RAF信号通路

目的：采用网络药理学和分子对接探讨“知母-牡丹皮”治疗系统性红斑狼疮（SLE）的关键靶点及分子机制。方法：利用TCMSINCB28060溶解度P数据库查找知母-牡丹皮中药物所含有的化学成分KPT-330说明书，通过GeneCards、OMIM、TTD、DrugBank和DisGeNET数据库检索SLE疾病的相应靶点，将药物与疾病的基因映射得到知母-牡丹皮治疗SLE的目标靶点；采用Cytoscape软件筛选核心靶点，构建知母-牡丹皮“中药—有效成分—靶点”网络。将交集靶点导入Metascape数据库进行GO、KEGG富集分析，利用Auto Dock Tools软件进行分子对接。结果：共得到出知母-牡丹皮16个活drug-resistant tuberculosis infection性成分，预测193个对应靶点，与SLE的3224个疾病靶点共有的靶点为127个，主要有效化合物为槲皮素、山柰酚、淫羊藿苷元、豆甾醇和薯蓣皂苷元等；目标靶点为AKT1、TNF、IL-6、VEGFA、TP53。KEGG共获得194条富集结果，GO共获得1877条。分子对接结果表明主要有效成分可以和目标靶点结合，结合构象稳定。结论：通过网络药理学验证了知母-牡丹皮多成分、多靶点、综合作用的特点，推测了知母-牡丹皮在SLE治疗中的可能作用机制，为其进一步研究提供理论依据。

随着城市化和工业化的迅速发展,有害的细菌、病毒、真菌及其毒素等在材料表面的富集,成为生活、医疗和农业等领域出现的新型环境污染问题,并严重影响着人类的健康。其中,细菌污染是微生物污染中涉及范围最广、严重程度最高及暴露问题最大的一种。解决细菌污染问题的原则是阻止细菌病原体传播,方法是抗菌材料的设计与开发。已经开发了包括金属银、季铵盐、抗生素等在内的抗菌材料,但如何提高广谱性、实用性,以及抗细菌耐药性等成为开发新型、高效抗菌材料的关注之处。本文利用噻唑类抗菌官能团独特的疏水结构单元和出色的抗菌特点,将噻唑类聚合物设计成纳米材料增加其抗菌性能并减缓细菌耐药性。以丙烯酸噻唑(Ac T)为抗菌单元与常见的丙烯酸酯、苯乙烯等共聚单体进行结合,设计、制备了一系列噻唑类抗菌纳米微球。通过引入不同类型的活性组binding immunoglobulin protein (BiP)分(I_2,Zn~(2+)),增强其抗菌活性,并用于环境中细菌污染的去除。论文的研究内容和结果如下:首先阐述了抗菌剂与抗菌材料的关系,介绍了抗菌机理和不同类型的抗菌材料。其次,总结了抗菌材料在不同领域的应用。最后对噻唑类抗菌剂和应用进行了综述。其次,以丙烯酸噻唑(Ac T)作为疏水/抗菌单体,甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA)作为亲水性/抗细菌黏附单体,甲基丙烯酸苄基酯(BM)作为疏水性共聚单体,N,N-亚甲基双丙烯酰胺(NMBA)作为交联单体,以H_2O为反应介质,过硫酸钾(KPS)为引发剂,采用一锅乳液聚合法,成功制备了含噻唑-两性离子聚合物纳米微球(TZPNs)。采用SEM、EDS、FT-IR、XPS和DLS对TZPNs的形貌、结构进行了表征和分析。以金黄色葡萄球菌(S.aureus)和大肠杆菌(E.coli)为测试菌种,评估了TZPNs的抗菌活性。结果表明:培养24 h后,TZPNs对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为5.00 mg/m L。探讨了TZPNs抗菌机理,Ac T和SBMA是TZPNs具Compound C化学结构有一定抗菌性能的主要原因。另外,将TZPNs添加到涂料、墨水和染料中,发现能明显改善他们的抗菌活性。说明TZPNs作为抗菌活性成分,可应用于家用产品领域的抗菌。第三,以疏水Ac T为抗菌功能单体、苯乙烯(St)为疏水性共聚单体,N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)为亲水性单体并用作聚维酮碘的前体,以Et OH/H_2O为溶剂,采用一锅乳液聚合法,成功制备了含噻唑单元的聚维酮纳米微球(Pc NS)。进一步将Pc NS进行碘化反应,制备了含噻唑单元的聚维酮碘纳米微球(Pc NSI)。采用SEM、FT-IR、UV-Vis DRS、XPS、DLS对Pc NS和Pc NSI的形貌、结构进行了表征和分析。以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为测试菌种,评估了Pc NSI抗菌活性。结果表明:在培养24 h后,Pc NSI对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC为0.04 mg/m L。考察了Pc NSI的持久抗菌性,发现Pc NSI抗菌活性即使超过7 d也能保持99.9%。此外,探讨Pc NSI抗菌机理,Ac T结合无机小分子碘是Pc NSI具有较好抗菌性能的原因。考察了Pc NSI的ICI 46474配制应用性,评估了其对水体细菌去污的影响,发现其在水体消毒等方面具有良好的应用前景。最后,以Ac T为疏水抗菌单体,甲基丙烯酸甲酯(MMA)为疏水共聚单体,甲基丙烯酸-2-(二甲氨基)乙酯(DMEM)和甲基丙烯酸(MAA)为共聚单体,H_2O为反应介质,KPS为引发剂,采用一锅乳液聚合法制备了含噻唑单元的纳米微球(Pc MAD)。其次,利用Zn O、(NH_4)_2CO_3和NH_3?H_2O将Zn~(2+)引入到Pc MAD中,制备了含噻唑单元与锌离子纳米微球(Pc MADZn)。采用SEM、FT-IR、XPS以及DLS对Pc MAD和Pc MADZn形貌和结构进行表征分析。以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为测试菌种,评估了Pc MADZn的抗菌活性。结果表明,Pc MADZn对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC为0.40 mg/m L,其在7 d后仍保持着优异的抗菌活性,抑制率可保持在97.2%以上。另外,抗真菌(霉菌)活性评估表明,其在生化培养箱中放置7 d后,其抑制率仍保持在99.9%,表明其具有优异的抗真菌活性。进一步考察了Pc MADZn在玉米生长试验中的应用,发现其对玉米的生长有促进作用。因此,本研究为解决微生物在农业方面的危害问题提供了一种环保、低毒的方法,有望应用于农业中。综上所述,本论文以疏水性的噻唑为抗菌单元,与常见的丙烯酸(酯)与苯乙烯两类单体进行共聚,制备了3种具有抗菌活性的噻唑类抗菌纳米微球(含噻唑-两性离子纳米微球、含噻唑单元的聚维酮碘纳米微球、含噻唑单元与锌离子纳米微球)。所制备的TZPNs、Pc NSI和Pc MADZn有望应用于生活环境、农业生产环境的抗菌,也为制备高效、持久的疏水性抗菌剂提供了策略和方法。

糖尿病作为临床上常见的慢性代谢性疾病，与其联系紧密的糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿Compound 3研究购买病周围神经病变、糖尿病心肌病、糖尿病足等都属于糖尿病并发症。以往研究发现，中药单体及复方的活性成分可调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPKMedicare savings program）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、PTEN诱导假定激酶/帕金森病蛋白（PINK1/Parkin）、沉默信息调节因子1(SIRT1)等信号通路，通过上调自噬相关蛋白水平表达，调节异常葡萄糖代谢，改善微循环，抑制炎症及氧化应激反应，促进自噬，以治疗相关疾病。本文通过系统梳理多种自噬相关信号通路，总结中药干预自噬相关通路治疗糖尿病并发Ipatasertib体外症的研究成果，以期为研究自噬在糖尿病并发症中的作用机制提供新的思路。

目的 通过观察电针“内关”穴观察心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠心肌组织中的酪氨酸激酶-2(JAK2)和信号转导及转录激活因子-3(STAT3)表达，探讨电针上调JAK2/STAT3信号通路，促进抗炎因子表达，减少MIRI损伤的作用机制。方法 将超声心动图正常的30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组，每组10只。模型组和电针组采用冠状动脉左前降支（LModeling HIV infection and reservoirAD）结扎法制备MIRI模型，假手术组仅穿线不结扎。电针组此网站在造模术后第1、3、5天进行双侧“内关”穴电针（疏密波，2 Hz/100 Hz,2 mA）干预，每天1次，每次20 min。采用超声心动图观察术后第1、3、5天大鼠左心室射CB-839血分数（LVEF）以评估心功能；HE染色观察大鼠心肌病理形态变化；马松染色观察大鼠心肌纤维化情况；ELISA检测心肌组织中IL-4、IL-6的表达；免疫组化检测心肌组织中IL-1β、IL-10的表达情况；Western blot法测定梗死区心肌组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠术后EF明显降低（P<0.05），纤维化面积增大（P<0.05）,IL-4、IL-6、IL-10、IL-1β含量均升高（P<0.05）,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达含量均升高（P<0.05）；与模型组比较，电针组大鼠EF上升（P<0.05），电针组大鼠纤维化面积减小（P<0.05）,IL-4、IL-10含量升高，IL-6、IL-1β含量下降（P<0.05）,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达含量均升高（P<0.05）。结论 电针内关穴可显著上调JAK2/STAT3信号通路，减少促炎因子的分泌，增加抗炎因子的表达，减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。

研究目的:急性肾损伤(AKI)是常见且危重的临床急症,缺血再灌注损伤(IRI)是AKI的常见病因之一,有大约半数以上患者会逐渐进展至慢性肾脏病(CKD)。随着该病发病率与死亡率的上升,找到该病的有效治疗药物已迫在眉睫。研究发现肾脏病患者的氧化应激增强、肠道菌群失调。肾衰泄浊汤已投入临床使用多年,前期研究已经证实肾衰泄浊汤可cancer epigenetics显著改善CKD患者肾功能、抑制氧化应激和改善肠道菌群结构。本课题组从氧化应激和肠道菌群入手,进一步探讨肾衰泄浊汤对AKI大鼠肾功能、肾组织和肠道组织病理、氧化应激、肠道菌群以及肾损伤相关蛋白的通路调控机制,为肾衰泄浊汤科学防治AKI提供实验依据。方法:选取24只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组及大黄素组。除假手术组外,其余各组均采用微动脉夹夹闭双侧肾蒂45min以建立大鼠急性肾缺血再灌注模型。模型组和假手术组用生理盐水灌胃,其余组均分别用相应剂量灌胃给药15d。ELISA检测各组大鼠尿液中24h尿蛋白总量、血肌酐(Cre)和尿素氮(BUN)水平;PCR检测肾衰泄浊汤中剂量组粪便中大肠杆菌、脆弱拟杆菌和粪肠球菌分布;HE染色检测肾组织和小肠组织病理损伤情况;免疫组化法检测肾脏组织中巨噬细胞抑制凋亡蛋白(AIM)、肾损伤分子-1(KIM-1)表达;ELISA检测尿液中KIM-1、血清D-乳酸水平和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)含量;Western blot检测肾组织内AIM、KIM-1、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白的表达水平。结果:1.各组大鼠肾功能结果:与假手术组相比模型组和大黄素组中BUN、Cre和尿蛋白含量均显著升高(P<0.05);与模型组相比,肾衰泄浊汤低剂量组CVP-16体外re和1d与14d的尿蛋白含量显著降低(P<0.05),肾衰泄浊汤组中高剂量组BUN、Cre和尿蛋白含量显著降低(P<0.05),大黄素组在1d和7d的尿蛋白含量显著降低(P<0.05),大黄素组的BUN、Cre和14d的尿蛋白无显著差异。2.各组大鼠肾组织病理学损伤结果:模型组肾小管排列松散,组织水肿,肾小球结构损伤;肾衰泄浊汤组高剂量和大黄素组肾小管排列紧密,肾小球结构较好,水肿减轻。3.各组大鼠肾小管损伤相关蛋白结果:ELISA检测发现,与假手术组相比,模型组尿NGAL含量在7d和14d显著升高(P<0.05),KIM-1含量在1d、7d和14d均显著升高(P<0.05);与模型组相比,给药组尿NGAL和KIM-1含量下降,其中肾衰泄浊汤中剂量组最为显著(P<0.05)。WB检测发现与假手术组相比,模型组肾组织中AIM和KIM-1蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,肾衰泄浊汤中高剂量组和大黄素组AIM和KIM-1蛋白的表达均显著降低(P<0.05)。免疫组化检测发现,与假手术组相比,模型组中AIM和KIM-1表达升高;与模型组相比,给药组AIM和KIM-1表达降低,其中,肾衰泄浊汤高剂量组和大黄素组中,AIM和KIM-1蛋白表达最少。4.各组大鼠肠道组织病理学损伤结果:模型组肠腺结构损伤、小肠肌层、环状肌组织水肿;肾衰泄浊汤低、中、高剂量组肠腺排列整齐,环状肌组织水肿减轻;大黄素组肠腺排列整齐。5.肾衰泄浊汤中剂量组大鼠肠道菌群结构、肠粘膜通透性结果:PCR检测发现,与第1d相比,肾衰泄浊汤中剂量组在第14d的有害菌大肠杆菌菌落显著减少(P<0.05);与第1d相比,有益菌脆弱拟杆菌和粪肠杆菌菌落在第14d显著增多(P<0.05)。ELISA检测发现,与假手术组相比,模型组血清D-乳酸含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,肾衰泄浊汤低中高剂量组和大黄素组血清D-乳酸含量均显著降低(P<0.05)。6.Western Blot法测定肾组织p-p38、p-JNK蛋白表达结果:与假手术组相比,模型组中的p-p38和p-JNK蛋白均显著上调(P<0.05);与模型组相比,肾衰泄浊汤低中高剂量组和大黄素组的p-p38和p-JNK蛋白均显著下调(P<0.05),其中肾衰泄浊汤中剂量组和大黄素组对下调p-p38蛋白效果较好,肾衰泄selleck合成浊汤中高剂量组对下调p-JNK蛋白效果较好。结论:1.肾衰泄浊汤可改善AKI大鼠的肾功能。2.肾衰泄浊汤可改善AKI大鼠肾脏病理损伤。3.肾衰泄浊汤可通过下调NGAL、AIM和KIM-1蛋白以缓解AKI。4.肾衰泄浊汤改善AKI大鼠的肠道病理损伤。5.肾衰泄浊汤改善AKI大鼠肠道菌群结构,降低肠黏膜通透性。6.肾衰泄浊汤可调节p-p38、p-JNK蛋白的表达,抑制氧化应激。

目的 探讨血清胃泌素-17(gastrin-17,GS-17、胃泌素（gastrin,GAS）、Ⅰ型胶原N端前肽（procollagen type I此网站 N-terminal propeptide,PINP）水平与幽门螺杆菌（Hp）感染消化性溃疡相关性分析。方法 选取2020年1月—2021年12月抚州市东乡区人民医院收治的86例消化性溃疡患者为研究组，根据患者是否感染Hp分为2个亚组[Hp感染组（n=54）、无Hp感染组（n=32）]，另选取同期50名健康体检者为对照组。比较3组血清GS-17、GAS、PINP水平，采用ROC曲线分析血清GS-17、GAS、PINP检测cell-mediated immune response对Hp感染消化性溃疡的诊断价值，采用Pearson相关性分析血清GS-17、GAS、PINP与Hp感染消化性溃疡的相关性。结果 研究组血清GS-17、GAS水平高于对照组，PINP水平低于对照组（P<0.05）。Hp感染组血清GS-17、GAS水平高于无Hp感染组，PINP低于无Hp感染组（P<0.05）。经ROC曲线分析显示，血清GS-17、GAS、PINP诊断Hp感染消化性溃疡的曲线下面积（AUC）分别为0.888(95%CI为0.813～0.963P,<0.05)、0.906(95%CI为0.843～0.969P,<0.05)、0.927(95%CI为0.870～0.985P,<0.05)，预测灵敏度分别为83.3%、80.9%、90.6%，特异度分别为87.5%、90.6%、81.5%。Spearman相关性分析显示，血清GS-17、GAS水平与Hp感染消化性溃疡疾病进展程度呈正相关（r=0.583、r=0.595，均P<0.001），与PINP呈负相关（r=-0.612,P<0.001）。结论 血清GS-17、Colforsin molecular weightGAS、PINP表达水平与消化性溃疡患者Hp感染具有相关性，三者联合检测可作为诊断Hp感染消化性溃疡的敏感指标。

目的：观察艾灸通过白细胞介素-33(IL-33)/生长刺激表达基因2蛋白（ST2）信号通路对阿尔茨海默病（AD）小鼠小胶质细胞向M2方向极化的影响。方法：5月龄APP/PS1雄性小鼠随机分为模型组和艾灸组，同月龄C57BL/6J小鼠为对照组，每组9只。艾灸组温和灸“百会”“涌泉”，每次30 min，每日1次，每周5 d，共4周。采用Morris水迷宫实验评估小鼠空间学习记忆能力，Western blot法检测小鼠海马组织IL-33和ST2蛋白表达量，免疫荧光染色法检测cell-free synthetic biology小鼠海马CA1区β-淀粉样蛋白（Aβ）、磷酸化Tau蛋白（p-Tau）阳性表达水平及IL-33/离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)、ST2/Iba-1、精氨酸酶1(Arg1)/Iba-1和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/Iba-1的荧光双标共表达情况。结果：与对照组比较，模型组小鼠各时点逃避潜伏期延长（P<0.001,P<0.01），进入有效区域次数和目标象限游泳时间百分比下降（P<0.001），海马CA1区Aβ和p-Tau蛋白阳性表达水平升高（P<0.001），海马组织IL-33和ST2蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001），海马CA1区IL-33/Iba-1、ST2/Iba-1、Arg1/Iba-1蛋白共表达水平降低（P<0.001）,iNOS/Iba-1蛋白共表达水平升高（P<0.001）。与模型组比较，艾灸组小鼠各时点逃避潜伏期缩短（P<0.001,P<0.01），进入有效区域次数和在目标象限游泳时间百分比升高（P<0.001），海马CA1区Aβ和p-Tau蛋白阳性表达水平降低（P<0.001），海马组织IL-33和ST2蛋白表达升高（PSB431542体内实验剂量<0.05,P<0.01），海马CA1区IL-33/Iba-1、ST2/Iba-1、Arg1/Iba-1蛋白共表达水平升高（P<0.001,P<0.05,P<0.01）,iNOS/Iba-1蛋白共表确认细节达水平降低（P<0.001）。结论：艾灸可以改善APP/PS1小鼠的空间学习记忆能力，减少Aβ和p-Tau的病理沉积，可能与上调IL-33/ST2信号通路、促进小胶质细胞向M2方向极化有关。

目的 探究CaMKⅣ信号对肌损伤炎症反应及肌修复的调控作用。方法 采用CRISPR/Cas9技术构建CaMKⅣ基因缺失（CaMKⅣ~(-/-)）小鼠，PCR表型鉴定。心脏毒素（Cardiotoxin,CTX)诱导野生B6鼠及CaMKⅣ~(-/-)鼠急性肌损伤。HE染色观察损伤肌内炎症程度及肌修复过程。DystSAG分子式rophy、F4/80免疫荧光双标，观察损伤肌内巨噬细胞渗出差异。F4/80、Ly-6C、CD206、Ki67染色及流式检测，分析损伤肌内M1、M2巨噬细胞的数量和比例，以及M1、M2巨噬细胞的局部增殖能力。结果 成功构建并繁殖CaMKⅣ~(-/-)鼠。HE及荧光染色观察证实小鼠体内CaMKⅣ信号缺失可致肌内炎症加剧、肌修复延迟。CaMKⅣ~(-/-)小鼠损伤肌内再生的中央核肌纤维（Dystrophin~+）数3-Methyladenine作用量低于WT鼠，巨噬细胞（F4/80~+）数量显著高于WT鼠，以M1细胞（F4/80~+Ly-6C~+）为biological calibrations主，M2细胞（F4/80~+CD206~+）比例低于WT鼠。CaMKⅣ~(-/-)鼠损伤肌内增殖巨噬细胞（F4/80~+Ki67~+）数量显著高于对照鼠，但以增殖的M1细胞为主(Ly6C~+Ki67~+),M2细胞(CD206~+Ki67~+)的增殖与对照鼠无显著差异。结论 CaMKⅣ信号缺失可致肌损伤炎症加剧、促进损伤肌内M1巨噬细胞的渗出及增殖，延误肌修复。

研究目的:根据《中国心血管健康与疾病报告2021》显示,随着经济社会发展与生活方式的改变,我国居民不健康生活方式日益突出,心血管危险因素对居民健康影响日益加深,我国心血管疾病患病率和死亡率正处于持续上升阶段。其中急性心肌梗死发病率逐年升高并趋于年轻化,严重威胁中国城乡居民生命健康。临床急性心肌梗死患者常采用药物治疗、溶栓治疗或经皮冠状动脉介入治疗等手段,恢复缺血心肌血流。但研究发现,血流恢复后,常伴随心肌氧化应激水平过度增加,导致心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion, I/R)损伤的发生,严重影响患者预后和生活质量。近年来研究发现I/R心脏游离铁和活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平显著升高,导致心肌细胞脂质过氧化,诱发铁死亡,是导致心肌I/R损伤的重要机制之一。运动是改善I/R诱导心肌损伤的有效干预方式,可降低I/R心肌氧化应激水平,提高抗氧化能力,但运动可否改善I/R诱导心肌细胞铁死亡尚无报道。成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor21,FGF21)是目前公认的运动因子,可通过改善心肌细胞代谢和抗氧化能力,有效改善I/R诱导的心肌损伤。FGF21可改善病理条件下肝脏和大脑等组织细胞铁死亡水平,运动可否通过调节FGF21,改善I/R诱导心肌细胞铁死亡需进一步探索。本研究通过构建运动干预小鼠的I/R模型,探讨运动可否上调心肌FGF21表达,改善心肌细胞铁死亡及其可能机制,为临床运动改善I/R损伤的作用靶点和分子机制提供实验依据。研究方法:3月龄雄性C57BL/6小鼠,18-20g,适应性喂养1周后,随机分为假手术对照组(Sham)、缺血再灌注2小时组(Control-I/R 2h)、缺血再Diasporic medical tourism灌点击此处注24小时组(Control-I/R 24h)、运动+假手术组(Exercise training-Sham, ET-Sham)、运动+缺血再灌注2小时组(ET-I/R 2h)和运动+缺血再灌注24小时组(ET-I/R 24h)。其中,运动组小鼠进行6d适应性跑台训练。第1w为适应性训练,第1d以6m/min×10min运动,每天增加10min,速度递增2m/min,第6d增至16m/min×60min,跑台坡度为0°,休息1d。正2-7周为正式训练,运动跑台坡度为0°,跑速为16m/min,60min/d,5d/wk×6w。实验期间小鼠每周测一次体重。手术组小鼠进行冠状动脉左前降支(LAD)结扎术,30min后去除结扎线,再灌注2h和24h,制备I/R模型,假手术组只穿线不结扎,以排除手术因素干扰。手术过程中连接小动物心电图检测仪,进行心电信号采集,以心电图ST段弓背抬高,出现病理性Q波或T波倒置作为结扎成功的标志。采用小动物超声心动图评估心脏收缩功能。异氟烷麻醉小鼠,称重后,眼眶取血,取上清备用。迅速开胸摘取心脏,预冷生理盐水清洗,滤纸吸干后称重。用于组织学实验样本放入4%多聚甲醛溶液中固定保存48h,用于生化与分子生物学指标检测样本放入液氮固定24h后,转移至-80℃超低温冰箱中保存。取甲醛固定心肌组织进行石蜡包埋,制备切片,常规HE和Masson染色,观察细胞形态,分析细胞横截面积大小和心肌纤维化程度。超氧化物阴离子荧光探针(Dihydroethidium,DHE)检测心肌细胞ROS水平。采用生化检测试剂盒检测心肌组织总谷胱甘肽(T-GSH),氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量,测定心肌细胞中氧化应激水平。Western Blotting检测心肌组织中溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11, SLC7A11/xCT)、谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4, GPX4)和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)蛋白表达。其中,组织学染色采用Image J进行分析,WB结果采用Image Lab进行处理与分析,所得数据通过GraphPad Prism进行单因素方差分析,Tukey比较并做图。研究结果:[蔡1] HE染色结果显示,与Sham组比,ET-Sham组小鼠心肌组织结构正常,心肌细胞排列有序,未见心肌胶原纤维化,心肌细胞横截面积显著增大(p<0.05),FGF21蛋白表达显著升高(p<0.01);Control-I/R 2h组结扎部位心肌纤维断裂、组织破碎、排列紊乱、心肌细胞数量减少,左心室射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(FS)下降,心功能降低,氧化应激水平升高,心肌组织中TUNEL阳性颗粒数量增加,可见心肌胶原纤维化,FGF21蛋白表达显著升高(p<0.05),Nrf2表达升高但无显著性差异,T-GSH和GSSG含量均有所升高;Control-I/R 24组心肌纤维断裂严重,心肌细胞数量减少,可见胶原纤维沉积,EF和FS下降,左心室舒张期内径(LVIDd)和左心室收缩期内径(LVIDs)上升,ROS水平升高,心肌组织中TUNEL阳性颗粒数量增加,FGF21表达显著升高(p<0.01),Xct表达显著降低(p<0.01)。与Control-I/R 2h组相比,Control-I/R24h组心肌破碎,EF降低,心功能下降,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2表达升高但无显著性差异;ET-I/R 2h组EF升高,心功能改善,ROS水平下降,心肌组织中TUNEL阳性颗粒数量降低,FGF21和Xct表达显著升高(p<0.05)。与Control-I/R 24h组相比,ET-I/R 24h组心肌纤维排列较为整齐,组织破碎程度较轻,胶原纤维化程度减轻,FS和LVIDd显著升高(p<0.05),心功能改善,ROS水平降低,FGF21表达显著升高(p<0.05),GPX4、Xct和Nrf2升高。T-GSH含量升高。与ET-Sham组相比,ET-I/Rselleck HPLC 2h组心肌纤维断裂,心肌细胞数量减少,EF和FS下降,Xct表达升高。ET-I/R24h组心肌纤维断裂,组织破碎,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2升高。T-GSH含量升高,GSSG含量下降。与ET-I/R 2h组相比,ET-I/R 24h组ROS水平升高,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2、GPX4和Xct表达均有升高。研究结论:6周有氧运动可上调I/R心肌组织中FGF21的表达,降低心脏ROS水平,抑制心肌细胞凋亡和铁死亡,改善心肌损伤,发挥心脏保护作用。

目的 探索口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)顺铂化疗耐药的相关基因及信号通路。方法 建立顺铂诱导的口腔鳞癌细胞耐药模型，将顺铂耐药细胞(HN6-R)与非顺铂耐药细胞(HN6-WT＿Control)进行转录组RNA-Seq测序分析，筛选两组中差异表达的基因(DEGs),利用生物信息学方法分析差异基因及相关信号通路。结果 测序结果显示顺铂耐药细胞与非顺铂耐药细胞有216个基CCRG 81045抑制剂因发生显著变化(log_2Fold Change, log_2FC>1;adjusted P value<0.05),其中55个基因下调，161个基因上调。对耐药细胞中上调的基因进行了基因富集分析(GSEA)确定了潜在的耐药相关通路，其中包括IL6/JAK2/STAT3信号通路、TNF-α和NGSKJ4配制Finfections after HSCT-κB信号通路、低氧通路、干扰素-γ应答和干扰素-α的应答通路等，其中变化最显著的基因为CXCL10、CXCL11、NR4A3和IGFBP3等。结论 IL6/JAK2/STAT3等信号通路在口腔鳞癌顺铂耐药细胞株中显著上调，可能成为预测口腔鳞癌化疗疗效的标志物及潜在的治疗靶点。