基于Wnt/β-catenin信号通路探究JW74对神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路,探究JW74对神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)生物学功能的影响。方法:采用CCK-8法检测JW74对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响,并确定JW74的半抑制Dibutyryl-cAMP化学结构浓度(IC50)。人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分为三组:NC组、DMSO组和JW74组(19.07μg/m L JW74处理)。通过划痕愈合实验和transwell实验分别检测SK-N-SH细胞的迁移能力和侵袭能力。通过流式细胞仪分析检测SK-N-SH细胞的细胞周期和凋亡情况。通过q RT-PCR检测SK-N-SH细胞中EMT相关标志物上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail和Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、C-myc和Cyclin D1的m RNA相对表达。通过Western blot检测SK-N-SH细胞中EMT相关标志物上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail和Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、C-myc和Cyclin D1的蛋白表达。结果:与NC组或DMSO组相比,JW74组SK-N-SH细胞的增殖能力被抑制,JW74对SK-N-SH细胞的IC50为1LY-188011体外9.07μg/m L;JW74组SK-N-SH细胞的迁移能力(P<0.05)和侵袭能力降低(P<0.05);JW74组SK-N-SH细胞在G0/G1期的细胞增加(P<0.05),S期的细胞减少(P<0.05);JW74组SK-N-SH细胞的早期凋亡率增加(P<0.05)和晚期凋亡率增加(P<0.05);JW74组SK-N-SH细胞中EMT的上皮样细胞的标志物E-cadherin的表达上调(P<0.05),而EMT的间充质细胞的标志物N-cadherin、Vimentin和Snail的表达则下调(P<0.05);JW74组SK-N-SH细胞的Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenTimed Up and Goin、C-myc和Cyclin D1的表达水平被下调(P<0.05)。结论:基于Wnt/β-catenin信号通路,JW74对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT过程有抑制作用,并诱导细胞凋亡同时阻滞细胞周期在G0/G1期。