基于Hippo/YAP信号通路探究粉防己碱抗乳腺癌耐药机制

目的 研究粉防己碱通过调控Hippo/Yes-相关蛋白同源癌蛋白(homologous oncoproteins Yes-associated protein,YAP)信号通路抗乳腺癌多重耐药的分子机制。方法 采用CCK-8法检测粉防己碱对乳腺癌MCF-7/ADR细胞增殖的影响;采用倒置显微镜、荧光显微镜观察细胞形态;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用细胞集落实验检测细胞克隆形成能力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用Western blotting检测细胞耐药外排蛋白[P-糖蛋白(P-glyEmpirical antibiotic therapycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)],Hippo通路关键节点蛋白[YAP1、大肿瘤抑制激酶1(large tumor suppressor kinase 1,LATS1)、哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian Sterile 20-like kinase 1,MST1)、转录共活化因子(transcriptional co-activator with PDZ-binding motif,TAZ)]和凋亡关键蛋白[半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cyTalazoparib化学结构stein-asparate protease-3,Caspase-3)、细胞色素C(cytochrome-C,Cyt-C)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assocAlisertib小鼠iated X protein,Bax)]表达。结果 粉防己碱对MCF-7/ADR细胞具有增殖抑制作用,半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值为14.20μmol/L;粉防己碱能够改变细胞形态,部分细胞出现凋亡迹象;粉防己碱显著诱导MCF-7/ADR细胞发生凋亡(P<0.01),抑制细胞的增殖分化和侵袭能力,显著下调P-gp、BCRP、MRP1、YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白表达(P<0.01),显著上调MST1、LATS1、Caspase-3、Cyt-C和Bax蛋白表达(P<0.01)。结论 粉防己碱能够通过下调MCF-7/ADR细胞P-gp、BCRP和MRP1蛋白表达,抑制外排蛋白活性,增加细胞内粉防己碱含量蓄积;并通过激活Hippo信号通路,上调MST1蛋白表达,激活LATS1,进而调控下游靶点YAP1和TAZ表达,进一步上调Caspase-3、Cyt-C和Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,启动细胞凋亡程序,发挥抗肿瘤作用。