可创制多价弱毒疫苗的黄瓜花叶病毒基础载体构建及评价

黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)寄主范围广泛、分离物资源丰富,三分体基因组赋予多位点突变和假重组选择,具备开发弱毒疫苗载体的良好潜力。本研究基于CMV的Fny分离物,针对RNA1的3’UTR、RNA2的2b蛋白及3’UTR进行突变改造,构建了RNA1 3’UTR插入型突变体pCC_F-R1-3U_(ml)和pCCF-R1-3U_(m2);RNA2的2b蛋白及3’UTR的缺失型突变体pCCF-R2-2bPTⅣ、pCCF-R2-2bPTV和pCC_F-R2-2bPTⅥ购买LXH254。以上突变体分别混合野生型的另外2条基因组片段进行混合接种。结果表明,R1-3U_(ml)为强毒突变体,R1-3U_(m2)、R2-2bPTⅣ、R2-2bPTV、R2-2bPTⅥ为弱毒突变体;突变位点均可以稳定存在。交叉保护测定表明,弱毒突变体R2-2bPTⅣ、R2-2bPTⅤ、R2-2bPTⅥ可有效防治靶标强毒CMV,防效达到90%以上。基础载体容纳外源片段的能力是衡量基础载体性能的关键指标之一。初步试验表明,R1-3U_(ml)可以容纳至少100 bp外源片段,而R1-3U_(m2)可以容纳至少200 bp外源片段,R2-2bPTⅣ可以容纳至少450 bp外源片段。前期研究表明,100 bp的外源病毒片段插入对靶标强毒就可以起到交叉保护的防治效果,据此评估以上基础载体创制多价弱毒疫苗的潜力。假重组组合SCH727965 molecular weightR1/R2-2bPTⅣ/R3可构建5价Affinity biosensors弱毒疫苗,假重组组合R1-3Um/R2-2bPTⅣ/R3可构建6价弱毒疫苗,而假重组组合R1-3U_(m2)/R2-2bPTⅣ/R3则具备构建7价弱毒疫苗的潜力。本研究为构建多价弱毒疫苗提供了丰富的基础载体选择。