RAF信号通路

目的：观察钬激光碎石联合经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症合并膀胱结石患者的效果。方法：回顾性分析2020年1月至2022年12月该院收治的80例前列腺增生症合并膀胱结石患者的临床资料，按治疗方法不同将其分为对照组和观察组各40例。对照组采用气压弹道碎石联合经尿道前列腺电切术治疗，观察组采用钬激光碎石联合经尿道前列腺电切术治疗，比较两组手术指标（手术时间、膀胱冲洗时间、碎石时间）水平、住院时间、国际前列腺症状评分表（IPSS）评分、血清炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF-α）、前列腺素E2(PGE2)]水平和并发症发生率。结VE-822试剂果：观察组手术时间、膀胱冲洗时间、碎石时间及住院时间均短于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后7 d，两组IPSS评分和血清IL-6、TNF-α、PGE2水平均低于治疗前，且观察组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组并发症genetic disoders发生率为5.00%，明显低于对照组的20.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：钬激光碎石联合经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症合并膀胱结石患者可降低炎性因子水平、IPSS评分和并发症发生SAHA抑制剂率，缩短手术时间、膀胱冲洗时间、碎石时间及住院时间，效果优于气压弹道碎石联合经尿道前列腺电切术治疗。

目的 研究雷公藤红素(CeT)通过调节血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化对血管重塑的作用及机制。方法 将A7r5细胞随机分为对照组(正常培养)、模型组(30 ng·mL~(-1 )PDGF-BB)、CeT低剂量组(30 ng·mL~(-1 )PDGF-BB+1.5μmol·L~(-1))、CeT中剂量组(30 ng·mL~(-1 )PDGF-BB+2.0μmol·L~(-1))和CeT高剂量组(30 ng·mL~(-1 )PDGF-BB+2.5μmol·L~(-1))。用划痕实验检测A7r5细胞迁移情况；用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞表型转化相关蛋白及细胞中信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达情况。通过手术剥夺动脉方式建立小鼠股动脉导丝拉伤模型；将50只C57BL/6小鼠随机分为5组，每组10只，分别为假手术组、手术组、溶媒组(DMSO组)、低剂量CeT组(1 mg·kg~(-1))、高剂量CeT组(2 mg·kg~(-1))。以苏木精-伊红(HE)染色检测CeT对小鼠股动脉血管重塑的影响；以免疫组化染色检测CeT对VSMCs表型转化相关蛋白的影响。结果 与对照组比较，模型组24 h存活率和迁移率增加；与模型组相比，CeT中、高剂量实验组24、48 h存活率和迁移率均明显降低(均P<0.05)。与对照组相比，模型组的平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平均明显降低，骨桥蛋白(OPN)蛋白水平明显升高(均P<0.05);与模型组相比，CeT低、中、高剂量实验组的SM-MHC、α-SMA、平滑肌22α蛋白(SM22α)和p-STAT3/STAT3蛋白表达水平均明显升高，OPN蛋白水平明显降低(均P<0.05)。假手术组、手术组、DMSO组和低、高剂量CeT组股动脉SM-MHC水平分别为(41.55±2.21)%、(16.46±1.74)%、(16.15±1.96)%、(39.33±1.98)%、(38.92±5.97)%;α-SMA水平分别为(40.35±1.24)%、(10.6https://www.selleck.cn/products/sch772984.html0±5.50)%、(16.VP-16细胞培养55±1.45)%、(41.47±4.05)%、(40.65±3.14)%;Smedium-chain dehydrogenaseM22α水平分别为(39.04±1.08)%、(7.19±0.81)%、(7.81±4.02)%、(31.20±4.86)%、(42.28±2.31)%;钙调蛋白(Calponin)蛋白水平分别为(37.21±2.15)%、(9.99±4.97)%、(11.27±3.69)%、(37.04±2.25)%、(36.27±3.21)%;OPN蛋白水平分别为(20.37±1.48)%、(32.78±5.70)%、(34.44±1.88)%、(14.38±6.62)%、(17.58±3.13)%;手术组与假手术组比较，低、高剂量CeT组与DMSO组比较，上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 雷公藤红素通过抑制VSMCs表型转化，减少VSMCs增殖和内膜增生，从而抑制血管重塑的发生发展。

目的 通过生物信息学筛选非小细胞肺癌(NSCLC)血小板RNA关键基因，寻找潜在的癌症生物标志物及新的治疗靶点。方法 检索基因表达综合数据库获得来自NSCLC患者和健康对照的3个转录组数据集(GSE68086、GSE89843、GSE183634),对数据集GSE68086中的RNA进行差异表达分析，然后对差异表达基因(DEGs)进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能富集分析。通过加权基因共表达网络分析划分与疾病相关的基因模块，选择相关性最强的模块基因与差异基因的交集基因，用最小绝LY294002小鼠对值收敛和选择算子(LASSO)和随机森林(RF)2种机器学习算法筛选关键基因，并在数据集GSE89843、GSE183635中进行验证。最后对关键基因进行基因集富集分析。结果 共鉴定出4 917个DEGs(596个上调基因和4 321个下调基因)。通过GO、KEGG富集分析发现：DEGs主要与RNA过程、细胞凋亡、细胞周期及胞质内翻译等相关。LASSO和RF 2种机器学习算法共同识别到5个关键基因。验证得到ITGA2B、PF-6463922说明书IFITM3对NSCLC诊断价值具有显著意义。结论 ITGA2B、IFITM3可能是预测和治疗NSCLC的潜在生物标志物和新的作Xenobiotic metabolism用靶点。

目的 探讨金诺芬对卵巢癌细胞活性的影响及其可能的分子机制。方法 细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定金诺芬处理卵巢癌细胞系SKOV3、Caov3和SW626细胞和永生化的正常人胚肾HEK-293T细胞的剂量反应存活率曲线和半抑制剂量(IC_(50))。流式细胞术测定细胞周期。酶标仪测定细胞内总谷胱甘肽(GSH)、还原型GSH和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的水平、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)和活性氧自由基(ROS)的水平，并计算还原型GSH/GSSG的比值。Western blot测定细胞内细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6、细胞周期蛋白D1(Cyclin E-616452生产商D1)和P53、p-P53、啮齿类双分蛋白2(MDM2)的表达情况。结果 与HEK-293T细胞相比，卵巢癌SKOV3、Caov3和SW626细胞的剂量反应存活率曲线和IC_(50)值显示卵巢癌细胞对金诺芬的敏感性更高(P<0.05)。与未处理组相比，经各自IC_(50)浓度金诺芬处理的SKOV3、Caov3细胞内总GSH、还原型GSH/GSSG的比值和TrxR的活性均降低(t=25.11、31.18,14.72、19.92,43.30、10.74,P<0.05),ROS水平均升高(t=23.82、27.71,P<0.05);G_0/G_1期细胞数量增多，S期和G_2期细胞数量减少(P<0.05);且CDK4、CDK6、Cyclin D1及MDM2的表达水平均下调(t=7.51、15.59,17.32、11.26,20.78、20.78,24.25、17.32,P<0.05),而P53和p-P53的表达水平均上调(t=17.32、24.25,12.12、10.39,P<0.05)。结论 金诺芬通过抑制TrxLipid biomarkersR的活性引起卵巢癌细胞内氧化应激，并通过部分降解MDM2以稳定并激活P53,将癌细胞阻滞于G_0/G_1期，发挥Bafilomycin A1分子式抗卵巢癌活性。

喉部疾病耳鼻咽喉科的常见病,多发病,包括良性病变、癌前病变及癌性病变。其中癌性病变的发展常常呈现出一个动态的过程,即从良性病变到癌前病变、原位癌再到浸润癌的变化。因此在喉癌的诊治中对于喉部的癌前病变及良性病变的正确诊治也至关重要,组织病理学检查是确定其良恶性的金标准。为确定病性,有创的表面组织的活检是再所难免的。在进行喉部黏膜活检等介入之前,如果我们能提高对于良性病变、非组织学异型增生、低级别异型增生、高级别异型增生以及己经发展成为浸润性癌症的病灶预测的准确性及价值性,就可以减少直接介入的损伤、住院手术费用的支出及手术和麻醉相关的风险。声带病灶在发生及发展的过程中,其质地、颜色、厚度与粗糙程度、大小、对称性、声带粘膜波、振幅等的表现各不相同,关于其形态学与病理组织学分型相关性的研究也证实了这些特征性表现的预测价值。频闪喉镜是一种高清的内镜系统,可很好的观察声带表面的病灶的色、质、形态等,同时现有研究证实其可通过黏膜波、振幅、喉记波扫描等的变化判断声带病变的性质,例如黏膜波降低的程度与病变恶性程度呈正相关。但也有研究表明部分轻度到中度异型增生的声带粘膜波完全消失,表明黏膜波降低的程度并不等同于声带黏膜病变的恶性程度及浸润深度,频闪喉镜的敏感性高而特异性较低。窄带成像(narrow band imaging,NBI)是一种新兴的突出显示粘膜表面微血管的光学增强技术,被证实在诊断早期声带癌及癌前病变中具有高灵敏度和特异性,可以指导活检,提高活检真阳性率,避免反复活检。也能很好的早期识别局部复发,并能提高术中切缘阴性率。但是病灶下血管被遮挡时不能观察到血管纹,很容易出现假阴性。鉴于此,我们总结分析了频闪喉镜对声带良性病变诊断准确性,与国内现有报道相近。并对频闪喉镜和NBI联合应用针对早期声门型喉癌及癌前病变的诊断进行进一步研究,以期获得更高的诊断灵敏度及特异度,为早期声门型喉癌的诊断提供新的方案。第一部分频闪喉镜记波扫描对声带息肉手术点击此处疗效的分析目的:探讨频闪喉镜记波扫描在声带息肉患者手术疗效评估的价值。方法:选取2021年2月至2021年11月期间于我院耳鼻咽喉头颈外科的40例声带息肉患者。对患者术前、术后1月及术后2月喉记波扫描的相关参数进行统计分析。结果:手术组术前开放商(OQ)、振幅对称性指数(ASI)、相位对称指数(PSI)较术后有MDV3100试剂差异,差异具有统计学意义(P<0.05,a=0.05);术前与术后1月、术后2月的时间周期性指数(TPI)、振幅周期性指数(API)之间无统计学差异(P>0.05)。声带息肉患者大多为轻到中度的嗓音障碍,术后嗓音情况随着时间的推移逐渐改善。结论:声带息肉术后患者声门闭合情况及声带运动情况较术前改善,喉记波扫描可量化评估声带运动情况,可有效评估声带息肉患者手术疗效。第二部分频闪喉镜联合窄带成像内镜对声门型病变良恶性的预测研究目的:本研究的目的在于探究频闪喉镜联合窄带成像内镜对声门型病变良恶性预测的临床价值。方法:选取2021年3月-2022年8月就诊于我院耳鼻咽喉头颈外科就诊,以声音嘶哑为主诉或检查发现声门病变的患者,电子喉镜检查发现声门病变的患者。予以同时完善NBI内镜及频闪喉镜检查,评估患者病灶性质,有手术指征者收治入院行手术活检。其后根据组织病理学结果作为诊断及金标准,以灵敏度、特异度为、假阴性率、假阳性率、准确度、阳性预测值、阴性预测值为主要评估指标评价两种技术手段分别地准确性及联合应用的优势。结果:共纳入患者60例,其中男性56例,女性4例,年龄41岁-79岁,平均58.8±9.3岁,病程0-24月,中位数6月。其中5Physio-biochemical traits8例以声音嘶哑为主诉,1例以咽异物感为主诉,1例因鼻阻、流涕检查发现。其中29人伴有咽异物感、咽痛等慢性咽炎症状,41人吸烟指数大于400。60例患者中36例为单侧声带病变,24例为双侧声带病变,共84侧声带病变。频闪喉镜检测的灵敏度为85.71%,特异度为80.35%。NBI内镜检测的灵敏度为88.46%,特异度为89.66%。将黏膜波减弱程度和IPCL分型分别与病理恶性程度行Spearman相关分析,相关系数r分别为0.664,0.731,呈显著正相关(P<0.001).频闪喉镜结合NBI内镜检测的灵敏度为91.66%,特异度为93.33%。频闪喉镜、NBI内镜及白光成像联合窄带成像诊断喉癌的ROC曲线下面积分别为0.867(95%CI:0.787~0.946)、0.898(95%CI:0.817~0.978)、0.941(95%CI:0.887~0.994),两者联合使用曲线下面积高于单一方式,差异均有统计学意义(P<0.05)。频闪喉镜联合NBI内镜诊断的效能优于单用一种方式。结论:(1)频闪喉镜对于黏膜波正常或轻度减弱的病灶评估准确度高,不易漏诊,而对于黏膜波明显减弱甚至消失的病灶则亦出现假阳性。(2)窄带成像内镜对于表面无明显覆盖物的病灶性质判断准确,特异度高,当病灶表明出现假膜、角化等物质遮挡阴性黏膜表面血管则诊断效能下降。(3)如无前黏膜波明显降低或消失或声带表面有较厚的遮挡物等表现则可单独行频闪喉镜检查或NBI检查,如同时存在则单一手段效能下降,可予以联合应用以提高效能。两种检查方式联合使用对喉癌及癌前病变的早期诊断有重要价值,可减少不必要的手术活检。

目的:根据自体动静脉内瘘术后患者是否应用了短期的低分子肝素治疗,对比实验组与对照组术后AVF成熟障碍的发生率及AVF血栓形成的发生率有无差异。为今后预防AVF术后常见并发症提供科学理论依据。方法:选取2021年6月1日-2022年12月31日期间在我院血管外科就诊、年龄大于50岁、头静脉直径为2.0mm±0.5mm、桡动脉直径为1.5mm±0.5mm的慢性肾功能不全4～5期且AVF成熟前未进入透析状态的患者60例。病例分为实验组30例和对照组30例。两组患者都给予术前宣教、术前准备、术前行造瘘血管评价检查、记录其头静脉和桡动脉的管径、检测CRP值、术后换药及告知患者术后对AVF的保护等常规处理。手术均采用头静脉-桡动脉端侧吻合术式,AVF吻合口大小为1cm,实验组患者从术后第1天开BMS-354825半抑制浓度始给予每公斤体重100IU的低分子肝素钠皮下注射治疗,每日给药1次,连续给药7天,对照组不给予任何药物注射以及其他处理。术后第1周、第1个月、第3个月进行CRP值的检验,记录患者CRP值。术后第1周、第1个月、第3个月复查彩色多普勒超声,应用彩色多普勒超声测定AVF血流量、血管管径、距皮厚度(术后第1周住院期间检查,第1个月、第3个月嘱患者门诊复查)。如AVF达到透析要求(即瘘管达到血流量>500ml/min,血管管径>5mm,距皮深度<6 mm),记录建立AVF到AVF成熟所用的时间。将所有收集的临床资料进行核对,录入并建立相应数据库,利用统计软件进行分析。结果:1.本次实验共入组60例患者(实验组:30人、对照组:30人)术后实验组出现皮肤瘀斑、术区血肿、血便等不良反应各1例,两组差异无统计学意义。2.术后7天实验组出现1例血栓患者,占比为3.7%,对照组出现5例血栓患者,占比16.7%,对照组血栓发生率高于实验组,但差异无统计学意义。术后7天的血流量比较,对照组为(308.83±33.28)ml/min,实验组为(395.07±48.90)ml/min。术后7天AVF静脉端管径比较,对照组为(2.86±0.53)mm,实验组为(3.49±0.70)mm。术后7天AVF距皮厚度比较,对照组为(3.29±0.55)mm,实验组为(2.95±0.51)mm。术后7天CRP值的比较,对照组为17.33±2.39,实验组为8.24±1.24。实验组均优于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。3.术后1个月实验组和对照组均出现1例血栓患者,占比分别为4.0%和3.8%,AVF成熟率实验组53.8%,对照组32.0%,两组成熟率差异无统计学意义。术后1个月的血流量比较,对照组为(488.12±60.48)ml/min,实验组为(590.27±48.75)ml/min。术后1个月AVF静脉端管径比较,对照组为(4.42±0.92)mm,实验组为(5.13±0.89)mm。此两项指标,实验组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。而术后1S63845纯度个月AVF距皮厚度比较,对照组为(2.92±0.97)mm,实验组为(2.63±0.96)mm。术后1个月CRP值的比较,对照组为6.99±2.50,实验组为5.72±2.55。实验组依然优于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。4.术后3个月两组均无血栓患者,AVF成熟率实验组92.0%,对照组66.7%,实验组优于对照组,但两组差异无统计学意义。术后3个月的血流量比较,对照组为(643.79±73.01)ml/min,实验组为(735.48±72.76)ml/min。术后3个月AVF静脉端管径比较,对照组为(5.31±0.52)mm,实验组为(6.11±0.87)mm。此两项指标,实验组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。而术后3个月AVF距皮厚度比较,对照组为(2.06±0.75)mm,实验组为(2.12±0.85)mm。术后3个月CRP值的比较,对照组为5.57±2.44,实验组为4.80±2.84。实验组优于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本实验通过观察发现在建立AVF后使用低分子肝素预防AVF术后并发症的效果明显。并认为在AVF术后早期的低分子肝素治疗对后期AVF的成熟产生了积极的影响。虽然术后anti-folate antibiotics1个月与术后3个月两组的成熟率差异无统计学意义,但实验组术后的成熟率及各项检测指标都要明显优于对照组。所以,低分子肝素的药理特性对于促进AVF成熟有一定的疗效。可作为促进AVF成熟的用药之一。而造成差异无统计学意义的原因与实验样本量小有较大关系。还需开展更大样本的实验,以提供循证医学证据。

目的 探讨血细胞炎性指数与肌少症的相关性。方法 回顾性分析2018年8月至2022年1月于北京大学人民医院老年科就诊的≥60岁患者351例，根据AWGS2019诊断标准分为非肌少症组284例，肌少症组26例和严重肌少症组41例。根据血常规化验结果计算中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte, NLR)、血小板与淋巴细胞比值(platelet-to-lymphocyte ratio, PLR)、淋巴细MLN8237细胞培养胞与单核细胞比值(lymphocyte-to-monocyte ratio, LMR)、血小板与白细胞比值(platelet-toTalazoparib生产商-white blood cell ratio, PWR)、全身免疫炎性指数(systemic immune-inflammation index, SII)、全身炎性反应指数(systemic inflammation respomedicinal valuense index, SIRI)和综合炎性指数(aggregate inflammation systemic index, AISI)。采用ANOVA分析和回归分析探究炎性指数与肌少症及其诊断要件的关系。包括步速、握力、简易躯体能力测试试验(short physical performance battery, SPPB)评分、四肢骨骼肌质量指数(appendicular skeletal muscle mass index, ASMI)、去脂体质量指数(fat free mass index, FFMI)和脂肪指数(fat mass index, FMI)。结果 与非肌少症组相比，肌少症和严重肌少症组年龄更大，HDL-C显著更高，TG、LDL-C显著更低(P<0.05)。与非肌少症和肌少症组相比，严重肌少症组的PLR、NLR、SII、SIRI和AISI显著更高，LMR显著更低，PWR在三组间无显著差异。多因素分析结果显示：NLR、SII和AISI与严重肌少症发生风险增加显著相关，NLR、SII和AISI值每增加1,严重肌少症的发生风险分别增加2.851倍(1.024～7.941)、1.531倍(1.531～9.156)、2.644倍(1.240～5.639)。且SII (P=0.039)和AISI (P=0.039)与SPPB得分下降显著相关。结论 血细胞炎性指数客观、廉价、简单，NLR、SII和AISI的升高与老年人严重肌少症发生风险增加有关，SII和AISI的升高与SPPB得分下降相关，可能作为肌少症筛查和管理的标志物。

以野生型和植物胞外ATP受体缺失突变体(doSCH727965生产商rn1-3)拟南芥植株为材料,探讨胞外ATP对壳聚糖引起的植株叶片活性氧(ROS)水平、气孔开度以及光系统Ⅱ变化的影响.结果表明, 100μg/mL壳聚糖处理下两种类型拟南芥叶片内ROS均显著升高,野生型植株ROS水平升高幅度高于dorn1-3突变型. 25～100μg/mL壳聚糖处理会引起野生型拟南芥叶片气孔关闭,且存在浓度梯度效应,但在相应浓度的壳聚糖处理下,不会引起dorn1-3突变型拟南芥叶片中气孔关闭; 200μg/mL壳聚糖处理下突变型拟南芥叶片气孔开度降低.与对照组相比,在较低浓度壳聚糖处理下叶片的实际光合效率(Y(Ⅱ))、经过光系统Ⅱ的相对电子传递效率(ETR)和光化学淬灭系数(q P)值都升高,且突变型植株升高的幅度大于野生型;在高浓度壳聚糖处理下,拟南Cell Cycle抑制剂芥叶片Y(Ⅱ)、ETR和q P趋于下降.表明细胞外ATP可能参与调控壳聚糖诱导的ROS、气孔开度以及叶绿素荧光参数biological feedback control的变化.

背景:在我国,原发性肝癌(Primary liver cancer,PLC)是死亡率排名第二位的恶性肿瘤且其发病率和病死率呈逐年上升的趋势,严重威胁我国人民的生命健康。作为原发性肝癌的主要病理学类型,肝细胞癌(Hepatocellular carGSKJ4价格cinoma,HCC)约占发病总数的75%～8intracameral antibiotics5%。狼毒大戟作为一味传统中药,在中国被广泛用作肺结核、肿瘤等疾病的治疗。既往研究显示,狼毒大戟在肝癌、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤中具有一定的治疗效果。然而,狼毒大戟治疗HCC的相关作用机制尚有待阐明。目的:本研究旨在明确狼毒大戟水提物在HCC中的抗肿瘤活性并探讨其改善索拉非尼耐药的潜在靶点和分子机制。方法:采用液相色谱selleck NMR-质谱联用获得狼毒大戟水提物的全部化合物成分。通过TCMSP、Swiss ADME、Swiss Target Prediction数据库以及液相色谱-质谱联用结果筛选获得狼毒大戟水提物的主要化合物以及主要作用靶点;使用GEO、DisGeNET和GeneCards数据库获得HCC的致病基因;采用在线分析平台、STRING数据库、R语言构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图并通过Cytoscape软件进行可视化分析;使用DAVID数据库对筛选出的共同靶点进行GO和KEGG富集分析。使用AutoDockTools软件进行主要化合物与核心靶点的分子对接。通过CCK-8实验,平板克隆形成实验以及EdU实验评估狼毒大戟水提物对肝癌细胞株以及索拉非尼耐药肝癌细胞株增殖的影响。通过Annexin V/7-AAD实验以及Tunel染色实验评价狼毒大戟水提物对肝癌细胞株以及索拉非尼耐药肝癌细胞株凋亡的影响。通过Transwell实验和划痕实验检测狼毒大戟水提物对肝癌细胞株以及索拉非尼耐药肝癌细胞株侵袭、迁移的影响。通过PI染色法评估狼毒大戟水提物对肝癌细胞株以及索拉非尼耐药肝癌细胞株周期进程的影响。通过Western Blot分析狼毒大戟水提物对肝癌细胞株以及索拉非尼耐药肝癌细胞株信号通路的影响。通过建立裸鼠皮下移植瘤肝癌模型,验证狼毒大戟水提物的体内疗效。结果:通过液相色谱-质谱联用结果结合ADME筛选条件共鉴定出狼毒大戟水提物中主要化合物37种。基于公共数据库筛选获得37种化合物相对应的678个作用靶点及921个HCC致病基因。基于在线分析网站获得狼毒大戟水提物-HCC共同靶点132个以及通过网络拓扑模型和算法得到132个共同靶点中的14个核心靶点。通过对132个狼毒大戟水提物-HCC共同靶点进行GO和KEGG富集分析,推测狼毒大戟水提物通过调控多条信号通路,特别是PI3K/AKT通路对HCC发挥抗癌效果。分子对接结果显示,狼毒大戟水提物中主要化合物与核心靶点AKT1具有较强的结合亲和力。体外实验结果表明,狼毒大戟水提物能够显著抑制肝癌细胞株的增殖,改变肝癌细胞株周期进程,诱导肝癌细胞株凋亡,并抑制肝癌细胞株的迁移和侵袭。此外,体外实验还发现,狼毒大戟水提物能够通过改变索拉非尼耐药肝癌细胞株的上述表型,从而提高索拉非尼耐药细胞株对索拉非尼的敏感性。Western Blot分析表明狼毒大戟水提物呈剂量依赖性抑制野生型和索拉非尼耐药型肝癌细胞株的p-PI3K(p85a-Y607)和p-AKT的磷酸化水平。体内实验显示,狼毒大戟水提物单独或联合索拉非尼能够显著抑制荷瘤裸鼠的肿瘤生长并提高索拉非尼的疗效。结论:狼毒大戟水提物通过调控多靶点、多通路,特别是调控PI3K/AKT信号通路发挥抗癌作用,提示狼毒大戟是治疗HCC的一种有前途的药物。

尿酸酶(Uricase,EC 1.7.3.3)能使尿酸分解成5-羟基异尿酸,并最终分解成尿囊酸,不再Liproxstatin-1配制被肾小管吸收而排泄。人类因进化导致尿酸酶基因错义突变,无法产生活性尿酸酶,当人体内尿酸浓度过高时就会得高尿酸血症。目前,中国高尿酸血症的总体患病率为13.3%,尿酸酶蛋白类药物有着非常大的市场需求。首先黄曲霉源尿酸酶(Rasburicase)被用来治疗高尿酸血症及痛风等疾病,但其与人类尿酸酶同源性低,极易产生抗体。后来利用大肠杆菌重组猪源尿酸酶被开发出来,但仍存在免疫原性高等缺陷LY-188011体内。本课题组通过对多种哺乳动物尿酸酶的多重序列比对,与人类尿酸酶同源性高的犬源尿酸酶被开发出来,并以此为基础构建与人类同源性更高的犬源尿酸酶突变体。经过多种结构筛选,挑选出活性和稳定性更好的尿酸酶产品。以6种以上哺乳动物尿酸酶氨基酸序列为基础,保留其高度保守区域,设计了集成哺乳动物尿酸酶JC。并在非保守可变区通过共有性分析设计一个或多个备选氨基酸构成。设计了DC291、DC291-V和JC291这三个突变体。通过酶学性质分析,JC291的比活性最高,比野生型犬源尿酸酶至少高30%,已筛选出一个高活性的尿酸酶突变体蛋白。以JC291为基础,通过氨基酸位点的定点突变,筛选出更高稳定性的尿酸酶蛋白。经过多重序列比对和可行性分析,将JC291氨基酸序列中的第146位、148位、245位和249位进行突变,分别命名为L146M、S148N、L245H和R249Q。R249Q的酶活性最高,比JC291还要高3%以上。L146M、S148Defensive medicineN和L245H的活性与JC291相差不大,但其稳定性各有不同。经同源建模和疏水作用分析,得出影响尿酸酶活性的因素与尿酸酶的活性区域有关。突变位点对活性区域有影响的就会使酶活性升高或降低。而影响尿酸酶稳定性的因素有很多。从L146M和S148N的分析结果来看,尿酸酶四聚体的内外部疏水作用都会对蛋白结构产生影响。而R249Q更是说明了外部的α-螺旋结构对尿酸酶结构有着保护作用。本论文成功构建了多种尿酸酶突变体,对于尿酸酶的基因构建、发酵表达和结构性质研究等方面都积累了丰富的实验经验,研究了活性与稳定性之间的关系以及结构对活性和稳定性的影响,为以后的研究提供了有力的支持。