猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定研究

[目的]猪CD205分子作为猪DC细胞特异性的抗原提呈受体,在抗原提呈过程中起到关键作用。本研究通过噬菌体展示技术针SCH727965试剂对猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体,为猪CD205靶向抗原提呈的研究奠定基础。[方法]利用前期制备的猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行羊驼免疫,经6次皮下免疫后,采集羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录获得cDNA,经PCR扩增编码纳米抗体的基因片段,构建猪CD205分子CysR-FN Ⅱ噬菌体展示PLX3397纳米抗体基因文库,并运用噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行亲和筛选,随机挑选单克隆菌落并使用Phage-ELISA方法鉴定出针对猪CProteomics ToolsD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白的特异性纳米抗体。[结果]4轮亲和筛选后,通过Phage-ELISA方法鉴定和序列比对分析,共获得12个猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体,相对分子质量在17 × 10~(3)左右。[结论]本研究成功筛选获得猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性的纳米抗体,为下一步研究构建CD205靶向抗原以及CD205靶向研究奠定了基础。