背景动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症和脂质沉积性疾病,而血管损伤是AS病理进程中的关键环节。研究表明,葛根素可抑制AS进程,而其机制有待深入探究。本研究旨在探讨葛根素是否通过调控S1P和DOK3而抑制血管损伤,从而发挥抗AS作用。本研究通过高脂饮食联合维生素D3注射与球囊损伤建立AS大鼠模型,在体探讨葛根素是否通过调控S1P和DOK3及其下游信号而抑制AS大鼠血管损伤。目的明确葛根素是否通过调控S1P/DOK3/JNK/P38信号抑制氧化应激性血管功能损伤及血管衰老,从而缓解AS。方法(1)为探究葛根素对AS大鼠的作用及其下游信号,我们使用高脂饮食联合维生AZD1152-HQPA说明书素D3注射与球囊损伤诱导AS模型组。进行油红O染色和苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色检测动脉粥样硬化大鼠颈动脉斑块生成情况;体外孵育离体血管环实验检测大鼠降主动脉血管环内皮依赖性舒张(Endothelium-dependent relaxation,EDR)功能;试剂盒检测氧化应激指标;Western Blotting检测NOX2、NOX4、p-JNK、p-P38、S1P、DOK3的表达情况;SA-β-gal染色检测细胞衰老情况;免疫组化、免疫荧光检测S1P、DOK3、p-JNK、p-P38的表达情况;q RT-PCR检测S1P、DOK3、p-JNK、p-P38的表达情况。(2)免疫荧光和Western Blotting检测各分组人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothPrimary mediastinal B-cell lymphomaelial cells,HUVECs)中S1P、DOK3、p-JNK、p-P38的表达。(3)为进一步确证DOK3的作用,使用DOK3敲除小鼠,免疫荧光和Western Blotting检测各分组小鼠颈动脉中S1P、DOK3、p-JNK、p-P38的表达。结果(1)使用葛根素后,动脉粥样硬化斑块面积显著缩小,颈动脉内皮层结构显著改善,颈动脉衰老细胞显著减少,且显著改善降主动脉的EDR功能;葛根素和FTY720联合MC3 IC50干预时,葛根素的上述保护作用相对减弱。(2)葛根素能够显著升高NO和SOD水平,降低MDA水平,并显著抑制NOX2和NOX4表达,表现良好的干预能力。葛根素和FTY720联合干预时,其对氧化应激指标的调控作用相对减弱。(3)葛根素可显著促进S1P表达并抑制DOK3、p-JNK、p-P38表达;葛根素和FTY720联合干预时,葛根素对以上指标的调控作用相对减弱。(4)分子对接结果提示葛根素与S1P氨基酸残基的结合能为-6.32 kcal/mol,两者可能存在相互作用。(5)在HUVECs中,葛根素可显著促进S1P表达,抑制DOK3、p-JNK、p-P38表达;干扰S1P表达后,葛根素可显著升高DOK3、p-JNK和p-P38表达;干扰DOK3后,葛根素可显著升高p-JNK和p-P38表达,但不影响葛根素对S1P的促进作用。(6)在DOK3敲除小鼠中,葛根素可显著促进S1P表达,但对p-JNK和p-P38的表达无显著影响。结论葛根素能过通过调控S1P/DOK3/JNK/P38信号通路抑制氧化应激性血管功能损伤,从而发挥抗AS作用,改善疾病的进程。