NAC转录因子参与植物生长发育、果实色素积累、细胞壁形态形成和植株衰老等过程。为系统研究SNAC4(SlNAC48，基因ID:101247735)和SNAC9(SlNAC19，基因ID:101248665)在番茄成熟衰老进程中的精准功能，本试验设计SNAC4/9敲除靶点，通过重叠聚合酶链式反应（overlapping PCR）法构建receptor-mediated transcytosis单引导RNA(sgRNA)表达盒，采用金门分子克隆（golden gate）方法将单个或多个sselleckchem S63845gRNA表达盒组装至pYLCRISPR/Cas9载体。PCR和测序结果表明，SNAC4/9敲除载体构建成功，通过农杆菌转化法将编码Cas9蛋白和sgRNA的基因导入Micro-Tom番茄细胞，对阳性苗进行靶点和脱靶位点检测，结果表明番茄成功突变且未脱靶，通过鉴定T1代突变体进一步证明，CRISPR/Cas9基因编辑番茄的靶点在代际之间可以稳定遗传。与野生型相比，SNAC4/9敲除果实色素积累减少，成熟延迟，表明SNAC4/9在番茄果实成熟中发挥重要作用。本研究为进一步探究SNAC4/9调控番selleckchem GSK1120212茄果实色素代谢和胞壁代谢机制提供了遗传材料和试验基础。