五味子属木兰科植物,源于《神农本草经》,能收敛固涩、益肾安神。常用的五味子有生品、酒制品等。酒制品主要用于治疗肾虚遗精,心悸失眠。五味子中含有木脂素、挥发油和有机酸等,其中木脂素是五味子中最主要www.selleck.cn/products/d-lin-mc3-dma的活性成分,也是发挥镇静催眠、抗抑郁作用的关键治疗成分。由于木脂素的种类较多,其涉及的效应活性和作用机制尚未完全阐明。据此,本文展开以下六部分研究:1生、酒五味子促睡眠药效学研究。生、酒五味子能显著提高失眠小鼠总活动距离、直立次数、增加快速眼动睡眠(Rapid Eye Movement,REM)和非快速眼动睡眠(Non-Rapid Eye Movement,NREM)所占时间比,且酒五味子优于生五味子。逆转录PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、免疫荧光、超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(Ultra Performance Liquid Chromatography Quadrupole-Time-Of-Flight Mass Spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)的结果表明生、酒五味子能显著降低Bmal1、Clock m RNA相对表达水平,升高Per2 m RNA相对表达水平;减少炎症因子的表达;降低去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、多巴胺(Dopamine,DA)、皮质酮(Corticosterone,CORT)含量,升高五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量。其机制与其调节失眠小鼠神经-内分泌-免疫系统相关生物学指标有关。酒五味子抗抑郁药效学研究。酒五味子可明显提高抑郁小鼠糖水偏好率、中央穿越次数。降低静止不动时间。增加5-HT、DA含量。说明酒五味子具有明显的抗抑郁作用,其作用机理是通过调节小鼠脑内单胺类神经递质水平来实现的。2采用模式生物果蝇进行促睡眠效应物质系统评价。根据本课题组前期对五味子炮制前后木脂素定量分析研究,发现生、酒五味子中木脂素的含量存在差异。在本实验中主要选取五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲、酯乙、酯戊;戈米辛G、戈米辛J、戈米辛D、当归酰戈米辛O、当归酰戈米辛Q、苯甲酰基戈米辛O、巴豆酰基戈米辛P、巴豆酰基戈米辛H作为主要研究对象。以果蝇睡眠时间、昼夜活动节律及神经递质作为考察指标。结果表明,五味子醇乙、五味子乙素、五味子醇甲、戈米辛G、当归酰戈米辛O表现出明显的抗失眠活性。对五味子效应物质促睡眠作用进行构效关系研究,分析认为其结构中在苯环母核上存在1个次甲二氧基团,并处于R1～R2之间,推测其可能是发挥促睡眠作用的Rational use of medicine主要基团;另外,研究发现如果同时含有2个次甲二氧基团,则不会对睡眠产生促进作用。3基于网络药理学与分子对接技术对五味子促睡眠作用进行研究。以五味子中16个成分作为活性成分,预测五味子效应物质在治疗失眠中的作用靶点及通路,共获得治疗失眠相关的101个潜在靶点,然后预测出7个核心靶点和20条具有显著影响的信号通路。为阐明五味子防治失眠的作用机理提供实验基础。4采用果蝇进行五味子效应物质抗抑郁的系统性评价,通过行为学和神经递质结果显示,抗抑郁作用效果明显的有五味子甲素、醇甲、当归酰戈米辛Q;抗抑郁作用中等的是五味子乙素、酯戊、巴豆酰戈米辛H;抗抑郁作用较弱的是戈米辛J、巴豆酰戈米辛O、当归酰戈米辛O。此外,进一步地讨论了五味子效应物质抗抑郁的构效关系,分析发现五味子甲素、乙素、醇甲、酯戊、当归酰戈米辛Q、巴豆酰戈米辛H的结构中联苯环上都含有5或6个甲氧基基团,推测可能是甲氧基有抗抑郁的作用。5基于网络药理学与分子对接技术对五味子抗抑郁作用进行研究。通过筛选获得五味子效应物质抗抑郁相关的254个潜在靶点,然后预测出14个核心靶点及20条具有显著影响的信号通路。6五味子效应物质改善睡眠作用的机制研究。综合效应物质评价和网络药理学及分子对接结果,选出五味子醇乙和戈米辛G作为机理研究对象,通过测定5-HT、DA、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)指标发现戈米辛G、五味子醇乙可以升高5-HT、GABA的含量,减少DA的含量,提示戈米辛G、五味子醇乙对睡眠的改善作用与其5-HT、DA、GABA的含量有关。同时,通过对野生型果蝇和inc缺失果蝇的研究发现,戈米辛G、五味子醇乙可以显著上调睡眠节律基因Per1蛋白表达。可说明戈米辛G、五味子醇乙对睡眠的改善作用与其节律基因Per1有一定关系。Laduviglusib采购最后,通过RT-PCR对野生型果蝇、AKT1、m TOR敲除果蝇实验结果发现,戈米辛G、五味子醇乙均可使AKT1、m TOR的基因相对表达量降低。在m TOR~(-/-)果蝇中,戈米辛G和五味子水提物组的AKT1相对表达量下降,提示戈米辛G、五味子醇乙可以通过调控AKT1-m TOR信号通路来进行改善睡眠,但主要是通过AKT1这个靶点来调节。综上所述,本课题首先对生、酒五味子进行促睡眠、抗抑郁的药效学研究;然后结合课题组以往的基础研究,将16个五味子效应物质作为研究的活性成分。采用果蝇在体失眠、抑郁模型实验和网络药理学与分子对接对五味子效应物质进行了评价。最后,对失眠进行了机理探讨。