弓形虫作为一种机会致病性寄生原虫,具有复杂的生活史、广泛的宿主类型和多样的传播途径。几乎所有的温血动物包括人类都可成为弓形虫的宿主,全球有大约三分之一的人口被感染,弓形虫感染可严重影响畜牧业发展和人类健康。目前,还没有针对弓形虫病的有效疫苗,控制弓形虫感染在很大程度上依赖于药物,但目前的抗弓形虫药物和治疗方案主要以抗生素为主,可能会引起骨髓抑制等相关的副作用,对机体健康造成巨大威胁,且滥用抗生素带来的耐药性问题为治疗弓形虫感染带来一定的困难,因此,寻找和开发新型、低毒、高效的抗弓形虫药物成为亟待解决的问题。近年来,从植物中获取的天然化合物被尝试应用于抗病原研究。其中,香豆素和雪松醇在抗癌、抗菌、抗寄生虫等方面有着较好的疗效,推测其具有较好的抗弓形虫效果。为此本论文将对香豆素和雪松醇的抗弓形虫效果进行评价,并初步探究二diABZI STING agonist小鼠者是如何发挥抗弓形虫作用的,为开发新型抗弓形虫药物和治疗策略提供理论依据和新思路。采用CCK-8法测定不同浓度梯度的香豆素和雪松醇对DF-1(鸡胚成纤维细胞)的细胞毒性和弓形虫活性的影响。计算影响DF-1细胞生长的安全浓度范围和半数抑制浓度(CC_(50))。结果显示,香豆素和雪松醇的CC_(50)分别为959.8μg/m L、94.19μg/m L;计算香豆素和雪松醇对弓形虫活性的半数抑制浓度(IC_(50)),IC_(50)分别为445.7μg/m L、80.26μg/m L。计算香豆素和雪松醇对弓形虫的选择性指数(SI),以此评价二者抗弓形虫作用的选择性,香豆素与雪松醇的抗弓形虫选择性指数分别为2.15和1.17。在安全浓度范围内通过IFA试验观察体外抗虫效果,统计香豆素和雪松醇刺激后弓形虫速殖子的入侵率变化。结果显示,不同浓度的香豆素和雪松醇均可显著抑制弓形虫速殖子入侵宿主细胞,且雪松醇对弓形虫入侵能力的影响具有浓度依赖性。通过统计弓形虫速殖子在宿主细胞内的增殖情况评估香豆素和雪松醇对弓形虫体外增殖能力的影响。结果显示,弓形虫的分裂增殖能力同样受到影响,导致胞内弓形虫数量显著减少。为获知香豆素和雪松醇是否对体内弓形虫感染有效,能否延长感染小鼠的存活时间,将试验小鼠进行分组,除空白组外其余各组小鼠均腹腔注射1×10~2个RH株弓形虫速殖子,感染弓形虫的小鼠除对照组外其余各组小鼠分别灌胃给药50 mg/kg乙胺嘧啶、200 mg/kg香豆素和180 mg/kg雪松醇,每日一次,观察各组小鼠的临床表现,统计各组小鼠的存活时间,计算存活率,绘制死亡/生存曲线。香豆素和雪松醇治疗弓形虫感染小鼠结果显示,感染小鼠在治疗期间出现弓背、被毛粗乱、小便失禁等临床表现,乙胺嘧啶、香豆素、雪松醇治疗组小鼠的采食、精神、活动情况明显强于对照组,显著延长了感染小鼠的存活时间,增加了弓形虫感染小鼠的存活率。通过巢氏PCR检测香豆素和雪松醇对感染小鼠肝、脾、肺、肾中弓形虫速殖子的抑制情况。检测结果显示,与阳性药物乙胺嘧啶组相比,经香豆素和雪松醇治疗的小鼠各组织脏器中的弓形虫速殖子DNA条带仍清晰可见,说明小鼠体内依旧存在弓形虫未被完全清除。进一步通过绝对荧光定量PCR方法建立弓形虫速殖子标准曲线,对小鼠各组织中的虫体荷载量进行统计。标准曲线y=-0.3005x+11.273,变异系数R~2=0.9996,结果更直观地显示了香豆素和雪松醇治疗后抑制小鼠体内弓形虫增殖的情况,治疗小鼠的肝、脾、肺、肾中的虫体荷载量明显减少。制作病理组织切片,观察经香豆素和雪松醇治疗后的感染小鼠组织脏器的病理变化。对各组小鼠肝、脾、肺和脑组织的病理学观察分析结果显示,未感染弓形虫的空白组小鼠的肝、脾、肺、脑均未见明显病变。感染对照组小鼠肝脏各组织出现不同程度的水肿、充血、出血等现象,说明弓形虫感染对小鼠组织器官造成损伤。乙胺嘧啶治疗组小鼠肝脾未见明显病变,肺和脑轻微充血;香豆素治疗组小鼠肝脏中巨噬细胞浸润,脾脏轻度充血,轻度间质性肺炎,脑膜轻度充血;雪松醇治疗组肝脏和脾脏出现坏死灶、充血、出血,多核巨噬细胞浸润,肺间质充血、出血;脑未见明显病变。为检测香豆素和雪松醇对感染小鼠机体的保护性,对各组小鼠称重并标记,口服灌胃给药7天后再次称重,计算体重增量,结果感染对照组小鼠在不用药的情况下体重减轻,而经香豆素和雪松醇治疗后体重均得到不同程度的回升。采确认细节集各组小鼠肝脏、脾脏,计算肝脾指数,结果显示,感染对照组小鼠肝脏、脾脏肿大明显,香豆素和雪松醇用药后脾脏肿大情况有所抑制,但对肝脏肿大的抑制效果不明显。继而通过测定血清转氨酶ALT、AST活性用于评价香豆素和雪松醇对弓形虫感染小鼠肝脏的保护程度,以GSH水平评估香豆素和雪松醇对机体的抗氧化损伤能力。感染对照组小鼠血清转氨酶活性升高,表明弓形虫感染的确会造成肝脏受损情况,而经香豆素和雪松醇治疗后小鼠肝脏血清转氨酶活性显著降低,提示肝损伤情况有所缓解,但GSH水平变化不显著。为探究香豆素和雪松醇的抗弓形虫能力是否与氧化应激有关,通过DCFH-DA检测香豆素和雪松醇对弓形虫活性氧水平变化的影响,结果显示,与对照组相比,香豆素和雪松醇处理后被DCFH-DA染色的虫体数量增多,促进弓形虫活性氧的释放。利用相对荧光定量PCR方法检测弓形虫抗氧化应激基因的表达水平。结果显示,与感染对照组弓形虫抗氧化损伤基因的表达量相比,香豆素和雪松醇处理后的弓形虫抗氧化损伤基因表达量均有不同程度的降低。综上所述,香豆素和雪松醇在体内外均表现出具有良好的抗弓形虫效果,能有效缓解机体因弓形虫感染引起的伤害与损伤,且抗弓形虫作用与弓形虫受药物刺激后引起虫体氧化应激有Hepatic lineage关。试验结果表明,香豆素与雪松醇具有潜在的抗弓形虫价值,有望开发为新型抗弓形虫药。