肾脏纤维化(RF)是多种肾脏疾病的最终共同结局。肾小管上皮细胞是肾脏中含量最丰富且最易受损的固有细胞,其向间充质表型转化(EMT)是促进肾脏纤维化的重要因素。然而,目前导致肾小管上皮细胞EMT的具体机制还尚未完全阐明。近年来,越来越多的研究表明N6-甲基腺苷(m6A)在人类疾病及病理过程中起着重要SAHA浓度作用。然而,m6A在肾脏纤维化中的具体作用和机制还未被完全阐明。本研究表明,m6A正向调控锌指E-box结合同源盒2(ZEB2)促进肾脏纤维化的发展进程。通过m6A测序、mRNA测序和功能研究的综合分析,证实了m6A调控ZEB2促进RF和EMT进程。具体来说,ZEB2mRNA编码区(CDS)m6A2137通过分别与YTH结构域m6A结合的蛋白1/翻译延伸因子2(YTHDF1/eEF-2)复合物和胰岛素样生长因https://www.selleck.cn/products/lgk-974.html子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)结合,上调ZEB2的翻译活性和促进ZEB2 mRNA的稳定性。此外,利用dm6ACRISPR系统对ZEB2 m6A进行特异性去甲基化可显著降低ZEB2的表达,并延缓肾小管上皮细胞的EMT进程。体内实验和临床数据为m6A/ZEB2轴在RF进展中的积极影响提供了进一步的支持性证据。本研究表明,m6A正向调控ZEB2促进肾脏纤维化的进程,这为靶向m6A/ZEB2轴抑制肾脏纤维化提供了新的治疗策略。研究目的:本研究拟深入解析m6A促RF的作用及分子机制。围绕m6A在RF发生发展过程中的作用,确证了 m6A正向调控ZEB2促进肾脏纤维化的进程,阐明了m6A调控肾小管上皮细胞EMT的分子机制,并结合动物模型及临床样本揭示了m6A修饰在肾脏纤维化中的作用,以此探索靶向m6A/ZEB2轴抑制肾脏纤维化的策略及可行性分析,为抑制肾脏纤维化的发生发展提供新的具有重大潜力的治疗策略。研究方法:细胞划痕实验、双荧光素酶报告基因、m6ARNA免疫沉淀、mRNA/蛋白的稳定性实验、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、多聚核糖体分离技术、高效液相质谱联用、RNA结合蛋白免疫沉淀、RNA斑点印记杂交、蛋白免疫印记、蛋白互作-免疫共沉淀、免疫组织化学染色、单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠模型的构建、单侧缺血再灌注(UIRI)小鼠模型的构建等。研究结果:1.m6A促进肾小管上皮细胞EMT进程。2.m6A正向调控ZEB2促进肾小管上皮细胞EMT进程。3.YTHDF1 识别 ZEB2 mRNACDS m6A2137 上调 ZEB2 的翻译活性。4.IGF2BP3 识别 ZEB2 mRNACDS m6A2137 促进 ZEB2 mRNA 的稳定性。5.m6A与肾脏纤维化进程呈正相关。结论和意义:1.本研究阐明了 m6A正向调NIR‐II biowindow控ZEB2促进肾脏纤维化的分子机制。2.本研究提出了靶向m6A/ZEB2轴抗肾脏纤维化的新策略。