百蕊草为一年生草本植物,全株提取物入药,具广谱抗菌活性,在治疗咳嗽、肺炎及气管炎等病症上具有显著效果,尤其是在治疗儿童咳嗽方面被广泛应用。酚类物质尤其是黄酮类物质被认为是百蕊草的活性部位,但百蕊草中酚类化学成分与细胞毒性还有待进一步研究。本论文通过植物化学的方法,探究了百蕊草全草中酚类化合物的化学多样性,进一步为了探究百蕊草中酚类物质的细胞毒性,将乙酸乙酯部位及从该部位得到的化合物作用于CHO细胞、脐血NK细胞、外周血NK细GSK126试剂胞及MSC细胞,通过观察细胞形态、增殖和分化结果的统计,明确百蕊草中主要酚类化合物的细胞毒性。主要研究结果如下:1)本研究以百蕊草全草为原料,采用旋蒸、萃取、硅胶柱色谱、MCI柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱(HPLC)半制备等手段对其全株的有效成分进行提取分离,共分离化合物7个。结合质谱(MS)、红外光谱(IR)、核磁共振波谱(NMR)进行结构鉴定,鉴定了其中5个化合物,分别为:异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(YX-2)、4-羟基肉桂酸甲酯(YX-3)、香兰素(YX-4)、紫云英苷(YX-5)、山奈酚(YX-6)。其中,YX-3、YX-4是首次从该植物中发现。定量分析发现,YX-2在百蕊草浸膏中的含量为10.83±1.23 mg/g,表明该化合物是百蕊草的主要化学物质。2)中国仓鼠卵巢CHO细胞是评价化学物质毒性的重要细胞株系。不同浓度百蕊草乙酸乙酯浸膏与CHO共培养发现,该浸膏在4μg/mL到256μg/mL浓度范围内都显著抑制了CHO细胞的生长,其中生长抑制活性的EC_(50)为127.74±3.57μg/mL,揭示了百蕊草乙酸乙酯浸膏具有一定的细胞毒性。将4-256μg/mL浓度的化合物异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(YX-2)与CHO细胞共培养48h后,镜下CHO细胞形态均呈圆形透亮、无异常;细胞存活率统计发现,与对照组类似,处理组CHO细胞活率均在95%以上。结果表明,百蕊草中异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(YX-2)对CHO细胞的生长无明显细胞毒性。3)显微镜观察发现,在8-256μg/mL浓度化合物YX-2、YX-4和YX-5与脐血NK细胞共培养48h后,所有化合物处理后的细胞形态均呈圆形透亮、无异常。细胞数量统计发现,化合物YX-2和YX-5对细胞增殖无明显抑制作用。但化合物YX-4在高浓度256μg/mL处理时对脐血NK细胞具有增殖抑制作用,抑制率为6.65±0.74%。脐血NK细胞的存活率统计发现,细胞活率随化合物YX-2和YX-4浓度升高而逐渐下降,但化合物YX-5浓度升高未发生明显变化。表明异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(YX-2)和香兰素(YX-4)对于脐血NK细胞具有微弱的细胞毒性,而紫云英苷(YX-5)则无明显脐血NK细胞毒性。4)显微观察发现,在8-256μg/mL浓度化合物YX-2、YX-3和YX-4与外周血NK细胞共培养48h后,细胞形态均呈圆形透亮、无异常。细胞数量统计发现,3个化合物在8-128μg/mL浓度处理下均对外周血NK细胞增殖无明显抑制作用;但在高浓度(256μg/mL)处理下,YX-2、YX-3和YX-4对外周血NK细胞增殖有抑制作用,抑制率分别为22.8±22.74%、83.62±2.11%和27.63±0.21%,表明化合物YX-3对细胞增殖的抑制作用显著高于化合物YX-2和YX-4。细胞活率统计发现,在8-256μg/mL浓度下化合物YX-2和YX-4活率分别为73.00±2.83%和74.83±2.40%,与空白对照下的细胞活率75.50±0.71%相比无差异。细胞活率随着YX-3浓度升高而下降,最高活率为66.5±0.71%。进一步通过流式细胞技术检测NK细胞的表面标志物,发现化合物YX-2在8μg/mL和16μg/mL浓度下培养的NK细胞CD3-CD56+细胞表型占比分别为70.94%和70.32%;化合物YX-3在32μg/mL浓度下培养的NK细胞CD3-CD56+细胞表型占比为54.46%;化合物YX-4在8μg/mL和16μg/mL浓度下培养的NK细胞CD3-CD56+细胞表型占比Staurosporine分别为69.80%和69.40%;与对照组NK细胞CD3-CD56+细胞表型占比(72.10%)相比,仅有化合物YX-3在32μg/mL浓度下对NK细胞分化表现为抑制作用。由此表明,4-羟基肉桂酸甲酯(YX-3)、香兰素(YX-4)对外周血NK细胞表现为微弱的细胞毒性。5)显微观察发现,在8-256μg/mL浓度化合物YX-2、YX-3和YX-4与MSC细胞共培养48h后,细胞形态呈梭形成纤维细胞样,无异常。细胞数量统计发现,YX-2和YX-3均对MSC增殖均无细胞抑制作用,而YX-4仅在低浓度(8μg/mL)时,对MSC增殖表现为抑制作用,抑制率为10.23±0.42%。细胞活率统计发现,化合物YX-2和YX-4的细胞活率分别为71.67±4.50%和75.17±4.83%,与空白对照下的细胞活率72.00±5.66%相比无差异。化合物YX-3处理后,细胞活率随着浓度升高而下降,最高活率(70.50±0.71%)低于空白对照下的细胞活率。研究结果表明,异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(YX-2)对MSC细胞无毒性,4-羟基肉桂酸甲酯(YX-3)和香兰素(YX-4)对MSC有微弱细胞毒性。综上所述,本论文增加了百蕊草中酚类化学物质的多样性,进一步明确百蕊草中黄酮类异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(YX-2)和紫云英苷(YX-5)无明显CHO细胞、NK细胞和Mantibiotic activity spectrumSC细胞毒性,在药物中可以使用高浓度的256μg/mL;而药物中小分子酚类化合物4-羟基肉桂酸甲酯(YX-3)和香兰素(YX-4)使用的浓度要低于128μg/mL。本研究为百蕊草用药剂量的安全性及药效评估提供了有益借鉴,为进一步拓展百蕊草资源的开发利用及活性物质的挖掘提供了理论基础。