磷酸化作为最重要的翻译后修饰之一,在信号转导、细胞分裂、细胞骨架动力学和LGX818供应商新陈代谢中起着至关重要的作用。蛋白质磷酸化主要发生在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸三种氨基酸上,其相对比例为1800:200:1。异常磷酸化与疾病有关,常被用作生物标志物。基于质谱的蛋白质组学为磷酸化蛋白质分析提供了非常重要的工具。除了难以识别生理样品中的肽段外,磷酸肽的电离效率和浓度低,以及非磷酸肽引起的显著干扰,使得基于质谱的直接磷酸肽检测更加困难。尽管有针对不同磷酸化形式的富集方法,但缺乏一种仅针对单个磷酸肽的方法。分子印迹聚合物(MIPs)是一种能够通过功能修饰与特定分子结合的识别工具。如今,MIPs广泛应用于各个领域,如传感、分离Extra-hepatic portal vein obstruction、催化、疾病诊断、生物成像等;由于制备简单、稳定性好和成本低,MIPs近年来逐渐取代抗体成为磷酸化蛋白质组学研究的新方向。在本论文中,利用分子印迹技术制备的纳米材料用于磷酸化肽的选择性识别与富集,主要包括以下三个方面的内容:1.论文首先利用定向印迹的原理验证了本文中印迹材料制备方法的可靠性,即以单磷酸胞GSK2118436纯度苷为模板制备三种分子印迹材料,分别比较这三种合成的MIPs和NIPs对小分子单磷酸胞苷的静态吸附曲线,结果表明定向印迹以及模板洗涤制备材料的印迹效果最佳,也适用于后续肽段与蛋白富集体系。2.通过将Ti O_2和分子印迹相结合,以完整的磷酸肽为模板,UPTES为功能单体,TEOS作为交联剂,两种亲和力可以共同作用以增强对特定磷酸肽的结合亲和力以特异性识别肽序列,这种方式合成的MIPs应用于精确识别具有不同磷酸化形式(丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)的肽。通过MALDI-TOF MS检测,MIPs对标准肽混合物和酪蛋白/牛奶的胰蛋白酶消化物的富集实现了具有不同磷酸化形式(丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)的单个磷酸肽的精确识别。3.利用定向表位印迹的原理,与蛋白有相似序列的磷酸化肽作为“表位”,特异性识别目标蛋白。本文以完整磷酸肽段为模板,材料洗脱后MIPs中形成了含有与目标蛋白同源序列的肽段空腔,利用这一“表位”特异性识别了β-酪蛋白和HSA。