目的:构建稳定过表达外胚层发育不良受体关联死亡结构域的人脐带间充质干细胞系(ectodysplasin receptor associated death domain-human umbilical uord mesenchymal-derived stem cells,EDARADD-hUCMSCs)。通过条件汗腺SB203580细胞培养基诱导分化,探究将其重编程为外泌型汗腺样细胞。方法:一、hUC-MSCs的分离培养鉴定:(1)组织贴壁法分离hUC-MSCs。(2)流式细胞术鉴定hUC-MSCs。(3)成脂、成骨、成软骨三向分化实验证实hUC-MSCs。(4)MTS实验对比hUC-MSCs不同代次增殖能力。二、稳转株EDARADD-hUCMSCs制备:(1)1/2小体积转染法对hUC-MSCs进行过表达EDARADD慢病毒载体的转染(2)嘌呤霉素(puromycin)筛选出稳转株EDARADD-hUCMSCs。(3)MTS法比较稳转株EDARADD-hUCMSCs及hUC-MSCs增殖能力。(4)RT-q PCR检测稳转株EDARADD-hUCMSCs、hUC-MSCs中EDARADD的转录水平;Western blot检测稳转株EDARADD-hUCMSCs、hUC-MSCs中EDARADD蛋白的表达。三、稳转株EDARADD-hUCMSCs在条件汗腺细胞培养基下向外泌型汗腺样细胞诱导分化:(1)酶消化法分离人外泌型汗腺组织团、组织贴壁法获取人外泌型汗腺细胞。(2)条件汗腺细胞培养基诱导稳转株EDARADD-hUCMSCs分化为外泌型汗腺样细胞(3)对诱导细胞、稳转株EDARADD-hUCMSCs、外泌型汗腺细胞、hUC-MSCs拟合椭圆最长轴与最短轴比值、细胞横断面积及细胞拟合圆型近似比进行形态学统计学分析(4)MTS法比较诱导细胞、稳转株EDARADD-hUCMSCs、hUC-MSCs增殖能力。(5)RT-q PCR检测诱导细胞、hUC-MSCs CK18、CK19、α-SMA外泌型汗腺细胞重点基因m RNA的转录情况;Western bolt检测诱导细胞、hUC-MSCs、外泌型汗腺细胞CK18、CK19、α-SMA蛋白的表达。结果:一、(1)成功从人脐带华通胶组织中分离并鉴定hUC-MSCs。(2)细胞增殖实验显示第三(P3)代hUC-MSCs具备最佳增殖能力。二、(1)绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性细胞数量、荧光强度分析表明成功制备稳转株EDARADD-hUCMSCs。(2)稳转株EDARADD-hUCMSCs增殖能力明显下降。(3)稳转株EDARADD-hUCMSCs内EDARADD转录水平及其蛋白翻译较hUC-MSCs显著升高,表明目的基因已经成功结合hUC-MSCs基因组。三、(1)成功分离人外泌型汗chemical biology腺细胞。(2)形态学分析结果表明诱导细胞与人外泌型汗腺细胞无明显差异。(3)诱导细胞增殖能力相较于稳转株EDARADD-hUCMSCs、hUC-MSCs显著下降提示诱导细胞分化为成熟细胞。(4)诱导细胞内CK18转录水平较hUC-MSCs显著升高;诱导细胞内CK18、CK19蛋白表达,hUC-MSCs不表达;人外泌型汗腺细胞内CK5、CK19、音猬因子(sonic hedgehog,Shh)蛋白表达,hUC-MSCs不表达,结果表明诱导细胞可能定向分化为外泌型汗腺组织中的分泌部细胞。结论:本研究将外泌型汗腺发育过程中关键基因EDARADD高效整合至hUC-MSCs中并稳定表达。稳转株Eselleckchem CeralasertibDARADD-hUCMSCs在条件汗腺细胞培养基下诱导分化为外泌型汗腺样细胞。本研究为体外外泌型汗腺类器官培育提供优质种子细胞,为促进大面积烧伤患者创面愈合以及外泌型汗腺再生治疗提供新的思路和方法。