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目的:探讨参归宁心合剂治疗冠心病稳定型心绞痛气阴两虚兼瘀证的临床疗效。方法:选取冠心病稳定型心绞痛气阴selleckchem Dolutegravir两虚兼瘀证患者98例，随机分为两组，对照组49例，观察组49例。对照组采用常规西医治疗，观察组在对照组基础上采用参归宁心合剂治疗。比较两组临床疗效、中医症状积分、血脂指标、炎症指标。结果:治疗后，观察组胸闷、胸痛、心悸、乏力、气短症状积分低于对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)。治疗后，观察组超点击此处敏C反应蛋白、同型半胱氨酸、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇低于对照组，高密度脂蛋白胆固醇高于对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组总有效率为63.33%高于对照cholestatic hepatitis组的36.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:参归宁心合剂可提高冠心病稳定型心绞痛气阴两虚夹瘀证的临床疗效，改善患者临床症状，降低血脂水平，减轻炎症反应。

红仁核桃是近年来栽培的核桃新品种，富含蛋白质和多种营养素，具有降血脂等多种保健功能。本文采用正交试验设计优化碱性蛋白酶酶解红仁核桃分离蛋白的工艺参数，以高血脂SD大鼠为模型，分别以红仁核桃多肽的低、中、高剂量（200、400、800 mg/（kg·BW））饲喂大鼠，测定大鼠体重、脏器重量和血清指标，并进行组织切片观察。结果表明红仁核桃分离蛋白最优酶解条件为：酶解pH 9.0，底物浓度4.0%，酶加入量4.0%，酶解温度55.0℃，在此条件下水解度（DH）达到6.96%。用红仁核桃分离蛋白酶解产物灌胃SD大鼠后能显著减缓大鼠体重、肝脏、肾脏和附睾脂肪组织重量的增加（P< 0.05），显www.selleck.cn/products/Nafamostat-mesylate著降低大鼠血清总胆固醇含量、甘油三酯含量、低密度脂蛋白含量、动脉粥broad-spectrum antibiotics样硬化指数（P< 0.05），防止高密度脂蛋白降低。红AMG510化学结构仁核桃分离蛋白酶解产物多肽具有较好的降血脂功能。

目的：探讨姜黄素(curcumin, CUR)对锰中毒大鼠神经损伤的干预效应及其机制。方法：成年雄性SD大鼠60只，随机分为5组，每组12只。(1)空白对照组：通过腹腔注射(intraperitoneal injection, ip)给予0.9%(质量分数)生理盐水，并通过灌胃(intragastric, ig)给予双蒸水(double distilled water, ddH_2O);(2)锰中毒模型组：ip给予MnCl_2 15 mg/kg(Mn~(2+) 6.48 mg/kg),ig给予ddH_2O;(3)单独姜黄素组：ip给予0.9%生理盐水，ig给予CUR 300 mg/kg;(4)MnCl_2+CUR1组：ip给予MnCl_2 15 mg/kg, ig给予CUR 100 mg/kg;(5)MnCl_2+CUR2组：ip给予MnCl_215 mg/kg, ig给予CUR 300 mg/kg)。5组大鼠每周给药5 d,连续给予4周。旷场实验、转棒实验检测动物的探索行为、焦虑抑郁状态、运动及平衡能力，Morris水迷宫(Morris water maze, MWM)实验检测动物的学习、记忆能力。每组6只大鼠进行脑纹状体HE染色和免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)检查，并且其中2只大鼠一侧纹状体进行透射电镜(transmission electron microscope, TEM)观察。每组另外6只大鼠的一侧纹状体利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定锰含量，另一侧纹状体用免疫印迹(Western blotting, WB)检测α-突触核蛋白(α-Syn3-MAuclein,α-Syn)、细胞质和细胞核转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、p-mTOR、Beclin1、P62和微管相关蛋白轻链蛋白3(microtubule-associated protein light chain-3,LC3)表达水平，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transterase-mediated dUTP nick end labeling; TUNEL)检测大鼠纹状体多巴胺能神经元凋亡。结果：旷场和转棒实验中，锰中毒模型组水平运动距离、直立次数、中央区运动时间和运动距离、在棒时间、在棒圈数较空白对照组显著降低(P<0.05),而MnCl_2+CUR2组的上述指标均较锰中毒模型组显著增加(P<0.05)。MWM定位航行实验第3、4天时，锰中毒模型组逃避潜伏期和游泳距离显著高于空白对照组，而MnCl_2+CUR2组则显著高于锰中毒模型组(P<0.05)。MWM探索实验中，锰中毒模型组大鼠穿越平台次数、目标象限游泳时间、目标象限游泳时间百分比、目标象限距离及目标象限距离百分比显著低于对照组(P<0.05),而MnCl_2+CUR2组大鼠这些指标均较锰中毒模型组显著增加Porphyrin biosynthesis(P<0.05)。脑纹状体IHC和HE染色发现，锰中毒模型大鼠脑纹状体中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)阳性多巴胺能神经细胞显著减少，嗜酸性细胞数量显著增加，MnCl_2+CUR1和MnCl_2+CUR2组TH阳性细胞显著增加，嗜酸性细胞减少，TEM观察发现，锰中毒模型组纹状体神经细胞出现染色质凝结，核固缩；线粒体水肿或空泡，可见溶酶体以及自噬泡。MnCl_2+CUR2组染色质凝结，核固缩，线粒体水肿、空泡等均较锰中毒大鼠明显改善，并可见更多的溶酶体以及自噬泡。免疫印迹检测发现，锰中毒模型组α-Syn表达水平较空白对照组显著增加，而MnCl_2+CUR2组聚集性α-Syn表达则较锰中毒模型组显著减少(P<0.05)。TFEB及自噬相关蛋白免疫印迹检测发现，与空白对照组比较，单独CUR组、锰中毒模型组、MnCl_2+CUR1和MnCl_2+CUR2组纹状体胞核TFEB表达均显著增加(P<0.05),与锰中毒模型组比较，MnCl_2+CUR1和MnCl_2+CUR2组其表达均显著增加(P<0.05);与空白对照组比较，各组mTOR、p-mTOR、P62蛋白表达水平显著降低，Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平则显著增加(P<0.05);与锰中毒模型组相比，MnCl_2+CUR1和MnCl_2+CUR2组大鼠脑纹状体中mTOR、p-mTOR及P62蛋白表达水平显著降低，Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平显著增加(P<0.05)。纹状体TUNEL检测结果发现，与空白对照组比较，锰中毒模型组和MnCl_2+CUR1组TUNEL阳性细胞显著增加(P<0.05);而与锰中毒模型组相比，MnCl_2+CUR2组TUNEL阳性细胞则显著降低(P<0.05)。结论：一定剂量的姜黄素干预可以减轻锰中毒大鼠纹状体多巴胺能Tezacaftor临床试验神经元损伤，改善锰中毒大鼠的神经行为症状，减少α-Syn聚集，减少细胞凋亡，其可能的机制是通过促进TFEB核转位增强细胞自噬。

目的 基于PI3K-Akt-mTOR通路探究黄芩苷(C_(21)H_(18)O_(11))对淋巴瘤细胞增殖及自噬的作用机制。方法 用CCK-8和细胞计数法检测不同质量浓度(0、50、100、200、400、800μg·mL~(-1))黄芩苷对淋巴瘤细胞系Raji细胞增殖的抑制作用，通过Annexin V-FITC/PI双染法及DAPI染色法观察细胞凋亡及自噬过程，用蛋白印迹实验检测黄芩苷对细胞凋亡和自噬过程上游机制的影响。结果 黄芩苷能够显著抑制磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidyl inosiselleck Laduviglusibtol3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(alkaline protein kinases, Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mammal target of rapamycin, mTserum biomarkerOR)蛋白的磷酸化，即显著降低p-PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达水平(P<0.01);黄芩苷能显著上调LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平，抑制p62蛋白的表达(P<0.01),进而诱Fer-1价格导Raji细胞的凋亡和自噬。结论 黄芩苷可能通过抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路抑制淋巴瘤细胞的生长，并通过提高LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平从而抑制p62的表达，进而促进Raji细胞的凋亡和自噬过程。

微生物是合成天然产物的“细胞工厂”,能够利用体内的次级代谢网络将羧酸、氨基酸、糖类等小分子底物组装成为复杂多样的终产物,期间涉及大量蛋白酶的精密控制和协同作用。而这些蛋白酶的编码基因往往都是成簇存在的,也就是常说的生物合成基因簇(BGC)。合成生物学使能技术的快速发展促进了理想微生物“细胞工厂”的构建,通过设计改造微生物使之产生特定的天然产物,对微生物天然产物的生物合成途径改造主要涉及BGC的克隆、编辑和表达等。selleck抑制剂本文利用和开发前沿的合成生物学使能技术,如酿酒酵母转化偶联重组(TAR)、CRISPR/Cas9基因编辑以及Red/ET重组着眼于微生物天然产物的生产、改造和发现,旨在实现活性天然产物的高效合成、新型天然产物的结构衍生Belumosudil使用方法以及未知天然产物的定向挖掘。林可霉素是一种广谱抗生素,对多种致病菌具有良好的抑制作用。前期研究表明,敲除lmb V基因能够得到含有麦角硫因的林可霉素中间体。为了高效制备林可霉素及其重要中间体,使用CRISPR/Cas9-TAR偶联技术抓取了林可霉素BGC,并敲除了其中的lmb V基因。由此获得的基因簇在Streptomyces lividans TK24和Streptomyces coelicolor M145中进行异源表达。然而,重组菌株的发酵无法产生林可霉素及其中间体。通过RT-PCR实验发现林可霉素BGC在Streptomyces lividans TK24中没有被激活,后续需要尝试过表达正调控基因lmb U来激活相关基因簇。Sch40832是一种含有二氢咪唑并哌啶核心环的双环类硫肽,具有抗肿瘤活性。目前,对于Sch40832的生物合成机制仍然知之甚少。利用CRISPR/Cas9-TAR偶联技术成功抓取了Sch40832的BGC以便进行后续的一系列遗传操作进一步研究Sch40832的生物合成途径以及相关基因的功能研究。维里硫酰胺是一种含有特征硫酰胺键和烯基硫醚环的核糖体合成及后修饰肽,具有良好的诱导细胞凋亡活性。目前,对于维里硫酰胺的结构后修饰研究仍然有限。对敲除tva G _(S-87)和tva J_(S-87)基因的突变株进行发酵,通过LC-MS检测发酵产物推测维里硫酰胺的后修饰步骤。由于突变株中中间体的累积量太低,无法分离纯化目标化合物并鉴定结构,通过接合转移的方法成功将构建得到的的p JTU2554-?Autoimmune dementiatva G_(S-87)和p JTU2554-?tva J_(S-87)成功导入到?tva G_(S-87)和?tva J_(S-87)突变株,由此获得的重组菌株能够积累更多的目标化合物,有利于后续开展维里硫酰胺结构修饰反应的生化机制解析。

目的：探究雷帕霉素对川崎病（Kawasaki disease,KD）冠状动脉损害的抗炎作用及其分子机制。方法：体外培养人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery endothelial cells,HCAEC），利用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激HCAEC 4 h以模拟KD的局部炎性病变BMN 673浓度，建立KD的细胞模型。整个实验分组为：对照组、TNF-α刺激组和TNF-α+雷帕霉素（50和100 nmol/L）组，雷帕霉素均于TNF-α刺激前24 h加入。通过RT-qPCR和Western blot检测各组炎症因子和自噬相关因子的mRNA及蛋白表达水平，并检测蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路和核因子κB(n此网站uclear factor-κB,NF-κB)的活化状态；单丹磺酰尸胺染色后用倒置荧光显微镜观察各组自噬泡的染色情况。结果：HCAEC经TNF-α刺激后炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和IL-8的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.01），自噬相关蛋白beclin-1表达水平和LC3-II/LCImmediate Kangaroo Mother Care (iKMC)3-I比值显著下降（P<0.05）,p62表达水平显著上升（P<0.05），同时磷酸化的AKT、mTOR(P<0.01)及NF-κB(P<0.05)蛋白水平显著上升。经雷帕霉素处理后AKT/mTOR(P<0.01)及NF-κB(P<0.05)信号通路被抑制，自噬水平激活（P<0.05），各炎症因子的表达水平显著下降（P<0.01）。结论：雷帕霉素可能通过AKT/mTOR信号通路调节自噬水平，并抑制NF-κB信号转导通路，从而降低KD冠状动脉内皮细胞炎症因子的表达。

目的 探索免疫联合靶向治疗haematology (drugs and medicines)对原发性肝癌病人发生远期脑卒中的影响。方法 回顾性分析2016年1月至2018年Galunisertib化学结构12月西安交通大学第一附属医院肝胆外科134例原发性肝癌病人临床资料，采用单因素及多因素Cox回归筛选出影响原发性肝癌病人发生远期脑卒中的相关危险因素，采用倾向性评分匹配对独立危险因素和组间差MRTX849分子量异因素进行匹配，Kaplan-Meier法对相关危险因素的脑卒中发生率进行估计，绘制生存曲线并进行统计学检验。结果 多因素Cox回归分析发现年龄、免疫靶向联合治疗是肝癌病人发生远期脑卒的独立危险因素（P<0.05）,Kaplan-Meier预后分析显示在匹配前后免疫靶向联合治疗均是肝癌病人发生远期脑卒的重要风险因素，匹配前风险比为9.1、匹配后风险比为11.8（均P<0.05）。结论 免疫联合靶向治疗的肝癌病人发生远期脑卒中的风险增加。

本研究旨在探讨PLIN2在BCG（Bacillus Calmette-Guérin）感染的小鼠巨噬细胞RAW264.7中对自噬的调控作用。利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达，结合BCG感染，通过免疫印记、流式细胞术和免疫荧光等技术，检测胞内PLIN2、自噬、内质网应激及脂肪酸代谢相关因子指标的表达变化。结果显示：BCG感染显著上调巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达（P＜0.05），极显著上调自噬相关蛋白ATG5（P＜0.01）、ATG12（P＜0.001）及LC3（P＜0.001）的表达并伴随着细胞内中性脂质的蓄积。敲减PLIN2能使BCG感染的巨噬细胞RNSC 119875AW264.7中自噬相关蛋白ATG5（P＜0.05）和ATG12（P＜0.05）显著下调以及LC3（P＜0.001）极显著下调，细Fluimucil Antibiotic IT胞自噬率极显著降低（P＜0.001）并极显著降低细胞内中性脂质的含量（P＜0.001）。同时，敲减PLIN2显著下调CHOP（P＜0.05）并极显著下调ATF4（P＜0.001）内质网应激相关蛋白表达，细胞内Ca~(2+)浓度极显著降低（P＜0.001）。此外，利用内质网应激激动剂Tunicamycin持续激活内质网应激通路后，无论是否敲减PLIN2，BCG感染的巨噬细胞内自噬相关蛋白表达均无显著差异（P＞0.05）。BCG感染巨噬细胞上调了PLIN2的表达，而PLIN2通过上调细胞内脂肪酸含量，进而级联激活PERK-eIF2α-ATF4-CHOP内质网Nirogacestat应激信号通路，诱导细胞自噬发生。

目的 通过观察苗药熏洗疗法对膝骨性关节炎（KOA）模型家兔软骨细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的影响，探讨苗药熏洗疗法防治KOA软骨退变的作用机制。方法 40只家兔随机分为正常对照组、模型组、药洗组、熏蒸组、熏洗组，每组8只。除正常对照组外，其他4组家兔右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶制造KOA模型，造模成功后，药洗组、熏蒸组与熏洗组家兔分别经苗药药洗、熏蒸及熏洗治疗20d。取家兔软骨组织培养软骨细胞，制备软骨细胞爬片，免疫组织化学染色法检测软骨细胞MMP-1、TIMP-1蛋白表达，实时荧光定量PCR检测软骨Institutes of Medicine细胞MMP-1、TIMP-1 mRNA的表达。结果 与正常组比较，模型组软骨细胞MMP-1、TIMP-1平均透光度、阳性细胞率以及m RNA表达差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，各治疗组（药洗组、熏蒸组、熏洗组）家兔软骨细胞MMP-1平均透光度显著增高（P<0.05），阳性细胞百分率显著降低（P<0.Navitoclax体内实验剂量05）,MMP-1 mRNA表达显著降低；TIMP-1平均透光度显著降低（P<0.05），阳性细胞百分率显著增高（P<0.05）,TIMP-1 mRNA表达显著增高（P<0.05）；selleck熏洗组与药洗组、熏蒸组比较，上述指标差异有统计学意义（P<0.05）。结论 苗药熏洗可能通过下调MMP-1的蛋白和m RNA表达，以及上调TIMP-1蛋白和m RNA的表达，来延缓软骨细胞的损伤，达到防治KOA的目的。

癌症是一种以异常细胞无限selleck PLX3397增殖和扩散为特征的复杂疾病,一直以来是全球人类的主要死亡原因,对人类的生命健康造成了极大的危害。肿瘤标志物对于癌症早期诊断、监测和预后治疗具有重要参考价值,已成为预测多种肿瘤行为的可靠工具。因此,及时、准确的检测肿瘤标志物对于癌症的临床诊断、监测以及预后治疗非常重要。目前,临床上常用酶联免疫吸附法(ELISA)对肿瘤标志物进行定量分析,但该方法成本高、灵敏度低且需要专业技术知识,对各类肿瘤标志物的准确测定存在一定局限性。荧光免疫传感分析法是目前最有前景的免疫测定法之一,具有操作简单、响应速度快和稳定性高等优点。传统的荧光免疫传感器常用酶标记抗体作为识别单元、有机染料用作荧光探针,从而存在易受环境因素影响、灵敏度不高的问题。纳米材料具有独特光稳定性、催化性质和生物相容性等特性,为构建稳定、灵敏的荧光免疫传感器开辟了新的途径。本论文基于功能化纳米材料,结合目前已开发的荧光免疫传感器的不足和实际应用的需求,构建了系列简单、灵敏的荧光免疫传感器用于检测肿瘤标志物。主要研究内容如下:1、合成了DNA功能化金纳米颗粒(Au NPs)用于HCR信号放大的荧光免疫传感平台灵敏检测癌胚抗原(CEA)。在本研究中,将抗体固定到羧基功能化的磁珠上形成磁控免疫探针(MB-Ab),CEA适配体链与S_0引发链通过Au-S键修饰至Au NPs表面形成功能化Au NPs(Apt/Au NPs/S_0)。存在CEA时,Apt/Au NPs/S_0与MB-Ab特异性识别CEA抗原形成夹心免疫复合物,接着引入发夹链S_1与S_2,夹心免疫复合物中的S_0引发S_1、S_2链发生HCR反应,在Au NPs表面形成大量含G-四链体的长双链体DNA。随后加入亚甲基蓝溶液,亚甲基蓝通过π-π堆积相互作用嵌入至G-四链体中以及双链DNA骨架中,辅以磁性分离,导致溶液中亚甲基蓝明显减少,溶液中亚甲基蓝的荧光强度显著降低,通过检测溶液中的MB荧光强度来定量CEA。本工作构建的HCR信号放大型荧光免疫传感器可有效检测CEA,其线性检测范围为0.1～80ng m L~(-1),检测限为0.075 ng m L~(-1),主要归因于MB-Ab的分离富集能力、Au NPs表面负载能力以及HCR信号放大作用。此外,考察了荧光免疫传感器的选择性并成功将其用于人血清样品中CEA的测定,为早期临床诊断提供了一种有效途径。2、利用免疫磁珠、脂质体包埋金簇和链霉亲和素-生物素识别设计了一种多功能的脂质体三维网络结构,基于这种多功能网络结构建立了一种磁控荧光免疫传感器用于选择性、灵敏的检测CEA。加入CEA与MB-Ab及CEA适配体修饰的脂质体包埋金簇复合物(Biotin-Lip-Au NCs)形成夹心免疫复合物,再引入链霉亲和素和表面带生cancer biology物素的Biotin-Lip-Au NCs形成脂质体三维网络结构。利用曲拉通X-100破裂脂质体使脂质体三维网络中的Au NCs释放,辅以磁性分离得到大量释放的Au NCs,将大量Au NCs的荧光作为信号输出。设计的磁控免疫传感器具有良好的选择性和灵敏度,可有效检测CEA,其线性检测范围为0.05～40 ng m L~(-1),检测下限为13.2 pg m L~(-1)。该免疫传感器能够灵敏的检测血清样品中的CEA,为简化现场分析设备开发中的实验过程提供有效Microbiology抑制剂途径。3、合成了聚多巴胺功能化的过氧化铜/沸石咪唑骨架(CP/ZIF-8/PDA)纳米颗粒自供H_2O_2用于荧光免疫吸附法(FLISA)测定CEA。本研究中将CEA适配体修饰到CP/ZIF-8/PDA表面形成信号探针。存在CEA时,信号探针可通过夹心免疫反应固定到96孔板上,在酸性条件下腐蚀PDA和ZIF-8释放CP,CP在酸性条件下同时生成Cu~(2+)和H_2O_2,接着Cu~(2+)和H_2O_2进行类芬顿反应生成羟基自由基(·OH),·OH通过自身的强氧化性将邻苯二胺(OPD)氧化为2,3-二氨基吩嗪(DPA),DPA的荧光可作为有效的信号输出。本工作利用酸触发级联反应,Cu~(2+)和H_2O_2同时同地产生,在溶液某处富集成高浓度,从而进行高效的类芬顿反应,生成大量·OH,促进OPD氧化。通过两轮高效反应,可有效放大荧光信号,提高荧光免疫传感器的灵敏度。该法操作简单,无需酶参与催化,无需外加金属离子或H_2O_2即可发生高效的类芬顿反应,实现了CEA的灵敏检测,其线性检测范围为0.01～20 ng m L~(-1),检测下限为7.6 pg m L~(-1)。