目的:冷冻保存牙再植后常发生破porous biopolymers骨细胞(Osteoclast,OC)相关的根吸收,而粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)与OC诱导分化关系密切,本研究主要探究在冷冻条件下人牙周膜细胞(Human periodontal ligament cells,hPDLCs)中GM-CSF的合成和分泌;GM-CSF与hPDLCs的增殖、迁移、向OC分化的关系,阐述GM-CSF与冷冻保存hPDLCs的相互作用,为减少冷冻后牙再植发生根吸收提供研究基础和实验依据。方法:1.组织块酶消化法培养hPDLCs,免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)鉴定细胞来源。2.细胞分组:炎症因子IL-1β处理组、常温常规培养组、冻存组(慢速冷冻方式冻IDN-6556供应商存三个月),酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、实时荧光定量(Real time quantZD1839溶解度itative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、ICC检测组间GM-CSF表达的差异。3.CCK-8、细胞划痕实验检测GM-CSF对hPDLCs增殖、迁移能力的影响。4.细胞分组:GM-CSF处理组、炎症因子IL-1β处理组、GM-CSF siRNA+IL-1β处理组,RT-qPCR比较组内、组间OC诱导分化相关因子的基因表达。结果:1.成功分离培养hPDLCs;抗波形丝蛋白阳性表达,抗角蛋白阴性表达,表明其中胚层来源,可为后续实验提供体外细胞来源。2.炎症因子IL-1β处理组、冷冻组的GM-CSF合成分泌量均比常温常规培养组高,其中冻存组与1 ng/m L IL-1β作用后的GM-CSF表达量相当。3.25 ng/m L GM-CSF作用下的hPDLCs殖速度明显加快,随GM-CSF浓度升高hPDLCs增殖速度愈快;高浓度GM-CSF更能促使hPDLCs迁移。4.随GM-CSF浓度升高,hPDLCs中OC诱导分化相关因子的表达逐渐上升,骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)表达量在低浓度GM-CSF时降低,后随浓度升高其表达水平逐步上升;随IL-1β浓度的升高,hPDLCs中OC诱导分化相关因子的表达水平上升;敲低GM-CSF的表达后,炎症因子IL-1β不再上调OC诱导分化相关因子的表达,OPG上升水平不再显著。结论:冷冻后复苏的hPDLCs中GM-CSF的合成和分泌水平上升;GM-CSF促进hPDLCs的殖和迁移理论上有利于牙周膜的愈合,而基因水平发现,GM-CSF上调OC诱导分化相关因子的表达,充分显示了其对hPDLCs的复杂作用,为冷冻保存离体牙再植后的牙周膜愈合和牙根吸收的发生机制提供新的探索路径。