RAF信号通路

目的铁是人脑中最丰富的过渡金属。在健康成人大脑中铁的分布是不均匀的,在基底神经节中铁含量最高,而在灰质、白质、中脑和小脑中铁含量较低。随着年龄的增长,铁会沉积在大脑区域,如黑质(substantia nigra,SN)和苍白球。在各种神经退行性疾病中,如阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)和帕金森病(Parkinson’s Disease,PD),铁在特定大脑区域沉积,并且铁稳态失调。溶酶体作为铁代谢的主要调节器,在细胞铁转运和稳态中起着关键作用。有研究报道小鼠腹腔给铁后,肝脏和脾脏中铁水平升高。但腹腔给铁后,外周组织(如肝脏和脾脏)铁过载对溶酶体功能的影响,以及外周铁能否进入大脑区域影响溶酶体功能和运动功能需要进一步探讨。方法本实验建立腹腔注射葡聚糖铁(iron dextran,FeDx)小鼠模型,C57BL/6小鼠腹腔注射FeDx(200 mg/kg),对照组给予等量生理盐水,隔天一次,给药时长分别为1周、2周、3周或4周。应用免疫印迹法检测肝脏、脾脏、海马(hippocampal,HC)、纹状体(striatum,STR)、黑质和嗅球(olfactory bulb,OB)的L型铁蛋白(ferritin enriched in L subunits,L-ferritin)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(Cyl-Co A synthetase long-chain family member 4,ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4),同时检测了溶酶体相关蛋白的表达,如组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)、组织蛋白酶D(cathepsin D,CTSD)、葡萄糖脑苷脂酶(glucocerebrosidase,GCase)、溶酶体整合膜蛋白2(lysosome integrated membrane protein 2,LIMP-2)和溶酶体相关膜蛋白1(lysosomal-associated membrCeralasertib使用方法ane proteins 1,LAMP-1)。应用铁含量测定试剂盒检测血清和脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)铁含量。应用免疫荧光染色和免疫组化染色检测多巴胺能神经元数量和纤维密度。应用步态分析评估小鼠的运动功能。结果1.腹腔注射FeDx 1周、2周、3周或4周后,与其对照组相比,肝脏和脾脏中L-ferritin水平显著升高,差异有统计学意义。肝脏和脾脏中ACSL4和GPX4蛋白水平在1-4周无显著差异。肝脏中CTSB、CTSD、GCase和LIMP-2蛋白水平在1-4周升高,差异有统计学意义。脾脏中CTSD、GCase和LIMP-2蛋白水平在1-4周升高,肝脏中CTSB蛋白水平在2-4周升高,差异有统计学意义。腹腔注射FeDx 1周后,肝脏中LAMP-1蛋白水平无明显变化,在2-4周时蛋白表达降低。结果提示,腹腔注射FeDx诱导小鼠肝脏和脾脏铁过载以及溶酶体功能障碍。2.腹腔注射FeDx 1周后引起血清铁浓度轻微升高,2-4周血清铁浓度随着给药周期而升高,差异有统计学意义。脑脊液中的铁浓度在1-4周时保持在定量限(limit of quantitation,LOQ)附近。结果提示,腹腔注射FeDx可导致血清铁浓度随时间依赖性升高,但脑脊液铁浓度没有明显升高。3.腹腔注射FeDx 1-2周,OB中L-ferritin蛋白水平升高,表明OB存在早期铁沉积,而HC和STR未观察到变化。腹腔注射FeDx 3-4周后,OB中L-ferritin蛋白水平下降至正常水平,HC和STR中L-ferritin蛋白水平升高。腹腔注射FeDx 3周或4周后,SN和STR的铁染色阳性细胞增加。结果提示,腹腔注射FeDx诱导OB、SN、HC和STR铁沉积。4.腹腔注射FeDx 1-4周,SN、HC和STR中CTSB和CTSD蛋白水平不变。腹腔注射FeDx 1-3周,OB中CTSB和CTSD蛋白水平保持不变,4周后OB中CTSB和CTSD蛋白水平下调,4周root canal disinfection后HC中LAMP-1蛋白水平降低。SN、HC、STR和OB中GCase和LIMP-2蛋白水平在1-4周无明显变化。结果提示,腹腔注射FeDx未引起OB、SN、HC和STR中明显的溶酶体功能障碍。5.经鼻给枸橼酸铁胺(Ferric ammonium citrate,FAC)两次后,OB中L-ferritin、CTSB、GCase和LIMP-2蛋白水平升高,CTSD和LAMP-1蛋白水平无显著差异。原代培养的腹侧中脑神经元/星形胶质细胞,经100μM FAC处理后,CTSB、CTSD、GCase、LIMP-2和LAMP-1蛋白水平无明显差异。原代培养的腹侧中脑神经元,经1 m M FAC处理后LIMP-2蛋白水平升高,而CTSB、CTSD、GCase和LAMP-1蛋白水平无显著差异。原代培养的腹侧中脑星形胶质细胞,经1 m M FAC处理后LIMP-2和LAMP-1蛋白水平升高,GCase蛋白水平无显著差异,CTSB蛋白水平升高。结果提示,FAC诱导OB和原代培养的腹侧中脑星形胶质细胞中CTSB表达上调,溶酶体功能受损。6.腹腔注射FeDx 4周后,STR中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)纤维密度和蛋白水平降低,而SN中TH阳性神经元的数目无明显差异。然而,虽然铁沉积首先出现在OB脑组织中,但OB中TH蛋白水平在1-4周无显著差异。结果提示,腹腔注射FeDx后引起黑质纹状体系统轻度损伤。7.腹腔注射FeDx后,小鼠静态步态指标发生了变化,最大接触面积、最大接触平均强度、步长、步宽和脚印面积等指标在不同的脚爪上出现了下降。然而,并未观察到任何显著的动态步态指标变化。结果提示,腹腔注射FeDx后不会引起明显的运动障碍。结论小鼠腹腔注射FeDx诱导肝脏和脾脏铁过载,OB、SN、HC和STR铁沉积。血清铁浓度随时间依赖性升高,但脑脊液铁浓度无明显升高。CTSB、CTSD、GCase和LIMP-2蛋白在肝脏和脾脏中显著上调,但在脑区无显著差异。急性铁过载OB和原代培养的腹侧中脑星形胶质细胞中CTSB表达上调。腹腔注射FeDxLY2157299抑制剂小鼠SN中多巴胺能神经元的数量保持不变,未引起明显的运动障碍。结果提示,腹腔注射FeDx诱导肝脏和脾脏铁过载以及溶酶体功能障碍,脑区(OB、SN、HC和STR)铁沉积,但不足以引起明显的溶酶体功能障碍和运动障碍。

目的 观察经胸超声心动图诊断机械瓣膜功能障碍的价值。方法 回顾性分析60例接受二次手术治疗的机械瓣膜功能障碍患者，观察本次术前经胸超声心动图、手术、术后病理及随访资料，分析超声的诊断及评估效能。结果 超声心动图检查共于60例患者中检出67枚机械瓣膜功能障碍，包括二尖瓣23枚、主动脉瓣43枚及三尖瓣1枚；主要表现为瓣周漏、瓣膜狭窄及关闭不全、血栓、瓣环脱位、感染性心内膜炎(IE)及窦部夹层等。手术及病理结果显示，60例67枚机械瓣膜功能障碍分布与超声检查所见一致，表现为AY-22989瓣周漏16枚、瓣周纤维组织增生50枚、血栓19枚、瓣环脱位5枚、IE 12枚、退行性变6SCH772984说明书枚。随访期间59例未见明显人工瓣膜bioactive components功能障碍；1例于二次术后第9年出现瓣周漏，经手术封堵后情况良好。结论 经胸超声心动图对于诊断机械瓣膜功能障碍具有一定价值，有助于判断是否需要进行再次手术治疗。

为研究白三叶类黄酮合成途径的关键基因TrCHI在白三叶(Trifolium repens)花色形成中的作用，以白三叶野生型和红花突变体为材料，通过同源克隆得到TrCHI基因并进行转录分析和CHI酶活性测定。结果表明，白三叶购买ZD1839野生型TrCHI基因开放阅读框长660 bp，编码219个氨基酸，其红花突变体TrCHI开放阅读框长度为669 bp，编码222个氨基酸。7处氨基酸突变包括：第13号位的谷氨酸突变成天冬氨酸，第75号位的谷氨酸突变成谷氨酰胺，第154号位的丝氨酸突变成苏氨酸，第218号位的赖氨酸突变成精氨酸，并在末尾增加了甘氨酸、蛋氨酸和赖氨酸。进化分析发现，CHI基因进化具有物种保守性，Tr CHI属于Ⅱ型CHI。花瓣、根和叶柄中，红花突变体TrCHI转录水平显著高于野生型；但在茎、叶和花梗中，红花突变体TrCHI基因转录水平低于野生型。突变体花瓣中CHI酶活性极显著高于野生型(P <0.001)。推测白三叶突变体的红花表Insect immunity型与TrCHI基因突LXH254变并对白三叶中的类黄酮化合物的合成调控有关。本研究为进一步研究TrCHI在白三叶上的潜在功能提供了一定的价值。

目的:本研究旨在评估COSSH-ACLF Ⅱ s对慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者预后的预测性能及其临床效用,并探究该模型用于指导非生物型人工肝治疗HBV-ACLF时机选择的可行性。方法:本研究对2018年1月至2022年10月期间就诊于南方医科大学珠江医院及中山大学第三附属医院的206例HBV-ACLF患者的临床资料进行回顾性分析,其中暴露组(人工肝治疗)116人,非暴露组(内科综合治疗)90人;将新预后模型COSSH-ACLF Ⅱ s在预测结局指标方面的表现与其它五种通用预后模型(COSSH-ACLF s、Child-Turcotte-Pugh、MELD、MELD-Na、CLIF-CACLF s)进行比较,通过区别度、校准度以及临床效用等三个维度对预后模型性能进行综合评估。采用一致性统计量(Concordance statistics,C-statistics)评价新模型的区分度;采用概率密度函数表示存活患者与死亡患者基于预后评分的概率分布情况,通过比较存活患者与死亡患者两个概率密度曲线间的重叠系数,来衡量生存与死亡事件概率分布的相似性,进一步对模型判别区分性能进行验证。利用Hosmer-Lemeshow拟合优度检验对预测模型的校准度进行评估,并通过事件风险十分位条形图与校准曲线将拟合优度检验的结果可视化。采用临床决策曲线分析法(Decision Curve Analysis,DCA)评估预后模型的临床效用;DCA曲线描述了随着阈概率变化,按照模型预测值进行干预的情况下净获益的变化,通过比较不同模型的DCA曲线,进而评价不同模型的临床效用。通过COSSH-ACLF Ⅱ s评分模型的危险分层标准,分别将暴露组与非暴露组病人分为三个亚组:①<7.4;②7.4-8.4;③≥8.4。采用Kaplan-Meier法评估各亚组间患者的28/90天死亡率增长速度并绘制生存曲线;采用对数秩检验(log-rank test),用于比较各亚组间生存曲线;采用COX比例风险模型评估人工肝治疗对各亚组患者预后的影响。结果:1.COSSH-ACLF Ⅱs模型28天死亡率预测的C-statistiAG-221cs(0.926)高于Streptococcal infectionCOSSH-ACLF s 的 C-statistics(0.914,p=0.4280),差异不具有统计学差异,但显著高于 CLIF-CACLF s(0.868,p=0.0005)、MELD-Na(0.822,p=0.0018)、MELD(0.851,p=0.0091)、CTP(0.821,p=0.0010),且差异具有统计学差异;COSSH-ACLF Ⅱs模型90天死亡率预测的C-statistics(0.946)显著高于COSSH-ACLF s(0.920,p=0.0487)、CLIF-CACLF s(0.896,p=0.0002)、MELD-Na(0.845,p=0.0004)、MELD(0.873,p=0.0031)、CTP(0.828,p<0.0001),且差异具有统计学意义。2.预后不良患者的比例随着COSSH-ACLF Ⅱs、COSSH-ACLF s、CLIF-C ACLF s、MELD-Na、MELD、CTP等预后模型评分的增加而逐渐升高,且存活患者与死亡患者概率分布曲线的峰值均有明显差异;新预后模型COSSH-ACLFⅡ s 28/90天存活患者与死亡患者概率分布曲线的重叠系数较其它模型有显著下降(COSSH-ACLF Ⅱ s:30.0%/28.3%;COSSH-ACLF s:31.9%/32.5%;CLIF-C ACLF s:46.3%/41.0%;MELD-Na:46.9%/42.5%;MELD:44.5%/41.3%;CTP:51.7%/50.1%,p 值均<0.05),基于新模型 COSSH-ACLF Ⅱs 定义的存活和死亡患者概率分布曲线的相似性显著低于其它五种评分,COSSH-ACLFⅡs具有更好的预后预测性能。3.COSSH-ACLF Ⅱ s模型90天死亡率的预测值与实际观察值整体相似(-2 Log likelihood=118.379;Hosmer-Lemeshow χ2=8.008,p=0.433),模型拟合度最好,短期预后的预测能力显著优于COSSH-ACLF s(-2 Log likelihood=144.926;Hosmer-Lemeshow χ2=13.271,p=0.103)、CLIF-C ACLF s(-2 Log likelihood=158.150;Hosmer-Lemeshow χ2=1 1.084,p=0.197)、MELD-Na(-2 Log likelihood=195.998;Hosmer-Lemeshow χ2=14.202,p=0.077)、MELD(-2 Log likelihood=181.682;Hosmer-Lemeshow χ2=16.126,p=0.041)。4.临床决策曲线分析结果显示,在相当大的阈概率范围内,采用COSSH-ACLF Ⅱ s模型指导临床决策可取得最高的净获益率,临床应用价值优于COSSH-ACLF s、MELD、MELD-Na、CLIF-C ACLF s 以及 CTP 等模型。5.生存分析结果显示,在分别接受人工肝治疗与内科治疗后,暴露组与非暴露组的第28/90天生存曲线均有差异,且差异有统计学意义,暴露组平均存活时间较非暴露组显著延长(Log-rank χ2=10.425/5.446,p=0.0012/p=0.020);单因素COX比例风险模型分析显示,人工肝治疗是患者的预后相关因素(HR:0.582;95%CI:0.366-0.926;p=0.022),进一步的多因素 COX 回归分析显示,在调整了年龄、性别、HE等级、病情轻重程度以及总胆红素等指标后,人工肝治疗仍是主要的预后相关因素(HR:0.393;95%CI:0.226-0.684;p=0.001)。6.基于COSSH-ACLF Ⅱs模型危险分层标准,将两组病人分为低风险(COSSH-ACLF Ⅱ s<7.4)、中风险(7.4≤COSSH-ACLFⅡs<8.4)、高风险(COSSH-ACLF Ⅱ s≥8.4)。在低风险区间(<7.4),暴露组与非暴露组的28/90天病死率无显著差异(5.1%/6.8%vs 2.1%/2.1%,Pearson Chi-Square 检验χ2=0.630/1.260,p=0.427/0.262);同时,在低风险区间,两组间的生存曲线也无显著差异(Log-rank 检验 χ2=0.598/1.205,p=0.439/0.272),多因素 COX 比例风险模型分析显示,在低风险区间,人工肝治疗不是患者的预后相关因素(HR:0.606;95%CI:0.238-1.358;p=0.723)。在中风险区间(7.4-8.4),暴露组28/90天死亡率较非暴露组均有所下降,差异均有统计学意义(16.2%/32.4%vs 79.2%/79.2%,Pearson Chi-Square 检验 χ2=23.851/12.721,p 均<0.001);同时,在中风险区间,两组间的生存曲线也有显著差异,暴露组平均存活时间较非暴露组有显著延长(Log-rank检验χ2=27.303/20.135,p均<0.001);多因素COX比例风险模型分析显示,在中风险区间,人工肝治疗是影响患者预后的独立因素,接受人工肝治疗的患者死亡风险仅为接受内科治疗患者的0.211倍(HR:0.211;95%CI:0.099-0.448;3-Methyladenine作用p<0.001)。在高风险区间(≥8.4),暴露组与非暴露组的28/90 天死亡率无显著差异(75.0%/90.0%vs 84.2%/94.7%,Pearson Chi-Square检验χ2=0.507/0.308,p=0.476/0.579);在高风险区间,两组间的生存曲线也无显著差异(Log-rank 检验 χ2=1.274/1.652,p=0.259/0.199),进一步的COX比例风险模型分析显示,在高风险区间,人工肝治疗并非是患者的预后相关因素(HR:0.437;95%CI:0.177-1.079;p=0.073)。结论:1.COSSH-ACLF Ⅱs模型的整体预测性能及临床应用价值均显著优于COSSH-ACLF s、MELD、MELD-Na、CLIF-CACLF s、Child-Turcotte-Pugh评分等预后模型;2.COSSH-ACLF Ⅱs模型能有效指导人工肝治疗HBV-ACLF时机的选择。

近年来,随着人们生活水平的逐步提高,糖尿病患病率也逐年攀升,其已成为人类最常见的慢性非传染性疾病之一。尽管盐酸二甲双胍等药物能够有效地降低部分II型糖尿病(T2DM)患者血糖水平,但长期服用后,可能会引起肝损伤以及胃肠道不良反应,因此,在安全有效的天然活性物质基础上开发副作用低,且对T2DM高血糖症状具有多个作用途径的植物降糖剂成为本领域的研究热点。本研究从白背三七植物中提取出一种粗多糖,对其进行分离纯化、化学组成分析及结构表征,揭示其初级结构;通过体外实验研究白背三七多糖化学抗氧化活性以及利用细胞模型探究其体外降血糖活性,并通过动物实验进一步研究白背三七多糖的体内降血糖活性;通过分析肠道菌群微生态变化等进行系统的关联性研究,揭示其血糖调节作用的机制,为白背三七多糖相关的功能性食品和药物的开发提供理论依据。主要研究结果归纳如下:1、研究表明传统的热水提取法提取的白背三七多糖(GDP)得率仅为6.85%,因此采用超声辅助提取法对GDP进行提取。通过单因素试验、Box-Behnken试验以及响应面优化等数理统计方法,确定了白背三七多糖提取优化工艺为:超声功率270 W、提取温度60℃、提取时间37 min。在此条件下,GDP提取率为9.18%,比热水提取法的提取率(6.85%)提高了34.01%。使用纤维素DE-52和葡聚糖G-100层析柱对GDP进行分离纯化,得到中性多糖组分GDP0和酸性多糖组分GDP3、GDP5,得率分别为18.8%、41.1%和6.9%。2、化学组成分析显示GDP和GDP3总糖含量较高,均在SB20358060%以上,各组分几乎不含有蛋白质和多酚,各组分中GDP的糖醛酸含量和硫酸根含量最高,纯化组分中,GDP3含有更高的糖醛酸,GDP5含有更高的硫酸根。GDP、GDP0、GDP3和GDP5的主要分子量(Mw)分别为1634.7 k Da、1.7 k Da、651.2 k Da和1521.6 k Da。单糖组成及NMR分析显示,GDP0主要的链接方式可能是→3)-β-Glcp-(1→,→4,6)-α-Glcp-(1→,α-Galp-(1→,→2,4)-α-Rhap-(1→,→2,3)-α-Fucp-(1→;GDP3的主要链接方式可能是6)-β-Galp-(1→。各组分的紫外吸收光谱显示,在260 nm、280 nm及>400 nm处几乎没有明显的吸收峰,说明GDP、GDP0、GDP3和GDP5的蛋白质、核酸和色素含量低。红外光谱分析显示GDP各组分含有α和β型糖苷键。X射线衍射分析结果显示白背三七多糖各组分倾向于半晶体状态。刚果红实验结果表明GDP、GDP3和GDP5具有三螺旋结构。DSC和TGA分析表明白背三七多糖各组分均具有较好的热稳定性。流变学实验显示,GDP及各组分有较好的流变特性。GDP还具有优异的乳化特性,能够在添加量为2%时稳定油相比为70%的乳液,且乳液稳定性良好。3、体外化学抗氧化实验表明,各组分具有良好的清除DPPH、羟基自由基和ABTS的能力及还原力,总体表现GDP活性最好,清除DPPH、羟基自由基和ABTS的IC_(50)值分别是0.107 mg/m L、0.252 mg/m L和0.589 mg/m L,明显优于其他组分(P<0.05)。GDP及各纯化组分对H_2O_2诱导的氧化应激巨噬细胞RAW 264.7有较好的保护作用,能够显著降低氧化应激细胞中ROS水平、提高SOD酶和CAT酶活力、降低MDA含量。在100μg/m L的实验浓度下,细胞抗氧化能力均表现为GDP>GDP3>GDP5>GDP0。抗氧化作用机制研究表明,GDP和GDP3能够显著提高SOD1、CAT m RNA的表达水平,还能通过上调细胞中Nrf-2和HO-1的m RNA表达影响Nrf-2信号通路。因此,通过上调抗氧化酶及Nrf-2信号通路中相关基因的表达可能是GDP重要的抗氧化作用机制。4、体外降血糖活性测试结果显示GDP、GDP3和GDP5均能有效抑制α-葡萄糖苷酶,且抑制动力学和荧光实验显示三个组分对酶的抑制均为混合型抑制,能够通过改变酶的三级结构达到抑制酶活的效果。细胞实验证明GDP、GDP3和GDP5可以提高胰岛素抵抗(IR)-Hep G2细胞的葡萄糖吸收能力,提升细胞内肝糖原含量以及丙酮酸激酶(PK)与己糖激酶(HK)的活性。通过检测多糖对IR-Hep G2细胞血糖调节相关基因的表达,发现GDP各组分能够通过上调PI3K、GLUT4和AMPK,下调G6pase和PEPCK m RNA的表达,降低细胞胰岛素抵抗,改善细胞葡萄糖利用度。5、动物实验表明,连续灌胃4周的800 mg kg~(-1) BW的剂量(高剂量)的白背三七多糖GDP,能够明显改善链脲佐菌素(STZ)诱导的T2DM小鼠的高血糖症状。具体表现为:高剂量GDP能够显著提升T2DM小鼠的体重,显著降低空腹血糖、口服葡萄糖耐量和糖化血清蛋白含量。有效恢复血清胰岛素水平,改善胰腺组织病变,恢复胰岛细胞数量和形态,显著提升血清中溶血素水平,有效降低血清和肝脏中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白(LDL-C)水平,恢复高密度脂蛋白(HDL-C)水平,有效降低血清中IL-6和TNF-α细胞因子含量,提高肝脏中糖原含量、SOD酶、谷胱甘肽过氧化物酶和CAT酶的活力,明显降低肝脏中MDA含量以及脏器指数。显著上调T2DM小鼠肝脏中GLUT4、Ins R、IRS2和GS的基因相对表达量,下调G6Pase、PEPCK以及GSK-3β的基因相对表达水平。推测GDP是通过影响PI3K/Akt通路中相关基因表达,来降低小鼠胰岛素抵抗,实现对小鼠血糖的调节和稳定。6、小鼠肠道菌群结构分析结果显示,在门水平上,相比于正常组,模型组高血糖小鼠Safe biomedical applications肠道中厚壁菌门显著增加,而拟杆菌门显著下降。经GDP介入后,糖尿病小鼠的肠道微生物中厚壁菌门(Firmicutes)与拟杆菌门(Bacteroidetes)的相对丰度比值F:B明显下降。在属层面上,经过不同剂量GDP干预后,norank＿f＿＿Muribaculaceae、Alistipes、Prevotellaceae＿UCG-001和Bifidobacterium等显著升高,unclassified＿f＿＿Lachnospiraceae等丰度显著降低,GDP的治疗组中Muribaculum、Bifidobacteriaceae、Deferribacteres是显著差异物种,可能在调节菌群恢复和维持肠道微生态环境中发挥重要的作用。关联短链脂肪酸(SCFAs)环境因子分析发现,Turicibacter、Prevotellaceae＿UCG-001、Bifidobacterium等与肠道乙酸、丁酸和戊酸等短链脂肪酸成呈正相关。关联糖化血清蛋白和胰岛素环境因子分析发现,Monoglobus、g＿＿uGSK J4分子式nclassified＿f＿＿Oscillospiraceae等呈现正相关,Lactobacillus、Bacteroides、Prevotellaceae＿UCG-001等呈现负相关。关联血清相关生化指标环境因子分析发现,Bacteroides、Helicobacter与HDL-C呈现正相关,与TG、TC、LDL-C呈现负相关;Monoglobus、g＿＿unclassified＿f＿＿Oscillospiraceae与TG、TC、LDL-C呈现正相关,HDL-C呈现负相关。关联血清内炎症因子环境因子分析发现,Weissella、Monoglobus、Odoribacter等呈现正相关,Dubosiella、Bacteroides等呈现负相关。预测功能关联分析发现,GDP有显著提升细胞运动、信号转导机制、转录和碳水化合物运输和代谢,以上功能与机体血糖调节密切相关,揭示了白背三七多糖通过调控肠道菌群对T2DM小鼠血糖调节的可能作用机制。

蓝莓Vaccinium spp.的生长代谢极大程度受到金属离子平衡的影响，ZIP转运蛋白家族在调节植物体金属稳态中起着关键性作用，但目前有关蓝莓ZIP转运蛋白的相关研究较少。为探究蓝莓ZIP转运蛋白基因对铁(Fe)、锌(Zn)、镉(Cd)等金属离子的吸收转运机制，以北高丛蓝莓布里吉塔为研究材料，对蓝莓ZIP基因家族成员进行克隆，采用生物信息学方法分析得到候选基因的核苷酸序列、氨基酸序列、跨膜结构域，对比其他植物的ZIP家族基因，构建系统进化树并筛选得到高相似性的重点研究对象；通过添加金属水培蓝莓的VcZIPs基因表达量分析，探究蓝莓中ZIP转运子的生物学功能；通过转基因酵母金属耐性分析试验，验证VcZIPs异源表达时的功能。结果表明：克隆得到8个VcZIPs全长cDNA序列，其folding intermediate中筛选出3个转运子VcZIP4、VcZIP7、VcZIP9具有ZIP家族的典型二级结构，或为潜在的ZIP家族成员。q-RT-PCR结果表明，蓝莓叶部ZIP转运子的基因转录水平普遍受到过量金属离子的抑制；蓝莓根部的VcZIPs基因表达普遍受根际过量金属离子诱导，VcZIP4基因的表达量在缺Fe、过量Fe以及超量Cd处理组中分别上调为对照(CK)的5.3、86.5、和45.4倍，VcZIP7基因的表达量在过量Fe处理组中上调AZD9291小鼠为对照的27.2倍，VcZIP 9基因的表达量在过量Cd、超量Cd条VP-16 molecular weight件下响应最显著，分别上调为对照(CK)的142.8倍和360.2倍。转基因酵母金属耐性分析试验表明，VcZIP7可能具有镉转运的功能；VcZIP4、VcZIP9均能介导锰的转运而VcZIP7不具备转运锰的能力；VcZIP4、VcZIP7、VcZIP9均具有铁转运功能，其中VcZIP7的铁转运功能最高，其相对较低的表达可能是蓝莓铁营养低效的重要原因。研究结果可为揭示蓝莓ZIP金属转运子家族的运输机制奠定基础。

旱柳(Salix matsudana)的铅(Pb)胁迫后转录组测序分析旨在探究旱柳抗Pbselleckchem Dolutegravir的关键基因与响应机制。利用旱柳无性系在不同浓度的Pb浓度胁迫下第0 d、1 d、7 d、25 d和40 d的叶片做转录组测序分析，并对转录组数据的可靠性用实时荧光定量PCR与基因表达量变化比对进行验证，以及三种主要抗氧化酶(CAT， POD， SOD)活性变化的分析。14个旱柳叶片样本的转录组测序共获得117 508个UnigenePulmonary bioreaction。不同浓度组的差异表达基因共同交集分析筛选得到Pb响应的关键基因zf-RING-2、MT2、TPS-Cin、MntB和MA寻找更多TE；在KEGG富集分析中均显著富集的代谢通路途径有：ABC转运蛋白、MAPK信号通路-植物、苯丙烷生物合成、植物病原相互作用、类黄酮生物合成和油菜素类固醇生物合成，这些通路在旱柳抗Pb响应中有重要作用；实时荧光定量PCR的结果以及抗氧化酶活性变化的结果与转录组测序结果基本一致，验证了转录组数据的可靠性。

目的:观察肛周碘伏湿热敷贴防治恶性血液病化疗病人骨髓抑制期肛周感染的疗效。方法:选取2Medical clowning020年5月—2021年10月于常州市第一人民医院血液科接受Alisertib作用治疗的100例恶性血液病化疗病人为研究对象，按化疗时间先后排序分为两组，每组50例，研究组应用肛周碘伏湿热敷贴剂方案，对照组应用1∶5 000的高锰酸钾稀释液肛周坐浴治疗方案。对恶性血液病化疗病人骨髓抑制期肛周感染发生率进行对比，统计肛周感染及肛周局部不良反应发生率、不良事件发生情况及病人的满意度。结果:研究组肛周感染发生率为6%,肛周局部不良反应发生率为6%;对照组肛周感染发生率为20%,肛周局部不良反应发生率为24%,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组操作简便，跌倒、受凉感冒、烫伤等不良事件发生率为0,病人满意度为98%;对照组跌倒、受凉感冒、烫伤等不良事件发生率为18%,病人满意度为78%,两组比较差异均有统计学TGF-beta/Smad抑制剂意义(P<0.05)。结论:肛周碘伏湿热敷贴剂有效降低了恶性血液病化疗病人骨髓抑制期肛周感染发生率，并能减少跌倒、受凉感冒、烫伤等不良事件发生，病人易于接受，增加了病人的舒适度和配合度，提高了护理质量。

乳腺增生是一种乳腺结构紊乱的良性乳腺疾病，如今乳腺增生在女性群体中发病率逐年上涨，病因与机体的雌激素与孕激素比例失调相关，症状表现为乳房疼痛、乳房结节或乳头溢液，常伴随心理压力使病情逐渐向乳腺癌恶化，因此有必要及时且有效治疗症状。目前中医常用中药口服或外敷、针灸推拿等治疗乳腺增生，西医用抗激素药物或手术治疗。中药能调节激素水平以治疗乳腺增生，针灸等方法能刺激穴位使乳房肿块减小，但传统的中药长Biogenesis of secondary tumor期服用可能会产生肝肾毒性，单纯的外部治疗手段见效较慢，很难达到快速有效治疗的效果。西药虽然能够控制病情，但长期服用易产生毒副作用，手术只能切除病灶且复发率高。有研究发现，中药复方内服与外用疗法联用疗效显著，标本兼治，毒寻找更多副作用小且AM-2282不良反应少，复发率低。该文整理近年相关文献，就中药复方内服与外治方式并用治疗乳腺增生进行综述，论述其联合疗法的有效性、临床评价指标、作用机制，指出现存不足之处，探索一种值得临床推广应用的综合疗法。

目的:基于GEO公共数据库中自身抗体相关性先天性房室传导阻滞(autoantibodyrelated congenital heart block,ACHB)的数据,通过生物信息学分析方法找寻在ACHB中差异表达的m RNA和Lnc RNA,构建竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ce RNA)调控网络,并筛选相关Lnc RNA,以预测非编码RNA影响ACHB发病的分子机制。方法:在GEO数据库NSC125066研究购买中下载与疾病相关的数据集。利用R语言“limma”包对数据集进行m RNA和Lnc RNA的差异性分析,利用“cluster Profiler”包对差异m RNA进行GO和KEGG功能富集分析。利用ENCORI预测可能与差异m RNA相互作用的mi RNA,再次利用ENCORI预测与相关mi RNA相互作用的Lnc RNA,并将预测结果与数据集中差异Lnc RNAs取交集。运用Cytoscape软件构建相关Lnc RNA-mi RNA-m RNA的ce RNA调控网络,并使用Cyto NCA插件根据degree值筛选网络中关键的Lnc RNA。结果:在GEO数据库中找到ACHB相关数据集GSE121699。通过差异分析得到519个差异m RNAs和27个差异Lnc RNAs。通过功能富集分析得到包含生物过程、细胞组分和分子功能在内的1106个GO条目和50条KEGG信号通路,并筛选出20条可能与疾病相关的功能条目或通路。ENCORI预测的Lnc RNA与数据集中差异Lnc RNA取交集,得到9个Lnc RNAs,根据与9个Lnc RNAs相关的121个mi RNAs和100个m RNAs,构建ce RNA网络。对网络进行拓扑结构分析,通过degree值排序得到前3个Lnc RNAs获悉更多,即NUTM2A-AS1、DHRS4-AS1和ARHGAP5-AS1。结论:本研究基于ACHB相关数据集成功构建了Lnc RNA-mi RNA-m RNA调控网络,有助于研究非编码RNA对ACHB发病的作用机Laboratory biomarkers制。网络中的NUTM2A-AS1、DHRS4-AS1和ARHGAP5-AS1是重要节点,可能调控了心肌细胞凋亡和炎症纤维化反应,从而参与ACHB发生发展,但该结果尚需开展后续实验进一步验证。