芹菜素通过AMPK/mTOR通路对肺癌A549细胞自噬的影响

目的:探讨芹菜素(Apigenin,APG)对肺癌A549细胞自噬的影响及其与腺苷单磷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/m TOR)信号通路的关系。方法:体外培养人肺癌A549细胞作为实验对象。1.将肺癌A549细胞分为5组:空白对照组(0μmol/L APG)和20、40、80、160μmol/L APG实验组,采用CCK8法测定芹菜素处理以上5组24、48、72h后观察A549细胞增殖的变化,分别计算作用24、48、72h后的IC50值,根据IC50值,选择合适浓度及时间开展后续实验。2.根据实验1结果,通过MDC染色法测定0、20、40、80μmol/L APG影响肺癌A549细胞自噬的情况,并计selleck算各组积分光密度值(IOD),采用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和P62表达情况。3.采用Western blot法测定0、20、40、80μmol/L APG对肺癌A549细胞AMPK/m TOR通路关键蛋白p-AMPKα、AMPKα、p-m TOR、m TOR表达水平的影响。4.使用AMPK抑制剂Compound C预处理A549细胞后再予以APG干预,MDC法测定细胞自噬情况,Western blot法测定自噬相关蛋白和AMPK/m TOR通路关键蛋白的变化情况。结果:1.相比于空白对照组,20、40、80、16Flow Antibodies0μmol/L APG组均能抑制A549细胞增殖,并呈浓度依赖关系(P<0.05);20、40、80μmol/L芹菜素组随作用时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加(VE-822P<0.05),呈时间依赖关系。而160μmol/L芹菜素组培养48及72h的细胞增殖抑制率显著高于24h(P<0.05),但培养48与72h之间的细胞增殖抑制率无统计学差异(P>0.05),160μmol/L APG组在一定时间内呈现时效关系。其24、48和72h的IC50值分别为128.13、52.18、24.03μmol/L,后续选择0、20、40、80μmol/L APG作为实验浓度,作用时间为48h。2.与空白对照组比较,各浓度APG组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡随APG浓度升高依次增多(P<0.05),各组IOD值分别为85.65±7.29,489.63±7.43,2542.17±103.11,8457...