宿主物种间差异和疥螨亚种间差异会导致不同的临床发病症状和部位。仅仅是人类的疥螨病就分为普通疥螨病和痂皮型疥螨病等。此外,由于疥螨感染早期对宿主的影响不明显(免疫逃避或抑制),通常在疥螨严重感染后或发生严重继发感染后才发现并确诊该疾病,从而导致宿主错过最佳治疗时间。目前,对于动物疥螨病的病理学研究主要集中在疥螨感染与发病的中后期,对其感染与发病不同时期的病理学特征及其致病机制尚缺乏系统的研究。本研究较为系统地观察了疥螨(兔亚种)人工感染家兔后的临床症状、血液生理指标、抗体、病理学特征,并对其致病机制进行了探讨,取得的研究结果如下:1.兔人工感染疥螨后临床症状观察、血液生理指标及抗体测定疥螨是危害养兔业的群发性疾病,系统观察家兔人工感染疥螨后的发病过程、测定血液生理指标及抗体变化,为兔疥螨病的诊断与防控提供重要参考。用疥螨人工感染10只家兔,观察感染前到感染严重阶段(未感染、感染6 h、12 h、3 d、1 w、2 w、3 w、4 w、5 w、6 w、7 w和8 w)的临床变化(瘙痒指数、红肿指数、痂皮面积、体表痂皮面积百分比、痂皮面积和程度指数(CASI)),并采血检测血液生理指标和特异性Ig G。我们发现兔感染疥螨6 h后脚趾出现红肿、CASI评分显著升高;感染1 w后脚趾出现痂皮、各项临床指标都显著升高;感染2 w特异性Ig G显著升高;感染7 w后耳缘和嘴鼻有零星的痂皮。结果autopsy pathology表明兔疥螨病发病部位主要是脚趾、嘴鼻和耳缘,CASI是评价兔疥螨病发病程度的灵敏指标。2.兔人工感染疥螨后病理学观察疥螨是危害养兔业的群发性疾病。为了了解家兔感染疥螨后不同时期家兔的临床发病特点以及皮肤、肾脏和心脏的组织病理和超微病理变化,本实验将104只兔,分为13个组,即对照组(control)、疥螨感染6 h组(6 hpi)、感染12 h组(12 hpi)、感染1 d组(1dpi)、感染3 d组(3 dpi)、感染1 w组(1 wpi)、感染2 w组(2 wpi)、感染3 w组(3 wpi)、感染4 w组(4wpi)、感染5 w组(5 wpi)、感染6 w组(6 wpi)、感染7 w组(7 wpi)和感染8 w组(8 wpi)。定时剖杀,采集兔皮肤、心脏和肾脏,观察并评分统计其组织病理变化,观察皮肤的超微结构变化。我们发现感染疥螨6 h后皮肤超微结构显示线粒体空泡;感染1 d时皮肤表皮显著增厚;感染1 w时脚趾出现痂皮和角化异常。结果表明疥螨感染会导致皮肤线粒体损伤、表皮层增厚和角化异常。该研究为疥螨对兔致病性的系统研究提供了详细的基础数据。3.兔人工感染疥螨后皮肤Toll样受体基因(TLRs)转录水平分析在临床研究结果中,我们发现兔感染疥螨后先表现出炎症和瘙痒,而TLRs在瘙痒,炎症和感染性疾病的发病机制中起着至关重要的作用。为了解疥螨感染兔后不同时期皮肤TLRs基因转录水平变化,本实验将64只兔,分为8个组,即对照组(control)、疥螨感染6 h组(6 hpi)、感染12 h组(12 hpi)、感染1 d组(1dpi)、感染3 d组(3 dpi)、感染1 w组(1 wpi)、感染4 w组(4 wpi)和感染8 w组(8 wpi)。采集疥螨感染部位的皮肤组织,利用荧光定量PCR检测在不同时期疥螨感染皮肤中TLRs基因((TLR1-6、TLR8-12))的转录水平变化情况,并用2~(-△△Ct)法计算TLRs基因的相对表达量。结果表明兔皮肤TLR3表达升高有利于皮肤修复,但会引起瘙痒;TLR8表达升高促进皮肤通透性有利于疥螨进食,减少宿主的瘙痒感,导致皮肤增生;TLR9表达上调可能有利于疥螨种群的建立;TLR12表达升高有利于宿主抵御疥螨的入侵。该研究为探讨疥螨导致宿主皮肤瘙痒和炎症的发病机制提供了思路和数据。CL 3189524.兔人工感染疥螨后皮肤凋亡和角化相关基因的研究在病理研究结果中,我们发现兔感染疥螨后皮肤有明显的增厚和角化过度的现象,但关于调控皮肤凋亡和角化的具体机制仍未被阐明。本实验将64只兔,分为8个组,即对照组、疥螨感染6 h组(6 hpi)、感染12 h组(12 hpi)、感染1 d组(1dpi)、感染3 d组(3 dpi)、感染1 w组(1 wpi)、感染4 w组(4 wpi)和感染8 w组(8 wpi)。用实时荧光定量PCR(q RT-更多PCR)检测感染部位皮肤凋亡和角化相关基因的转录水平,用免疫组化检测Bcl-2蛋白分泌情况,TUNEL染色检测皮肤凋亡程度。我们发现皮肤凋亡程度随疥螨感染时间升高;keratin 1和keratin 5的转录水平显著减少;Bcl-2蛋白分泌在感染12 h、1 w和8 w时显著升高。结果表明Bcl-2,caspase-3、caspase-8和caspase-10参与疥螨入侵导致的皮肤凋亡,caspase-14、keratin 1和keratin 5参与了疥螨入侵导致的皮肤角化异常。研究进一步了解疥螨在不同感染时期对皮肤凋亡和角化的影响。