【目的】脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是一种严重且致残的疾病,会严重降低患者的生活质量并增加患者生活与经济上的负担。SCI会发生神经传递的不可逆转的中断,目前没有有效的疗法可实现神经或功能的完全恢复。竞争性内源RNA(ceRNA)网络在SCI发展和修复中起重要调节作用。本实验拟通过高通量测序筛选在SCI中差异表达的lncRNA和miRNA及其靶基因,检测ceRNA网络(lncRNA/miRNA/mRNA轴)在SCI中的作用及机制,为后续寻找SCI的治疗靶点提供实验依据。【方法】1.建立SCI模型,通过斜板实验、BBB评分、足迹检测、脊髓大体形态和Nissl染色检测大鼠模型成功。2.在脊髓损伤后1 d,3 d,7 d取出损伤中心的脊髓进行高通infant microbiome量测序(HTS),并进一步筛选出与SCI修复进程相关的miRNA—miR-6315。3.利用富集分析工具DAVID分析差异mRNA参与的基因本体论(Gene ontology,GO)系统和KEGG pathway。使用Ensembl数据库和MiRanda软件预测出Smo具有miR-6315的结合位点。4.通过qRT-PCR检测在SCI和Glu损伤后,miR-6315和Smo的表达是否与测序结果一致,双荧光素酶报告基因实验验证miR-6315对靶基因Smo的3’UTR的作用靶点。5.qRT-PCR和Western blot实验检测在大鼠SCI后1 d,7 d,14 d,28 d,miR-6315和Smo的表达水平并做相关性分析。6.通过GENEMANIA数据库预测Smo靶标可能是抗铁死亡通路因子xCT(SLC7A11)。采用qRT-PCR和Western blot检测抗铁死亡通路因子xCT,GSH,GPX4在SCI后不同时间点的表达水平。7.构建miR-6315低表达腺病毒,感染原代脊髓神经元和脊髓组织。miR-6315相对表达量采用qRT-PCR检测。脊髓神经元和脊髓组织中的分组分别为:Normal组、Glu组、Glu+NC组与Glu+miR-6315-si组;Sham组、SCI组、SCI+NC组、SCI+miR-6315-si组。通过免疫荧光染色(IF)检测神经元标记物(NeuN)、轴突再生标记物(GAP43)和突触素(SYP),划痕实验检测神经元的迁移率。BBB评分、斜板实验及电生理检测大鼠的运动功能。qRT-PCR和Western blot检测miR-6315,Smo及抗铁死亡通路因子xCT,GSH,GPX4的表达水平。8.构建Smo过表达和低表达腺病毒,感染原代脊髓神经元和脊髓组织。Smo相对表达量采用qRT-PCR和Western blot检测。脊髓神经元和脊髓组织中的分组分别为:Normal组、Glu组、Glu+Smo-NC组、Glu+Smo组、Glu+Smo-si-NC组和Glu+Smo-si组;Sham组、SCI组、SCI+Smo-NC组、SCI+Smo组、SCI+Smo-si-NC组和SCI+Smo-si组。通过免疫荧光染色(IF)检测神经元标记物(NeuN)、轴突再生标记物(GAP43)和突触素(SYP)。BBB评分、斜板实验及电生理检测大鼠的运动功能。qRT-PCR和Western blot检测Smo及抗铁死亡通路因子xCT,GSH,GPX4的表达水平。9.根据HTS数据,利用MiRanda软件对差异表达的lncRNA与显著上调的miR-6315进行结合位点预测,对Target Scan和MiRanda评分进行综合分析后,lncRNA-Lepr被选为潜在的关键lncRNA。通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA-Lepr和miR-6315的靶向结合关系。qRT-PCR实验检测在大鼠SCI后1d,7d,14d,28d,lncRNA-Lepr的表达水平并与miR-6315做相关性分析。10.构建lncRNA过表达腺病毒,感染原代脊髓神经元和脊髓组织。lncRNA相对表达量采用qRT-PCR检测。脊髓神经元和脊髓组织中的分组分别为:Normal组、Glu组、Glu+NC组与Glu+lncRNA-Lepr组;Sham组、SCI组、SCI+NC组、SCI+lncRNA-Lepr组。通过免疫荧光染色(IF)检测各组神经元标记物(NeuN)、轴突再生标记物(GAP43)和突触素(SYP),划痕实验检测神经元的迁移率,CCK8检测细胞活力,BDA顺行追踪检测轴突再生,ROS、Fe~(2+)和MDA的相对表达量检测铁死亡。BBB评分、斜板实验及电生理检测大鼠的运动功能。qRT-PCR和Western blot检测lncRNA-Lepr,miR-6315,Smo及抗铁死亡通路因子xCT,GSH,GPX4,铁死亡相关因子ACSL4的表达水平。【结果】1.成功建立大鼠SCI模型,大鼠后肢完全没有运动功能,脊髓损伤局部神经元减少。2.SCI 24 h的脊髓中有5个差异表达上调的miRNAs,其中miR-6315是在SCI后24 h达到最高水平,在3 d,7 d逐渐下降的差异表达最显著的miRNA。差异表达的mRNA中富集到了轴突生长锥通路,其中轴突生长锥通路因子Smo与miR-6315有结合位点。3.双荧光素酶报告基因实验证实了Smselleck抑制剂o是miR-6315的直接靶点。SCI后1d,7 d,14 d,28 d,miR-6315与Smo的mRNA的表达量呈负相关性。4.GENEMANIA数据库预测Smo可能调节抗铁死亡通路因子xCT,xCT和GPX4在损伤后1 d的mRNA和蛋白质表达最低,从损伤后7 d开始不断增加,并在第28 d达到高峰。GSH的表达变化与xCT和GPX4的变化趋势相同。xCT/GSH/GPX4轴参与SCI进展过程。5selleck激酶抑制剂.miR-6315低表达腺病毒成功感染原代脊髓神经元和脊髓组织。在损伤后的神经元及SCI 1 d,14 d,28 d的脊髓组织中,miR-6315的表达被沉默后促进神经元轴突再生、存活、突触素生成和神经元迁移,并改善大鼠远期(28d)的运动功能。沉默miR-6315后,Smo的mRNA和蛋白质表达水平显著增高,抗铁死亡通路因子xCT,GSH和GPX4的mRNA和蛋白质表达也显著升高。6.Smo低表达和过表达腺病毒成功感染原代脊髓神经元和脊髓组织。在损伤后的神经元及SCI 1 d,14 d,28 d的脊髓组织中,Smo过表达后促进神经元轴突再生、存活和突触素生成,并改善大鼠远期(28 d)的运动功能。而Smo低表达后会导致神经元数量减少、细胞胞体萎缩、神经轴突长度缩短和突触素生成减少,加重SCI诱导的运动功能障碍。Smo过表达后,Smo的mRNA和蛋白质表达水平显著增高,抗铁死亡通路因子xCT,GSH和GPX4也显著升高,Smo低表达的结果与之相反。7.通过数据库结合位点预测发现lncRNA-Lepr是在靶向miR-6315的所有差异表达的lncRNA中具有最高的结合率。双荧光素酶报告基因检测结果显示lncRNA-Lepr可以与miR-6315直接结合。对lncRNA-Lepr和miR-6315在SCI 1d、7 d、14 d、28 d的脊髓组织中的表达量进行相关性分析,结果显示两者呈负相关。8.lncRNA-Lepr过表达腺病毒成功感染原代脊髓神经元和脊髓组织。在损伤后的神经元及SCI 1 d,14 d,28 d的脊髓组织中,lncRNA-Lepr过表达后促进神经元轴突再生、存活和突触素生成,抑制Fe~(2+)、ROS和MDA的生成,并改善大鼠远期(28 d)的运动功能。lncRNA-Lepr过表达后,miR-6315的mRNA表达显著下降,Smo的mRNA和蛋白质表达水平显著增高,抗铁死亡通路因子xCT,GSH和GPX4也显著升高,铁死亡相关因子ACSL4显著下降。【结论】1.在SCI后,miR-6315与Smo存在直接结合,miR-6315低表达后,可以增加Smo的水平,上调xCT,GSH和GPX4的表达,促进神经元存活及轴突再生,并改善大鼠下肢运动功能。2.在SCI后,Smo过表达可以上调xCT,GSH和GPX4的表达,促进神经元存活及轴突再生,并改善大鼠下肢运动功能,Smo低表达则相反。3.lncRNA-Lepr与miR-6315存在竞争性抑制关系,过表达lncRNA-Lepr可通过抑制miR-6315水平,从而释放Smo,Smo表达上调后激活xCT/GSH/GPX4轴,抑制细胞铁死亡,促进轴突再生,从而改善大鼠下肢运动功能障碍。总之,本研究在SCI中鉴定了lncRNA-Lepr/miR-6315/Smo新网络。因此,lncRNA-Lepr/miR-6315/Smo轴可能是SCI治疗具有重要临床意义的候选靶点。
埃索美拉唑联合EGFR抑制剂AG1478对胃癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响
目的：探讨埃索美拉唑联合表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂AG1478对胃癌细胞增殖、迁移、凋亡、自噬的影响与分子机制。方法：实验分为空白对照组、埃索美拉唑组、AG1478组和埃索美拉唑联合AG1478组，采用CCK-8法、EdU增殖实验、Transweselleck化学ll、划痕实验、流式细胞术、细胞免疫荧光法分别检测各组人胃癌AGS、SGC-7901细胞活力、增殖、迁移、凋亡和自噬变化。Western blotting检测EGFR、c-MYC、P53、cleaved-PARP、LC3B、PI3K、Recurrent otitis mediaAKT、P-AKT蛋白的表达情况。结果：AG1478抑制胃癌细胞活力和EGFR表达呈浓度依赖性。埃索美拉唑和AG1478能够明显降低胃癌细胞活力、抑制其增殖和迁移，Pidnarulex供应商诱导细胞凋亡和自噬（P＜0.05），且两者联合有协同作用（P＜0.05）。埃索美拉唑和AG1478均能降低AGS和SGC-7901细胞PI3K、AKT、P-AKT蛋白的表达（P＜0.05），两者联合对降低P-AKT的表达有协同作用（P＜0.05）。结论：埃索美拉唑联合EGFR抑制剂AG1478对胃癌细胞增殖、迁移有抑制作用，且二者协同诱导细胞凋亡和自噬，两者联合可能是一种潜在的个体化治疗策略。
八公山腐乳工业发酵过程中生物胺的变化规律
为探究八公山腐乳在genetic renal disease工业发酵过程中生物胺变化，对各发酵阶段的生物胺、游离氨基酸、主要理化指标(氨基态氮、总酸、pH、食盐和水分)以及微生物群落变化进行检测，并分析生物胺与各指标间的相关性。结果表明，腐乳样本中共检测到组胺、腐胺、亚精胺、尸胺和酪胺5种生物胺，发酵过程中总生物胺呈先升后降趋势，含量为54.05～641.03 mg/kg,以组胺为主。氨基态氮和总酸在发酵过程中呈增加趋势，到后发酵中期趋于稳LGK-974 molecular weight定。谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、精氨酸为腐乳主要游离氨基酸，总游离氨基酸含量呈升降交替变化。细菌总数、霉菌/酵母菌总数在腐乳前发酵及盐坯阶段均有显著变化，均在盐坯阶段显著降低(P<0.05),后发酵阶段细菌总数呈增加趋势，霉菌/酵母菌数无显著变化。宏基因组分析腐乳中微生物群落结果显示，各发酵阶段共有优势细菌门为厚壁菌门、变形菌门，优势细菌属为不动杆菌属、乳球菌属；毛霉菌门为优势真菌门，放射毛霉菌属为优势真菌属，其他菌GDC-0068群随发酵进行有明显差异。通过Pearson和冗余分析发现，组胺和总生物胺与氨基态氮和总酸呈极显著正相关(P<0.01),总生物胺与总游离氨基酸呈显著正相关(P<0.05),而各生物胺与相应前体氨基酸相关性较弱。明串珠菌属、乳球菌属与尸胺、酪胺和组胺呈正相关，总状横梗霉属、根霉属与组胺和腐胺均呈显著正相关。该研究结果可为腐乳中生物胺的有效控制提供一定的理论依据。
血小板与淋巴细胞比值、中性粒细胞与淋巴细胞比值与2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化斑块的相关性
目的 探讨血小板与淋巴细胞比值(PLR)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)与2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉粥样硬化(CAS)斑块的相关性，以及PLR、NLR对T2DM患者CAS斑块的预测价值。方法 选择2019年9月至2021年11月新乡医学院第三附属医院内分泌科收治的369例T2DM患者为研究对象。通过查阅电子医疗记录系统收集患者的性别、年龄、T2DM病程、体质量指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒Belumosudil体内实验剂量张压(DBP)、个人史、既往史等临床资料。应用全自动血常规分析仪检测中性粒细胞计数(NC)、淋巴细胞计数(LC)、血小板(PLT)计数，计算PLR、NLR;应用生物化学分析仪检测空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平；应用高效液相色谱法测糖化血红蛋白(HbA1c)水平。按照是否合并CAS斑块将T2DM患者分为T2DM未合并CAS斑块组(n=94)和T2DM合并CAS斑块组(n=275),比较2组患者的一般临床资料、血液指标及PLR、NLR。按照合并CAS斑块数量将T2DM患者分为无斑块组(A组，n=94)、1个斑块组(B组，n=79)、2个斑块组(C组，n=89)、3个及以上斑块组(D组，n=107),将T2DM未合并CAS斑块组与T2DM合并CAS斑块组间差异有统计学意义的指标进行4组间比较。根据PLR四分位数将患者分为P1组(PLR≤94.87,n=93)、P2组(94.87
抗凝血活性分子的研究进展
血栓诱发的心脑血管疾病的发病率在世界范围内不断增长,严重威胁人类健康。研究表明,形成血栓的三个因素分别为血流缓慢、血液高凝状态以及血管损伤。根据血栓形成的机制,抗血栓药物被分为三类,包括抗凝剂、血小板抑制剂和纤维蛋白溶解剂。由于凝血系统和抗凝血系统在血栓形确认细节成的过程中扮演着重要的作用,因此Wearable biomedical device受到了越来越多的关注。目前,具有抗凝活性的新型化合物正不断涌现,一定程度上缓解了早期获批血栓治疗药物临床应用的一些问题CL13900,如出血风险高、起效慢、治疗窗口窄等。本文首先阐述了凝血机制以及血栓形成的原因和机制,然后主要总结了近年来研究报道的抗凝血活性化合物及潜在的抗血栓候选物,并对部分化合物的化学结构-药理活性关系进行了分析,以期促进开发具有抗凝血生物活性的分子,用于治疗血栓性疾病。
局部应用增生平水相提取物对实验性口腔癌预防作用的研究
目的 研究局部应用不同浓度的增生平水相提取物对7,12-dimethylbenz(a)anthracene (DMBA)诱导实验性口腔癌的化学预防作用。方法 DMBA(0.5%)局部secondary infection涂抹于叙利亚金黄地鼠(6～8周龄)颊囊黏膜，每周3次，连续6周，诱导实Protein Tyrosine Kinase抑制剂验性口腔癌的发生。6周后，阳性对照组不再做处理，给药组以低、中、高三种剂量（0.35g/100ml、0.7g/100ml、1.4g/100ml）增生平水相提取物继续局部涂抹于地鼠颊囊，每周3次，24周处死动物，观察并记录肿瘤的数目和大小，完成Erastin说明书组织病理检查，检测细胞增殖指数以及B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白的表达。结果 中剂量组和高剂量组的肉眼肿瘤发生率由88.9%（阳性对照组）分别下降为83.3%和78.9%。病理结果显示高剂量组显著降低了上皮单纯增生病灶数目（P <0.05）；低、中、高剂量组显著降低了轻-中异常增生的病灶数目（P <0.05）。低、中、高剂量组Brdu增殖指数在癌旁正常黏膜和轻-中度异常增生和浸润癌中均有显著性差异（P <0.05)。Bcl-2蛋白表达（western blotting）检测结果显示：中、高剂量组与阳性对照组相比均有显著性差异（P <0.05,P <0.01）。结论 局部应用增生平水相提取物能够通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的方式阻断实验性口腔癌的发生、发展，并且这种化学预防效果呈一定的剂量依赖性。
强脉冲光联合富血小板血浆注射治疗玫瑰痤疮疗效观察
目的：观察强脉冲光（Intense pulsed light,IPL）联合富血小板血浆（Platelet-rich plasma,PRP）注射治疗玫瑰痤疮的临床效果。方法：选取2021年5月-2022年2月笔者医院收治的60例玫瑰痤疮患者，并随机分成IPL组（n=30,IICI 46474体外PL治疗）和联合组（n=30,IPL联合PRP注射治疗）。于治疗前后进行症状量化评定，同时检测角质层含水量、经皮水分损失量（Transepidermalwaterloss,TEWL）、油脂等皮肤屏障功能，评估两组治疗结束后1个月的总有效率，并记录不良反应发生情况。结果：治疗后，两组各症状评分、总分及TEWL均确认细节明显低于治疗前（P<0.05），且联合组均明显低于IPL组（P<0.05）；两组角质层含水量、油脂含量均明显高于治疗前（P<0.05），且联合组均明显高于IPL组（P<0.05）；联合组总有效率为86.67%，明显高于IPL组的63.33%(P<0.05)；联合组不良反应发生率为6.67%，明显低于IPL组的26.67%(P<0.05)。结论：IPL联合PRP注射治疗Malaria infection玫瑰痤疮效果显著，可明显改善患者皮肤屏障功能，有效促进症状消退，且不良反应较少。
LINC01410调控miR-124/stat3轴参与急性髓性白血病免疫逃逸的机制研究
目的：探究LIPF-03084014作用NC01410调控微小RNA-124(miR-124)/信号传导与转录激活因子3(stat3)轴参与急性髓性白血病免疫逃逸的机制。方法：采集21例AML患者骨髓样本、同时期25例非恶性血液病患者骨髓及外周血样本，收集骨髓样本中白细胞及外周血中的自然杀伤细胞（NK）；通过qRT-PCR法检测LINC01410及miR-124表达；Western blot检测stat3蛋白表达；ELISA法检测IFN-γ含量；LDH试剂盒检测NK细胞毒性；双荧光素酶报告基因Biology of aging检测LINC01410、miR-124、stat3的靶向关系。结果：与非恶性血液病患者相比，AML患者骨髓中LINC01410表达显著增加，miR-124表达显著降低（P<0.05）；与对照组相比，IL-2组NK细胞中LINC01410及p-stat3/stat3表达显著降低（P<0.05）,miR-124表达、IFN-γDocetaxel纯度含量、NK细胞毒性显著增加（P<0.05）；与IL-2组相比，sh-LINC01410组LINC01410及p-stat3/stat3表达显著降低（P<0.05）,miR-124表达、IFN-γ含量、NK细胞毒性显著增加（P<0.05）;miR-124表达沉默可逆转LINC01410低表达对AML免疫逃逸的抑制作用；与IL-2组相比，miR-124 mimics组IFN-γ含量及NK细胞毒性显著增加（P<0.05）;stat3过表达可逆转miR-124对AML免疫逃逸的抑制作用。结论：LINC01410沉默通过激活miR-124/stat3轴抑制AML免疫逃逸。
卡泊芬净联合其他抗真菌药物治疗恶性血液病患者中性粒细胞缺乏合并侵袭性真菌感染的有效性和安全性探讨
目的 探讨卡泊芬净联合其他抗真菌药物治疗恶性血液病患者中性粒细胞缺乏合并点击此处侵袭性真菌感染的有效性和安全性。方法 60例恶性血液病中性粒细胞缺乏合并侵袭性真菌感染患者,采用卡泊芬净联合其他抗真菌药物治疗。分析患者的临床资料[基础疾病治疗方式、是否首选、感染部位、可疑感染部位病原菌(曲霉属)]、治疗效果、卡泊芬净不良反应发生情况及临床表现。结果 60例患者中保守治疗10例,化疗及其他治疗50例；首选35例,其他药物治疗后换用25例；肺部感染32例,其他部位感染28例；感染部位病原菌(曲霉属)阳性38例,阴性22例。60例患者治疗显效50例,显效率为83.33%。60例患者中29例发生不良反应,不良反应发生率为48.33%(29/60),其中消化系统不良反应6例,代谢和营养异常7例,泌尿系统不良反应6例,输液反应5例,皮肤不良反应5例。患者不良反应程度比较轻,经有效治疗后,均有好转。结论Osteogenic biomimetic porous scaffolds 采用卡泊芬净联合其他抗真菌药物对恶GSK J4核磁性血液病患者中性粒细胞缺乏合并侵袭性真菌感染进行治疗,有效性和安全性比较高,可推广。
磁性纳米材料与磁场效应加速骨损伤修复
背景：磁性纳米材料具有促进干细胞成骨分化和抑制破骨细胞形成等生物活性，并在磁场协同下有效促进损伤骨组织愈Tofacitinib合，在骨损伤修复中具有广阔的应用前景。目的：综述磁性纳米材料与磁场促进骨修复的作用机制，及其在骨损伤修复领域的研究进展。方法：在PubMed和Web of Science数据库中进行相关文献检索，检索词为“magnetic nanomaterials,magnetic field,bone repair,bone tissue engineering,stem cell,osteoblast,osteoclast”。检索文献时限为2003-2023，将其进行筛选和分析，最终纳入98篇文献进行分析。结果与结论：(1)磁性纳米材料具有促成骨细胞分化、抑制破骨细胞形成和调节免疫微环境等生物效应；此外，磁性纳米材料可调节组织工程支架的机械性能和表面形貌等理化性质，并赋予其磁性，有利于调控干细胞的黏附、增殖与成骨分化。(2)磁场具有调控细胞内多条信号通路发挥促成骨细胞分化、抑制破骨细胞形成和刺激血管生成等生物学效应，从而加速损伤的骨组织愈合。(3)磁性Alisertib纳米材料与磁场的联合应用，通过激活机械转导、增加细胞内磁性纳米粒子含量、增强微磁场效应等加速骨损伤修复，为骨组织工程的研究提供了新的思路。(4)磁场在临床骨折、骨质疏松症和骨关节炎疾病的治疗中展现出确切疗效，促进骨组织生长、减轻骨质流失和缓解疼痛，改善患者的生活质量。(5)磁性纳米材料与磁场在Air medical transport骨损伤修复与再生中应用潜力大，但磁性纳米材料、磁场和细胞之间的相互作用机制尚未完全阐明，而且磁场调控细胞内分子事件的关键参数，包括磁场类型、强度、频率、作用时间和作用方式等，以及特定磁场对骨细胞的精确生物效应和潜在机制仍有待明确。(6)未来需要进一步关注其对损伤组织微环境中的破骨细胞、神经、血管和免疫细胞的影响，而关于磁性材料用于人体安全性问题，有待系统性研究其分布、代谢以及急性和慢性毒性等。