目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)发病机制涉及动脉内膜中炎症细胞活化、脂质异常沉积和斑块形成等特征性慢性炎症病变,故AS既往被定义为慢性炎症性疾病,但越来越多的证据表明免疫调节参与并影响AS的发生发展。CD4+T细胞在细胞免疫中起到辅助作用,辅助性T细胞17(T helpfrozen mitral bioprosthesiser cell 17,Th17CL 318952临床试验)和调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)细胞被证实在AS进程中发挥调节作用,其具体机制有待进一步研究。胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)已在临床中被观察到对AS患者有益,目前有研究显示GLP-1具有降脂和免疫调节作用,但GLP-1带来心血管获益的机制尚不十分明确,这在一定程度上阻碍了GLP-1的广泛临床应用。关于GLP-1是否通过调节免疫失衡影响动脉粥样硬化的疾病进程,以及该过程是否与CD4+T细胞的分化有关,目前尚缺少研究证据。本研究旨在探索GLP-1干预CD4+T细胞后是否引起与T细胞共培养的巨噬细胞功能变化,从体外研究方面对GLP-1调控Treg/Th17比例延缓AS相关机制进行深入探讨。方法:使用12周龄C57雄性小鼠分离小鼠腹腔巨噬细胞和脾脏CD4+T细胞;培养分离所得CD4+T细胞,分为空白对照组、GLP-1 10nmol/L、GLP-1 100 nmol/L、GLP-1抑制剂Avexitide 100nmol/L、Avexitide 100nmol/L+GLP-1 100nmol/L五组,干预24小时,上清液使用酶联免疫法测定IL-10、IL-17的含量,分离细胞进行western、PCR测定Treg细胞相关指标:Foxp3、IL-10,Th17细胞指标:RORγt、IL-17;将上述培养的五组CD4+T细胞与腹腔巨噬细胞进行transwell共培养,24小时后去除CD4+T细胞,用氧化低密度脂蛋白(Oxidized Low Density Lipoprotein,Ox-LDL)干预共培养后的巨噬细胞,进行油红O染色,观察并计算巨噬细胞吞噬脂质的程度,western、PCR测定巨噬细胞胆固醇外流指标:ABCA1和ABCG1,以及推测涉及的通路关键指标PI3K、AKT、m TOR。结果:1.CD4+T细胞中Foxp3、RORγt的mRNA、蛋白表达水平与空白对照组相比,GLP-购买PF-073213321干预组Foxp3的mRNA和蛋白质表达量均升高,RORγt的mRNA和蛋白质表达量均降低,Avexitide干预组Foxp3的mRNA和蛋白质表达量均降低,RORγt的mRNA和蛋白质表达量均升高,差异均具有统计学意义(p<0.05);与Avexitide干预组相比,Avexitide+GLP-1干预组Foxp3的mRNA和蛋白质表达量均升高,RORγt的mRNA和蛋白质表达量均降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。2.CD4+T细胞中IL-10、IL-17的mRNA、蛋白表达及细胞因子分泌水平与空白对照组相比,GLP-1干预组IL-10的mRNA水平、蛋白质表达量和分泌水平升高,IL-17的mRNA、蛋白质表达量和分泌水平降低,Avexitide干预组IL-10的mRNA、蛋白质表达量和分泌水平降低,IL-17的mRNA、蛋白质表达量和分泌水平升高,差异具有统计学意义(p<0.05);与Avexitide干预组相比,Avexitide+GLP-1干预组IL-10的mRNA、蛋白质表达量和分泌水平升高,IL-17的mRNA水平降低,差异有统计学意义(p<0.05)。3.Ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫化后油红O染色与空白对照组相比,GLP-1干预组细胞泡沫化程度降低,与Avexitide干预组相比,Avexitide+GLP-1干预组细胞泡沫化程度有所下降,差异具有统计学意义(p<0.05)。4.CD4+T共培养的巨噬细胞ABCA1和ABCG1 mRNA、蛋白表达水平与空白对照组相比,GLP-1干预组ABCA1和ABCG1的mRNA、蛋白质表达量均升高,Avexitide干预组ABCA1和ABCG1的mRNA、蛋白质表达量均降低,差异具有统计学意义(p<0.05);与Avexitide干预组相比,Avexitide+GLP-1干预组ABCA1和ABCG1的mRNA表达量均升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。5.GLP-1及其拮抗剂调节CD4+T细胞分化比例及功能的机制探索使用String数据库预测GLP-1与CD4+T细胞间蛋白质-蛋白质相互作用网络显示PI3K/AKT/m TOR通路是连接GLP-1/GLP-1R和Treg/Th17细胞相关关键蛋白的节点。在此基础上进行PCR验证,结果显示与空白对照组相比,GLP-1干预组PI3K、AKT、m TOR的mRNA表达量均降低,Avexitide干预组PI3K、AKT、m TOR的mRNA表达量均升高,差异具有统计学意义(p<0.05);与Avexitide干预组相比,Avexitide+GLP-1干预组PI3K、AKT、m TOR的mRNA表达量均降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:GLP-1与其受体拮抗剂Avexitide调控CD4+T细胞分化为Treg/Th17细胞的比例与PI3K/AKT/m TOR通路有关;Treg/Th17细胞比例升高通过影响巨噬细胞胆固醇外流途径减少巨噬细胞泡沫化;GLP-1上调CD4+T细胞分化为Treg/Th17细胞的比例,通过影响胆固醇外流减少动脉粥样硬化中的巨噬细胞泡沫化。