目的 探讨色素内镜(chromoendo3-Methyladenine价格scopy,CE)与窄带成像放大内镜(magnifying endoscopy with narrow-band imaging,ME-NBI)评估幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)根除后早期胃癌边界的准确性及其影响因素。方法 选取2019年1月至2021年12月于浙江大学医学院附属金华医院确诊为Hp根除后早期胃癌并行内镜黏膜下剥离术治疗的71例患者为研究对象,根据随机数字表法将其Others抑制剂分为口侧CE组(n=35)和口侧ME-NBI组(n=36)。比较CE与ME-NBI评估Hp根除后早期胃癌边界的准确率,通过单因素和多因素Logistic回归分析探究CE与ME-NBI错误评估肿瘤边界的相关因素。结果 ME-NBI评估Hp根除后早期胃癌边界的准确率高于CE(P<0.05);ME-NBI诊断浅表凹陷型Hp根除后早期胃癌边界的准确率高于CE(P<0.05)。单因素分析显示,ME-NBI错误评估肿瘤边界与非肿瘤上皮覆盖率相关(P<0.05);CE错误评估肿瘤边界与组织学类型、黏液bioelectric signaling表型、非肿瘤上皮覆盖率相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,未分化型早癌、非肿瘤上皮覆盖率>10%、胃肠混合表型均是CE错误评估Hp根除后早期胃癌边界的独立危险因素(P<0.05)。结论 ME-NBI评估Hp根除后早期胃癌边界的准确性优于CE。未分化型早癌、非肿瘤上皮覆盖率>10%、胃肠混合表型是CE错误评估Hp根除后早期胃癌边界的独立危险因素。
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黄精化学成分以及药用价值的研究进展
黄精(Polygonatum sibiricum)是一种药食两用的自然植物,具有健脾益气、滋阴润肺、益肾填精的功效,在传统中药学和民间草药中被广泛用于治疗各种疾病。黄精含有糖类,黄酮,萜类,生物碱,强心苷,木脂素,皂苷,凝集素,微量元素等化学成分,因此受到近年来越来越多的关注。现代研究表明,黄精具有抗氧化活性、调节免疫力、营养神经、增强记忆、降糖降脂、保护骨骼、消炎杀菌、抗疲劳和抗癌的作用,黄精对于心脑血管疾病、感染性疾病、糖尿病、高血脂、骨质疏松、阿尔茨海默病、肝病、肾病等其他疾病具有一定的治疗作用,具有很高的药用价值。本文以黄精为研究对象,就近年来对其化学成分、营养价值、药理作用及其机制进行了阐述,进一步深入了解其药理学和临床应用,具有较大的开发high-dimensional mediation潜力、广阔的市场前景和无限的发展空间,以期未来在药GSK1349572配制品、食品的开发和Belumosudil体内实验剂量利用中提供提供充足的理论依据,更好的促进黄精产业的健康、稳定、可持续发展。
紫金龙生品与炮制品的品质评价及抗炎作用研究
目的:探究不同炮制方法对紫金龙多糖及浸出物含量的影响,并初步探索紫金龙炮制前后对小鼠肉芽肿抗炎效果。方法:采用正交试验优选紫金龙多糖Zinc biosorption提取工艺,按照2015年版《中国药典》四部水分、浸出物含量测定方法,测定紫金龙生品及炮制品水分、浸出物含量;利用紫外—可见分光光度法测定多糖含量;建立小鼠肉芽肿胀模型比较紫金龙炮制前后的抗炎作用并计算肉芽肿抑制率。结果:正交试验优选得到紫金selleck S63845龙多糖最佳提取方法为100%乙醇,加25 ml水提取,回流1.5 h。用该方Bafilomycin A1半抑制浓度法测得紫金龙生品多糖平均含量为8.90%,蒸制2 、6 、15 h的多糖平均含量分别为6.22%、7.18%、8.03%,盐制品的多糖平均含量为4.89%,RSD为0.65%~2.95%。综合紫金龙多糖、水浸物、醇浸物三个指标得出云南临沧紫金龙生品的品质最好。紫金龙生品组对小鼠肉芽肿抑制率为34.27%,抗炎效果极显著,蒸制组的抑制率为20.58%,抗炎效果显著。结论:本实验所建立的紫金龙多糖提取测定方法准确可行;紫金龙生品与炮制品水提物均有明显抗炎效果;综合多糖及浸出物含量,初步评价了炮制对紫金龙药材的影响,为发掘紫金龙更大的药用价值提供一个参考和研究方向。
基于盆腔器官脱垂相关衰老基因的GEO数据库和LASSO回归算法的生物信息学分析
目的:通过生物信息学技术筛选与盆腔器官脱垂(POP)密切相关的衰老基因SB431542半抑制浓度,并阐明关键基因潜在的临床意义和价值。方法:利用基因表达汇编(GEO)数据库以“pelvicorgan prolapse”为关键词检索下载数据集GSE53868和GSE151188获取POP相关基因。从Aging Atlas数据库、CellAge数据库和人类衰老基因组资源(HAGR)数据库获取衰老相关基因,2组基因取交集得到POP相关衰老的差异表达基因(DEGs)。采用R 4.2. 1软件进行基因富集分析(GSEA)。采用注释可视化和集成发现(DAVID)数据库对DEGs进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,采用Cytoscape 3.9. 1软件构建蛋白-IACS-010759蛋白互作(PPI)网络,用cytoHubba插件筛选排名前10位的核心基因(Hub基因)。采用R软件CIBERSORT反卷积法分析22种免疫细胞在POP组和对照组患者中的浸润情况。采用LASSO回归算法进一步筛选关键基因,分析关键基因与免疫细胞浸润的相关性和诊断效能。结果:通过Aging AtlKiller cell immunoglobulin-like receptoras、CellAge和HAGR数据库得到724个衰老相关基因,与POP表达谱取交集,提取到含624个基因的POP相关衰老基因表达矩阵,差异分析后得到29个POP相关DEGs,其中表达上调基因2个,表达下调基因27个。GSEA显示,上调通路主要是糖尿病和细胞衰老等通路,下调通路包括阿尔茨海默病和缺氧诱导因子1(HIF-1)信号通路等。GO功能富集分析主要富集于细胞对脂多糖的反应、炎症反应和细胞增殖的负向调节等生物学过程。KEGG信号通路富集分析主要是白细胞介素17 (IL-17)、肿瘤坏死因子(TNF)和核因子κB (NF-κB)信号传导途径。PPI网络分析得到白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素1B (IL-1B)、环氧合酶2 (PTGS2)和NF-κB抑制因子α (NFKBIA)等10个Hub基因。CIBERSORT反卷积法分析,中性粒细胞和活化的肥大细胞在POP组患者中浸润比例相对较大,且在相关性分析中活化的肥大细胞与大部分DEGs呈正相关关系(r>0.5),巨噬细胞与IL-1B呈明显正相关关系(r>0.6)。LASSO回归算法进一步筛选的10个关键基因中,Jun D原癌基因(JUND)、Snail同源物1 (SNAI1)、双调蛋白(AREG)、A型核纤层蛋白基因(LMNA)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的诊断效能较高,受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)均大于0.750。结论:在衰老过程中,JUND、SNAI1、AREG、LMNA和SOD2基因可能通过炎症相关通路、转录调控、影响胶原蛋白分泌和代谢等多种途径参与POP病理生理过程,从而影响结缔组织支撑功能,促进POP的发生发展。
采用挤出吹塑法制备牛至精油包合物/PBAT复合膜及其在冰糖橙保鲜中的应用
我国是世界上第一大果蔬生产国,但较为落后的果蔬采后贮藏保鲜技术和不完善的冷链设施等因素导致了严重的采后损失(高达20%~30%)。目前的果蔬保鲜方法主要有施加化学杀菌剂和使用塑料包装膜/袋等,但化学杀菌剂存在耐药性和食品安全问题,而使用的包装膜/袋Ipatasertib采购则几乎均为不可降解合成高分子材料,其废弃物加重了塑料污染。因此,开发绿色、安全、高效的可降解保鲜膜对于减少资源浪费,实现可持续发展具有重要意义。聚对苯二甲酸-己二酸丁二醇酯(poly(butylene adipate-co-terephthalate),PBAT)是一种具有良好加工性的可生物降解材料,其机械性能与聚乙烯(polyethylene,PE)较为接近,有望成为PE的替代作为果蔬保鲜包装膜应用。此外,在包装膜中添加抗菌剂制备抗菌薄膜,可有效延缓果实的腐烂,减少或避免化学杀菌剂的直接使用,提高食品安全性。天然抗菌剂如植物精油等不仅绿色安全,而且具有优良的抗菌性和抗氧化性,与高分子材料复合制成包装膜后可通过挥发至包装内部,有效发挥抗菌保鲜效果。但同时植物精油的挥发性也使其与高分子的复合膜难以通过挤出吹塑等工业化成型方法来加工,成为限制其生产和应用的瓶颈之一。采用热稳定性较高的载体对精油进行包封后再与高分子材料复合是解决此问题的有效措施之一。基于此,本研究首先以牛至精油为芯材,β-环糊精(beta-cyclodextrin,β-CD)为壁材采用共沉淀法制备牛至精油/β-CD包合物(CD-O),对其制备工艺进行了优化,并对CD-O进行了形貌和性能的表征;其次,将制得的CD-O与PBAT共混,通过挤出吹塑法制备不同CD-O含量的PBAT复合膜,对复合膜的微观结构、机械性能、阻隔性、热稳定性、抗氧化能力等进行了表征,以探究CD-O的添加对PBAT薄膜结构与性能的影响;最后,将综合性能最好的复合膜(CD-O质量分数为15%)制成膜袋,用于冰糖橙(Citrus sinensis Osbeck)的采后贮藏保鲜,对复合膜保持冰糖橙营养品质和抑制接种病原菌果实发病的能力进行评价。主要结论如下:(1)对牛至精油进行成分分析后发现,具有良好抗菌和抗氧化活性的香芹酚和百里酚的占比分别为86.40%和2.06%。抗氧化活性测定结果表明,牛至精油对自由基的清除能力随精油质量浓度的增加而提高,当其质量浓度为20μg/m L时对自由基的清除率已经超过80%。以CD-O的包封率和负载率为指标,对壁材添加量、芯壁比以及精油与乙醇添加质量比进行单因素优化,得出CD-O的最优制备工艺为:壁材添加质量分数为7%,芯壁比为1:6,牛至精油与乙醇质量比为1:7。此工艺下制备的CD-O包封率为61.01%,负载率为10.04%,具有均匀的微观结构,保持了较好的抗氧化活性(浓度为1.0 mg/m L的CD-O溶液其自由基清除率为52.13%),并且对指状青霉(Penicillium digitatum)的生长有明显的抑制作用(抑菌圈直径为22.60±1.31 mm)。X射线衍射和热重分析结果表明牛至精油成功被β-CD包合,且热稳定性得到提高。同时,CD-O中的精油可在16天内缓慢释放,释放曲线可采用Higuchi释放动力学模型进行拟合(R~2=0.9964)。(2)通过挤出吹塑法分别制备了CD-O和β-CD质量分数为5%、10%和15%的CD-O/PBAT复合膜(5%CD-O/PBAT、10%CD-O/PBAT、15%CD-O/PBAT)和β-CD/PBAT复合膜(5%β-CD/PBAT、10%β-CD/PBAT、15%β-CD/PBAT),对其结构和性能进行了表征。selleck Q-VD-Oph结果表明,CD-O和β-CD在PBAT中均有一定程度上的聚集,使得膜中出现少量微孔,但CD-O团聚体较小,说明精油包封可促进其在PBAT中的分散。与PBAT薄膜相比,β-CD/PBAT复合膜的力学性能以及热稳定性都有明显下降。CD-O的添加虽然也使得复合膜的拉伸强度、弹性模量、断裂伸长率以及热分解初始分解温度(T_(onset))和最大分解速率温度(T_(max))有所下降,但下降幅度远小于β-CD的添加。当CD-O质量分数由5%增加到15%时,复合膜的不透明度逐渐降低,自由基清除能力逐渐增强。此外,β-CD和CD-O的添加均使薄膜的水蒸气透过系数增大,但CD-O复合膜数值比β-CD复合膜低50%以上。各复合膜的氧气透过率随着β-CD或CD-O添加量的增加均呈先增大后减小的变化趋势,且15%CD-O/PBAT复合膜的数值与PBAT无显著差异(p>0.05)。(3)将PBAT和15%CD-O/PBAT复合膜制成膜袋用于冰糖橙单果套袋包装,贮藏于20±1℃,60±5%RH环境中,并以未处理组(CK)和市售聚乙烯(PE)袋包装组为对照,定期测定冰糖橙品质。结果表明,与CK组相比,15%CD-O/PBAT膜袋在Buffy Coat Concentrate前8天能够显著降低冰糖橙的采后呼吸(p<0.05),对果实失重率的降低效果与PBAT膜袋相当,但低于PE膜袋;与PE膜袋相比,15%CD-O/PBAT膜袋能够更好的保持果皮和果肉的硬度,延缓果实软化进程。同时,相较于其他各组,15%CD-O/PBAT组冰糖橙在贮藏期间具有显著较高的抗坏血酸含量、可溶性固形物含量以及总酚含量(p<0.05),较好地维持了果实的营养品质。此外,对接种指状青霉的果实进行观察后发现,与PBAT组相比,15%CD-O/PBAT组果实的发病时间被推迟2天,病斑直径也显著较低(p<0.05)。综上所述,本研究采用β-CD对牛至精油进行包封,可实现精油的缓慢释放并能通过挤出吹塑工艺与PBAT复合成膜,且该复合膜具有一定的阻湿、阻氧和抗氧化活性,用于冰糖橙套袋包装,其能够更好地维持果实营养含量并抑制病害的发生,在果蔬采后贮藏保鲜中具有良好的应用潜力。
依卡倍特钠联合四联疗法治疗幽门螺杆菌阳性慢性萎缩性胃炎患者的效果
目的:观察依卡倍特钠联合四联疗法治疗幽门螺杆菌(Hp)阳性慢性萎缩性胃炎患者的效果。方法:选取2022年3月至local infection2023年1月该院收治的82例Hp阳性慢性萎缩性胃炎患者进行前瞻性研究,按照随机数字表法将其分为对照组和研究组各41例。对照组采用四联疗法治疗,研究组在对照组基础上联合依卡倍特钠治疗,两组均治疗28 d,治疗后随访3个月。比较两组临床疗效、治疗后3个月Hp根除率、治疗前后炎IACS-10759性因子[C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)]水平和不良反应发生率。结果:研究组治疗总有效率为95.GSK112021212%(39/41),高于对照组的78.05%(32/41),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后3个月,研究组Hp根除率为97.56%(40/41),高于对照组的80.49%(33/41),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组CRP、PCT水平均低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:依卡倍特钠联合四联疗法治疗Hp阳性慢性萎缩性胃炎患者可提高治疗总有效率和Hp根除率,降低炎性因子水平,效果优于单纯四联疗法治疗。
基于网络药理学联合分子对接探讨萹蓄治疗尿路感染的机制
目的:通过网络药理学及分子对接技术研究萹蓄的主要活性成分,探讨其治疗尿路感染的作用机制。方法:运用中GSK J4配制药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)收集萹蓄的有效成分和药物靶点,再通过人类基因数据库(GeneCards)找到疾病相关基因的靶点进行分析,对medically actionable diseases药物有效成分靶点和疾病靶点进行维恩(Venn)分析后得到二者的交集靶点,然后使用STRING数据库构建靶点蛋白互作(PPI)网络,通过R语言软件分析获得药物与疾病之间的交集靶点,使用Cytoscape 3.9.0软件绘制成分-靶点网络图,并在DAVID数据库中进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析,最后进行活性成分及核心靶点的分子对接。结果:共筛选出6种主要化学成分,并确定了86个药物与疾病相对应的作用靶点。PPI网络发现雌激素受体1(ESR1)、白细胞介素-6(IL-6)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)、表皮生长因子受体(EGCX-5461抑制剂FR)、缺氧诱导因子1A(HIF1A)等关键靶点。分子对接结果表明,槲皮素与核心靶点IL6、MYC、CASP3、EGFR之间的结合能均≤-5 kcal/mol。结论:本研究初步验证了萹蓄治疗尿路感染的作用机制。研究表明,萹蓄具有多种成分和多种靶点,其作用机制具有多样性,对进一步研究萹蓄治疗尿路感染提供了参考。
基于网络药理学联合分子对接探讨萹蓄治疗尿路感染的机制
目的:通过网络药理学及分子对接技术研究萹蓄的主要活性成分,探讨其治疗尿路感染的作用机制。方法:运用中GSK J4配制药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)收集萹蓄的有效成分和药物靶点,再通过人类基因数据库(GeneCards)找到疾病相关基因的靶点进行分析,对medically actionable diseases药物有效成分靶点和疾病靶点进行维恩(Venn)分析后得到二者的交集靶点,然后使用STRING数据库构建靶点蛋白互作(PPI)网络,通过R语言软件分析获得药物与疾病之间的交集靶点,使用Cytoscape 3.9.0软件绘制成分-靶点网络图,并在DAVID数据库中进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析,最后进行活性成分及核心靶点的分子对接。结果:共筛选出6种主要化学成分,并确定了86个药物与疾病相对应的作用靶点。PPI网络发现雌激素受体1(ESR1)、白细胞介素-6(IL-6)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)、表皮生长因子受体(EGCX-5461抑制剂FR)、缺氧诱导因子1A(HIF1A)等关键靶点。分子对接结果表明,槲皮素与核心靶点IL6、MYC、CASP3、EGFR之间的结合能均≤-5 kcal/mol。结论:本研究初步验证了萹蓄治疗尿路感染的作用机制。研究表明,萹蓄具有多种成分和多种靶点,其作用机制具有多样性,对进一步研究萹蓄治疗尿路感染提供了参考。
基于Nrf2/ROS 信号通路探讨岩藻多糖对食管癌细胞增殖的抑制作用
目的:探讨岩藻多糖对食管癌增殖的影响,并分析其机制。方法:MTT法分析细胞增殖抑制率,Hoechst Gefitinib-based PROTAC 3纯度33258 染色和流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA 探针检测ROS水平,Western blot法分析Nrf2、HO-1、NQO-1、Bcl-2、Bax、caspase-3水平,研究岩藻多糖对细胞增Liproxstatin-1殖以及Nrf2/ROS信号通路的影响。裸鼠成瘤实验验证岩藻多糖对瘤体的瘤重、瘤体积及Nrf2、HO-1、NQO-1水平的影响。结果:1~16 μg/mL岩藻多糖极显著抑制ECA109细胞增殖,48 h IC_(50)为3.26 μg/mL。与对照组(0.1%DMSO)相比,1、2、4μg/mL岩藻多糖处理后的ECA109细胞出现核凝聚、染色质不规则收缩、凋亡小体等明显的凋亡特征,(极)显著促进ECA109细胞凋亡,极显著下调Bcl-2表达水平,极显著上调Bax、Cleaved-caspase-3表达水平,极显著增加ROS水平,极显著降低Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白水平(P<0.05,P<0.01);Nrf2过表达能显著下调岩藻多糖抑制ECA109细胞增殖效果,显著下调ROS水平,显著上调Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白水平(P<0.05)。体内实验显示,50 mg/kg、100 mg/kg岩藻多糖极显著抑制瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体Nrf2、HO-1、NQO-1水平(P<0.05)。结论:岩藻多糖抑制ECA109细胞增殖,对体内移植瘤抑瘤效果显著,其机制与调控NrfBio-mathematical models2/ROS信号通路有关。
Staphylococcus simulans QB7胞外蛋白酶鉴定及产肽机制研究
发酵肉是天然生物活性肽良好来源,有学者已在发酵肉中发现抗氧化和降血压活性肽。目前关于发酵肉中生物活性肽的研究主要集中在直接从产品中分离提取、活性评价以及结构的鉴定,但关于发酵剂在发酵肉中富集生物活性肽以及形成机制尚不清楚。针对该问题,本研究首先从传统发酵肉中筛选出高蛋白酶活性发酵剂-凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase negative staphylococci,CNS),旨在获得富集抗氧化和抗炎多肽的肉品发酵剂,然后对其进行全基因测序,从基因组层面揭示发酵剂水解蛋白质的遗传基础;其次以香肠为发酵肉模型,探究发酵剂在香肠发酵过程中富集抗氧化和抗炎多肽形成的机制,并通过体外模拟胃肠道消化追踪抗氧化和抗炎活性的稳定性;最后以血管内皮细胞EA.hy926为氧化应激和炎症模型,研究多肽对血管内皮细胞氧化应激和炎症的保护作用,为实现发酵剂调控发酵肉中特定活性肽的生成提供理论支持,为高生物活性发酵肉制品的开发提供菌种资源。主要研究内容及结果如下:(1)为获得高蛋白酶活且具有产肽潜力的肉品发酵剂,以蛋白水解能力以及肉品发酵剂标准为评价指标从贵州传统的发酵肉中筛选出9株具有蛋白水解能力的菌株,包括QB7、WH17、QB15、KF2寻找更多、ZF4、KX8、QB11、ZF17、KX19。其中,菌株QB7蛋白水解能力最强;通过VITEK 2 Compact及其配套CBC鉴定卡和16S r DNA鉴定其为模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans,S.simulans QB7),具有耐受6.5%的Na Cl和150 mg/kg的Na NO_2、无毒力基因、不溶血、无脱羧酶、无脱氧核糖核酸酶活性和无生物膜形成能力等特点。S.simulans QB7发酵猪肉蛋白显著增加蛋白水解度(Degreselleck NMRe of hydrolysis,DH)、多肽的浓度、清除2,2-二苯基-1-苦基肼(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的能力和还原力(p<0.05),增加对血小板活化因子-乙酰水解酶(Platelet-ac-tivating factor-acetylhydrolase,PAF-AH)的抑制率。表明S.simulans QB7是一株优良的、符合肉品发酵剂标准并且具有产肽潜力的肉品发酵剂。(2)为在基因组层面阐明发酵剂水解蛋白的遗传基础,对S.simulans QB7进行全基因测序,通过Sigana P信号肽预测胞外蛋白酶的种类多样性,并通过基因注释预测胞外蛋白酶的功能多样性。结果表明,S.simulans QB7的全基因组由一个环状染色体和5个质粒组成。GC含量为36.04%,编码基因2487个,编码基因总长度为2318760 bp。S.simulans QB7基因编码4种不同类型的蛋白酶,包括82种金属蛋白酶、28种丝氨酸蛋白酶、10种半胱氨酸蛋白酶和10种天冬氨酸蛋白酶,蛋白酶主要分布在11个金属蛋白酶家族、4个丝氨酸蛋白酶家族和2个天冬氨酸蛋白酶家族。S.simulans QB7基因编码18种具有信号肽的蛋白酶,包括3种金属蛋白酶(M15家族)、10种丝氨酸蛋白酶(S11家族)和5种半胱氨酸蛋白酶(C15家族)。(3)为探究S.simulans QB7能否适应发酵肉基质发挥最大的蛋白酶活降解蛋白生成活性肽,首先优化S.simulans QB7产酶条件,然后对S.simulans QB7主要的胞外蛋白酶进行分离纯化及酶学性质研究。结果表明,最优产酶条件为:接种量10%,初始pH为6.5,发酵温度32℃,培养时间36 h,转速160 rpm。胞外蛋白酶在温度20~60℃、pH为3~8条件下酶活性较为稳定,金属离子Na~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)和Zn~(2+)在5和10mmol/L浓度下均显著增加蛋白酶活性(p<0.05)。其中,Ca~(2+)对酶活性影响最明显,而Cu~(2+)、Co~(2+)、Fe~(2+)、Ba~(2+)和Fe~(3+)离子的存在,导致蛋白酶活性受到显著抑制(p<0.05)。Na~+在5和10 mmol/L浓度下,蛋白酶活性分别提高到141.60%和159.36%。金属蛋白酶特异性抑制剂(o-phenanthroline,o-P)导致蛋白酶失去约75%的活性,而丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂(Phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)导致蛋白酶失去约60%的活性;经LC-MS/MS鉴定S.simulans QB7胞外蛋白酶为金属蛋白酶。(4)为进一步探究发酵肉中抗氧化和抗炎多肽的形成与S.simulans QB7的关系,解析S.simulans QB7水解蛋白产生活性肽的切割位点,以香肠为发酵肉模型,接种S.simulans QB7发酵香肠,通过体外化学法结合细胞法评估S.simulans QB7发酵对香肠中多肽抗氧化和抗炎活性的影响,并探究接种后香肠中微生物群落、氨基酸和脂肪酸含量的变化。结果表明,与未接菌组相比,接种S.simulans QB7显著增加肽浓度、清除DPPH自由基的能力和还原力(p<0.05)。此外,随着成熟时间的延长,多肽活性先增加后减少,在第16 d时,抗氧化和抗炎活性最强。对活性较高的样品进一步通过EA.hy926细胞模型评价抗氧化和抗炎活性,接种S.simulans QB7显著降低肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNFα)诱导EA.hy926细胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和超氧化物的水平(p<0.05),以及显著抑制炎症因子环氧合酶2(Cyclooxygen-ase 2,COX2)和血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达(p<0.05)。肽谱分析结果表明S.simulans QB7水解蛋白产生抗氧化和抗炎多肽优先水解K、L、G和R氨基酸与其他氨基酸形成的肽键。同时,接种S.simulans QB7显著抑制有害细菌(p<0.05),显著增加乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)、葡萄球菌数和氨基酸含量(p<0.05)。此外,S.simulans QB7有利于风味氨基酸(Ala、Glu、Try和Lys)的形成,并促进饱和脂肪酸的降解。(5)为分析S.simulans QB7发酵香肠产生的抗氧化和抗炎多肽抵抗胃肠道消化能力,对活性较高的样品进行体外模拟胃肠道消化研究,以血管内皮细胞EA.hy926为氧化应激和炎症模型研究其对血管内皮细胞抗氧化和抗炎活性的影响。经胃肠道消化后,氨基酸Arg、Ser和Glu含量不变;氨基酸ThrGenetic compensation、Tyr和Met的含量显著增加(p<0.05)。对TNFα诱导EA.hy926细胞中MDA和超氧化物的影响效果显著低于未消化之前的样品(p<0.05),而消化前后样品均显著抑制TNFα诱导EA.hy926细胞中COX2和VCAM-1蛋白的表达(p<0.05),并且对VCAM-1蛋白的表达在经胃肠道消化后抑制作用明显增强(p<0.05),但对COX2的表达与未消化之前相比无显著变化(p>0.05)。