黑曲霉耐热型葡聚糖酶纤维素结合结构域的替换与融合体酶性质

该文旨在通过更换纤维素结合结构域(cellulose binding domain,CBD)的方式探索获得具有纤维素水解能力的耐热型葡聚糖酶的方法。黑曲霉(Aspergillus niger)来源的葡聚糖酶AnEglA6具有优越的耐热性能,在禽类饲料生产中具有应用前景。通过更换不同家族来源Undetectable genetic causes的碳水化合物结合结构域(carbohydrate binding module,CBM)编码区,构建了融合体葡聚糖酶基因,分别在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中进行异源表达。AnEglA6催化结构域与分别来源于嗜热菌(Caldicellulosiruptor kristjanssonii)和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)的木聚糖酶的底物结合结构域CBM9、CBM10结合获得的融合体AG-221研究购买酶AnEg-CBM9和AnEg-CBM10均具有较高的纤维素水解能力,并且底物Baf-A1范围进一步扩大,对微晶纤维素也具有一定的水解能力。AnEg-CBM10热稳定性有显著的提高,在85 ℃下酶活半衰期达到40 min左右,能短时耐受90 ℃高温。融合体酶AnEg-CBM10是一种热稳定性进一步提高、具有纤维素水解能力的新型葡聚糖酶。