三七根腐病菌茄腐镰刀菌的实时荧光LAMP快速检测方法的建立与应用

根腐病是我国三七(购买BIBW2992Panax notoginseng)种植区高发的一种严重病害，茄腐镰刀菌(Fusarium somultiple mediationlani)是引起三七根腐病的重要病原菌。本研究建立了一套对三七根腐病菌茄腐镰刀菌进行现场快速检测的实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplificationBLZ945研究购买, LAMP)体系。首先通过PCR反应筛选D-氨基酸氧化酶基因(D-amino acid oxidase gene, DAO)为特异性检测茄腐镰刀菌的基因位点，并对该基因设计LAMP反应的特异性引物组并优化其反应条件，其中65℃为最佳反应温度，MgSO_4的最佳浓度为6 mmol/L;dNTPs的最佳浓度为0.6 mmol/L；有环引物存在的情况下，扩增效率更高。分析了LAMP法检测茄腐镰刀菌的灵敏度，模板浓度可低至0.009 pg/μL。最后结合DNA免提法以及钙黄绿素显色法建立了三七根腐病菌茄腐镰刀菌的LAMP现场快速检测技术。本研究为三七种植以及种子种苗交易过程中的根腐致病菌茄腐镰刀菌的快速检测提供技术支撑。