随着生活水平的日益提高,人们对食品的安全性也日渐重视。由于食品中化学危害物检出的现象日趋严重,消费者的健康受到了极大的威胁,而目前的仪器分析方法难以满足现场高通量检测需求。因此,建立一种高效、快速的监测手段具有重要的现实意义和市场应用价值。本研究以食品中的五Laser-assisted bioprinting种化学危害物为研究对象,包括保健食品中非法添加的四种药物(呋塞米、托拉塞米、芬氟拉明、巴比妥类药物)以及食品中不规范使用的植物生长调节剂(脱落酸),设计合成了针对上述化合物的五种半抗原,制备获得了五种单克隆抗体,以此为基础开发了酶联免疫吸附分析方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和胶体金免疫层析分析方法,成功应用于分析和检测食品中的五种化学危害物。针对研究对象的化学结构,设计并合成半抗原。托拉塞米半抗原通过充分暴露磺酰脲基,在苯环上引入羧基制备获得;芬氟拉明半抗原设计通过以结构中的三氟甲基作为抗原表位进行暴露,在远离抗原表位的亚氨基结构处引入羧基制备获得半抗原;巴比妥类药物半抗原设计通过最大限度保留巴比妥类药物共同的丙二酰脲环状结构,以苯巴比妥作为核心目标结构,延长碳链并引入羧基作为活性基团;呋塞米、脱落酸自身含有活性基团羧基,直接作为半抗原,通过碳二亚胺法活化活性基团羧基,与载体蛋白偶联制备完全抗原。基于制备成功的完全抗原,经过动物免疫、血清筛选、杂交瘤细胞融合获得五株杂交瘤细胞株,通过腹水制备与抗体纯化获得五种单克隆抗体,分别为:呋塞米1B1、托拉塞米2H1、芬氟拉明4B10、苯巴比妥4F6、脱落酸2G1,亚型鉴定分别属于IgG2b、IgG2a、IgG2a、IgG2b、IgG2b,亲和力常数K_D分别为4.58×10~(11)、9.36×10~(10)、4.07×10~(10)、4.47×10~(10)、4.29×10~(10)L/mol,均属于高亲和力抗体。在优化条件下,基于上述五种抗体分别建立了针对呋塞米、托拉塞米、芬氟拉明、巴比妥类药物、脱落酸的ELISA方法。呋塞米1B1、托拉塞米2H1、芬氟拉明4B10、脱落酸2G1为特异性抗体,交叉结果表明对其他结构类似物交叉反应小于1%。呋塞米半数抑制浓度(IC_(50))为0.26 ng/m L,线性范围为0.06～1.19 ng/m L;托拉塞米IC_(50)为0.80 ng/m L,线性范围为0.19～3.35 ng/m L;芬氟拉明IC_(50)为0.34 ng/m L,线性范围为0.12～0.97 ng/m L,脱落酸IC_(50)为0.65 ng/m L,线性范围为0.25～1.68 ng/m L。苯巴比妥4F6为群选性抗体4F6,对苯巴比妥IC_(50)为17.37 ng/m L,线性范围4.63～65.15 ng/m L;对戊巴比妥IC_(50)为23.84 ng/m L,线性范围6.17～92.15 ng/m L;对异戊巴比妥IC_(50)为18.76 ng/m L,线性范围6.83～51.51 ng/m L;对司可巴比妥IC_(50)为21.71 ng/m L,线性范围5.62～83.84 ng/m L。通过添加回收率的测定对所建立的ELISA方法的准确度进行评估,样本以甲醇进行提取,通过优化后的ELISA缓冲液稀释后检测。在保健食品片剂和胶囊中测定呋塞米的回收率为94.0%～101.4%,托拉塞米回收率为98.9%～108.0%,芬氟拉明回收率为96.0%～101.0%,巴比妥类药物回收率为90.0%～107.4%;在果蔬样本中测定脱落酸的回收率为89.0%～106.2%。测定结果均与LC-MS/MS结果一致,所建立的方法准确度较好,可以应用于实际样本中五种化学危害物的分析测定。利用制备的五Telaglenastat抑制剂种单克隆抗体为原料,优化抗原、抗体浓度,开发了胶体金免疫层析试纸条,建立了实际样本中呋塞米、托拉塞米、芬氟拉明、巴比妥类药物、脱落酸的免疫层析快速检测法。用免疫层析试纸条检测保健食品样本中的呋塞米、托拉塞米、芬氟拉明、巴比妥类药物,脱落酸在果蔬Dolutegravir样本中测定。其中保健食品和蔬菜样本通过0.01 M PBS(含20%甲醇)提取后用样本稀释液(0.01 M PBS,p H 7.4,含1%ON-870)稀释两倍测定,水果样本通过0.01 M PBS(含20%甲醇)提取后调节p H至中性,稀释3倍后测定。结果表明呋塞米、托拉塞米、芬氟拉明消线值均为10 ng/g,苯巴比妥消线值为100 ng/g,戊巴比妥和异戊巴比妥消线值为500 ng/g,司可巴比妥消线值为200 ng/g,脱落酸消线值为10 ng/g,能够满足实际检测要求。结果表明建立的免疫层析分析方法可以有效应用于食品中对呋塞米、托拉塞米、芬氟拉明、巴比妥类药物、脱落酸的高通量、快速筛查。