RAF信号通路

目的：探究家庭病床服务模式下高血压患者的防治效果。方法：收集上海市浦东新区祝桥社Bioglass nanoparticles区卫生服务中心收治的223例高血压患者为研究对象，随机分成观察组和对照组。对照组采用电话随访管理模式，观察组采用家庭病床服务模式进行管理，比较两组自我管理行为量表评分、遵医行为情况、血压水平。结果：治疗前，两组治疗维度、社会心理维度、躯体活动维度、饮食行为维度评分及总分比较，差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，观察组治疗维度、社会心理维度评分及总分高于对照组，差异有统计学意义(P=0.000)；两组躯体活动维度、饮食行为评分比较，差异无统计学意义(P>0.0selleck化学5)；观察组按时服药、完成系统治疗、并发症的预防、按时复诊、合理功能锻炼、合理饮食、良好生活方式、保持乐观情绪、对自身疾病认识方面占比均高于对照组，差异有统计学意义(P=0.000)。治疗前，两组收缩压、舒张压比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，观察组收缩压、舒张压低于对照组，差异有统计学意义(P=0.000)。结论：家庭病床服务模式可以提高高血压患者的自我管理能力和遵医行为水平，明显降低高血压患selleck合成者的血压水平，疗效显著。

本论文共两部分,第一部分为吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)酮类FLT3抑制剂的研究,第二部分为吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)酮类FLT3抑制剂的研究。白血病,是一类起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病。根据白血病细胞的分化程度和自然病程,可将其分为急性和慢性两大类。而根据主要涉及的细胞系列可将急性白血病分为急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)。其中AML约占成年人急性白血病的80%左右,患者的5年存活率仅为25%。而30%的AML患者含有FLT3蛋白突变(FLT3-ITD/FLT3-TKD),上述突变都会造成FLT3的持续激活,因此,靶向FLT3蛋白是治疗AML的有效策略之一。目前,仅有3个FLT3抑制剂在国内SCH772984溶解度外上市,随着临床的应用FLT3抑制剂会出先耐药复发等问题,而国内进展最快的FLT3抑制剂仍处于临床III期,。因此,开发高效、抗耐药突变的新型骨架FLT3抑制剂是该领域研究的主要方向。为获得结构新颖的FLT3抑制剂,本论文以课题组前期对内部化合物库筛选得到的化合物1028为先导化合物,采用骨架迁越等策略,经合理药物设计,设计Exposome biology合成了两类新型骨架的FLT3抑制剂:吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)酮类:共35个化合物经FLT3/FLT3-D835Y激酶抑制活性测试,一部分化合物表现出中等到强的抑制活性,有9个化合物的FLT3-D835Y的IC_(50)值小于90 nM,优于阳性对照quizartinib,其中,化合物I-24为最优,其对FLT3、FLT3-D835Y的IC_(50)值分别为62.2±5.7 nM和29.5±4.8 nM。选取激酶活性较优的化合物进行了细胞株MV4-11、Molm-13的增殖抑制活性测试,大部分化合物对MV4-11表现出了较强的增殖抑制作用,而对于Molm-13的抑制作用较前者弱。随后,挑选激酶与细胞活性均较优的6个化合物进行体外肝微粒体稳定性试验,结果表明化合物均具有良好的代谢稳定性,以化合物I-24为最优。此Etoposide配制外,化合物I-24对含有各种点突变Ba F3细胞株有良好的抑制活性,优于阳性对照quizartinib。后续相关生物试验证明I-24具较高的激酶选择性和安全性。综上所述,化合物I-24具有进一步深入研究的价值。吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)酮类:共20个化合物经FLT3/FLT3-D835Y激酶抑制活性测试,所有化合物均表现出强效的抑制活性,优于阳性对照quizartinib或与其相当。优选化合物进行细胞株与Ba F3细胞株的增殖抑制活性测试,其中化合物II-7与II-8均表现出优异的活性,对MV4-11细胞株的增殖抑制活性IC_(50)值分别为2.6±0.6 nM和3.9±1.1 nM,且对Ba F3细胞株的抑制活性优于阳性化合物quizartinib。小鼠肝微粒体稳定性试验表明化合物II-7具有较高的代谢稳定性,激酶选择性试验证实化合物II-7具有较高的激酶选择性和安全性,值得进一步研究的。

目的:探讨尿微量白蛋白水平预测经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的急性心肌梗死(AMI)患者术后心肌微循环障碍的临床价值。方法:根据患者术后心肌声学造影情况将98例行PCI治疗的AMI患者分为微循环障碍组(n=67)与正常组(n=31)。比较两组24 h尿微量白蛋白(24 h-UmAlb)等临床资料差异，分析PCI后心肌微循环障碍的影响因素，并构建24 h-UmAlb预测PCI术后心肌微循环障碍的受试者工作特征(ROC)曲线。结果:与正常组比较，微循环障碍组女性比例、合并高血压比例及术前TIMI血流<3级比例更高(P<0.05),微循Cell Analysis环障碍组血清BNP水平和24 h-UmAlb水平均增高(P<0.05)。Logisitic回归分析显示，女性、合并高血压、术前TIMI血流<3级及24 h-UmAlb水平均是AMI患者PC确认细节I后心肌微循环障碍的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示，24 h-UmAlb预测PCI后心肌微循环障碍的曲线下面积(AUC)为0.943(95%CI:0.877～0.980),最佳临界点为15.9 mg/24 h,此时的敏感度为88.06%,特异度为90.32%。结论:24 h-UmAlb是AMI患者PCI后心肌微循环障碍的影响Ferrostatin-1 IC50因素，其检测有重要预测价值。

目的 制备叶酸-人血白蛋白-索拉非尼纳米粒(FA-HSA-SRF-NPs),评价其体外抗肝肿瘤活性。方法 化学交联法制备FA-HSA-SRF-NPs,采用粒度分析仪和透射电镜对其进行表征，并计算载药量和包封率；共聚焦显微镜观察FITC-FA-HSA在HepG2细胞中的蓄积；高效液相色谱(HPLC)法测定HepG2细胞中索拉非尼含量；噻唑蓝(MTT)法检测该纳米粒对HepINCB018424临床试验G2细胞毒性；流式细胞技术和Western blotting法考察纳米粒对HepG2细胞促凋亡能力。结果 FA-HSA-SRF-NPs水合粒径(85.4±3.3) nm, Zeta电位(-22寻找更多.47±0.90) mV,载药量和包封率分别为(3.83±0.26)%和(91.09±6.14)%,叶酸偶联量(13.97±0.27)μg·mg HSA~(-1),能在HepG2细胞蓄积，对HepG2细胞毒性和促凋亡作用显著优于索拉非尼。结论 FA-HSA-SRF-NPs制剂性质良好，体外抗肝肿瘤活性显著优于索拉非尼，具有潜在抗Immune Tolerance肝癌临床应用价值。

目的 探讨体检人群中肺selleckchem Gefitinib-based PROTAC 3微小结节发生的影响因素。方法 回顾性分析2021年10月至2022年5月于锦州医科大学附属第一医院健康管理中心体检的体检者的资料，根据“肺结节诊治中国专家共识（2018版）”，将肺CT检查出肺微小结节者作为病例组，无肺微小结节者作为对照组，应用肺结节风险评估问卷收集风险因素，采用单因素分析和二元logistic回归分析肺微小结节患病的影响因素。结果 单因素分析结果显示，是否有肺癌家族史、合并肺疾GSKJ4半抑制浓度病史、高血压、糖尿病、是否有油烟暴露史和职业暴露史、是否吸烟和被动吸烟、是否经常食用蔬菜水果的病例组和对照组肺微小结节检出率的差异有统计学意义（P<0.05），有无其他肿瘤家族史、心脏病、是否饮酒的两组间肺微小结节检出率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。多因素logistic回归分析结果显示，有肺癌家族史、有慢性肺疾病史、有油烟暴露史、有职业暴露史及吸烟是肺微小结节发生的危险因素，而经常食用水果并且患有高血压是Infected wounds肺微小结节的保护性因素。结论 找出影响肺微小结节发生的高危因素，有针对性地给予患者健康教育与指导，对做好肺微小结节的早期预防工作具有重要意义。

目的 分析急性心肌梗死（AMI）患者经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后心力衰竭发生情况及影响因素。方法 选取2019年4月至2021年6月于医院行PCI的120例AMI患者为研究对象，分析PCI后患者心力衰竭发生情况及影响心力衰竭发生的相关因素。结果 120例AMI患者，行PCI后发生心力衰竭3D-Lin-MC3-DMA分子式4例（28.33%）；心力衰竭患者恶性心律失常、术后心肌梗死溶栓治疗（TIMI）心肌灌注0～1级、空腹血糖（FBG）≥7.0 mmol/L占比均高于无心力衰竭患者，差异有统计学意义（P<0.05）；多因素Logistic回归分析结果显示，恶性心律失常、术后TIMI心肌灌注0～1级、FBG≥7.0 mmol/L是AMI患者PCI后心力衰竭发生的独立危险因素（P<0.05）。结论 AMI患者PCI后心力衰竭发生率较高，经分析，恶性心律失常、术后TIMI心肌灌注0～1级、FBG≥7.0 mmGefitinib NMRol/L是AMI患者PCI后心力衰竭发生的独立危险因素，临床可据此制定相关干预方Genetic instability案，以预防PCI后心力衰竭的发生，促进病情转归。

目的 研究人参皂苷对人宫颈癌细胞相关生物学功能的GW4869配制影响。方法 试验组使用不同浓度人参皂苷Rg3培养人宫颈癌Hela细胞，基础培养作为对照。噻唑蓝(MTT)法检测癌细胞增殖；利用流式细胞法检测各组处于各细胞周期的细胞数量了解细胞凋亡情况；Transwell及Boyden试验检测肿瘤细胞迁移、侵袭情况。结果 试验组宫颈癌细胞增殖抑制率较对照组均显著上升，且试验组对宫颈癌细胞的增殖抑制率随药物浓度增大而升高(P<0.05);人参皂苷Rg3处理宫颈癌细胞48 h的IC50值为(84.32±0.05)μg/ml;试验组G2/M期宫颈癌细胞比例[(2.01±0.79)%]较对照组[(35.44±3.10)%]显著下降(P<0.05),癌细胞凋亡率[(53.Neurally mediated hypotension76±4.03)%]较对照组[(0.19±0.22)%]显著上升(P<0.05);Transwell结果表明试验组癌细胞过膜个数[(35.23±7.34)个]较对照组[(115.33±21.56)个]显著降低(P<0.05);Boyden试验结果表明试验组宫颈癌细胞穿膜个数[(29.37±6.45)个]较对照组[(90.37±12.59)个]显著降低(P<0.05)。结论 人参皂苷Rg3能够通过抑制人宫颈癌细胞的增殖，影响肿瘤细胞周CCRG 81045分子式期促进细胞凋亡，抑制人宫颈癌细胞的迁移和侵袭等恶性生物学功能来阻止人宫颈癌细胞的持续发展。

<正>一些血液恶性肿瘤（如多发性骨髓瘤）对免疫介导的抗肿瘤反应具有固有的抗性，其原因尚不清楚。异基因骨髓移植（alloBMT）由于具有显著的移植物抗肿瘤（GVT）效应，是治疗血液恶性肿瘤的唯一有效免疫疗法，但复发仍然是主要的死亡原因。研究人员建立了alloBMTFUT-175小鼠模型，其中血液恶性肿瘤对GVT效应敏感[急性髓性白血病（AML）]或耐药（骨髓瘤）Oil remediation。研究发现，骨髓中CD8~+T细胞耗竭主要是同种抗原驱动的，骨髓瘤上存在抑制性配体的表达，但AML上不存在。由于这种与肿瘤无关的耗竭信号，骨髓瘤中的免疫检查点抑制（ICI）加剧了移植物抗宿主病（GVHD），但未促进GVT效应。移植后应用环磷酰胺（PT-Cy）selleckchem Erdafitinib耗尽表型耗竭的供体T细胞，保留显示干细胞样记忆表型、具有染色质可及性的T细胞，这种可及性存在于细胞因子信号基因[包括白细胞介素-18(IL-18）受体]中。PT-Cy后，ICI联合抗PD-1或抗TIM-3治疗仍然无效，而抗诱饵IL-18(DR-18）的给药在骨髓瘤和白血病模型中均显著增强了GVT效应，且没有加重GVHD。因此，研究人员定义了alloBMT后对T细胞介导的抗肿瘤效应的耐药机制，并描述了一种靶向干细胞样记忆T细胞以增强抗肿瘤免疫的免疫治疗方法。

目的 探究比索洛尔联合胺碘酮对冠心病合并心律失常的治疗效果。方法 Puromycin分子式80例冠心病合并心律失常患者,随机分为对照组与观察组,每组40例。对照组患者采用胺碘酮治疗,观察组患者采用比索洛尔联合胺碘酮治疗。比较两组患者治疗前后的心功能指标[心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF)以及左心室收缩末期内径(LVESD)]和临床疗效。结果 治Impoverishment by medical expenses疗前,两组患者的LVEF、LVESD、CO比较差异均无统计学意义(P>0.05)；治疗后,观察组患者的LVEF(41.32±11.20)%、CO(4.42±0.72)L/min均高于对照组的(30.62±7.69)%、(4.01±0.83)L/min, LVESD(40.23±9.62)mm小于对照组的(49.36±9.11)mm,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的临床总有效率为97.50%,高于对照组的72.50%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 比索洛尔ABT-263临床试验联合胺碘酮治疗冠心病合并心律失常可改善患者心功能,提高临床疗效,值得推荐。

研究背景及目的癌症已经发展成为威胁全球人类健康的首要因素,其中,白血病在2022年全球范围内的预计新发病例和预计死亡病例都位于前十位,并且白血病是一种最主要的儿童癌症,约占新诊断儿童癌症的28%,严重威胁成人和青少年健康。随着靶向治疗药物的使用,白血病患者的5年生存率得到大幅度提升,但是对于如何及时发现和诊断白血Y-27632浓度病仍然是一个薄弱环节,因此需要寻找并开发更多有效的生物标记物来帮助白血病的预防与诊断。单核苷酸多态性(SNP)位点在癌症风险预测、诊断、治疗等过程中有重要潜力,全基因组关联研究(GWAS)已经确定了数百个与白血病风险相关的SNP。然而,这些疾病易感性的遗传变异大多集中在基因非编码区,由于这些非编码变异不直接影响基因编码,使得阐明它们在疾病发生和发展中的调控机制尤其具有挑战性。同时由于白血病相关的细胞大多为悬浮生长细胞系,基因递送效率也成为了其体外功能研究的限制因素。因此绝大数的白血病风险相关SNP的生物学功能和致病机制尚不明确。本课题研究的主要目的是通过一种高效的并行报告基因分析系统筛选鉴定具有潜在基因调控活性的白血病风险相关SNP,并深入探究这些功能性风险位点导致疾病易感性的机制,提供功能性白血病风险位点细致的基因功能注释,为白血病的诊断和治疗提供潜在的生物标记物,也为其在临床治疗中的应用提供有力的证据支持。同时,为了解决白血病细胞系转染效率低的问题,我们开发了基于膜锚定亲和分选标签的细胞分选系统,可有效促进白血病细胞的基因功能研究。研究结果1.并行报告基因分析鉴定多个功能性白血病风险SNP位点我们在白血病细胞系K-562细胞中对226个白血病GWAS SNP的等位基因进行了 DiR-seq报告基因分析,从226个标签SNP中筛选出85个具有显著等位PLX3397供应商基因差异的基因调节性SNP位点。在较为显著的55个调控SNP位点中,16个SNP的风险等位基因的转录活性低于参考等位基因,39个SNP的风险等位基因的转录活性高于参考等位基因。为了阐明功能性SNP导致白血病遗传易感性的生物学基础,我们结合基因组学和表观遗传组学数据,评估了白血病细胞系中风险SNP所在区域的染色质开放状态(FAIRE-seq)、可及性(ATAC-seq和DNase-seq)和组蛋白修饰状态(H3K4me1,H3K4me3 和 H3K27ac ChIP-seq),并在 K-562细胞中通过FAIRE-qPCR实验进行了验证,选出rs1388941和rs68586medical waste98进行系统的功能和机制研究。2.基因调节性SNP rs1388941导致白血病风险的机制针对功能性SNP rs1388941,我们在K-562细胞中通过DiR-qPCR分析和双荧光素酶报告基因分析,发现风险等位基因G能够显著上调增强子活性。基于ChIP-seq、DNase-seq、FAIRE-seq 和 ATAC-seq 的多组学分析以及使用 ChIP-DNA和FAIRE-DNA进行的qPCR和Sanger测序分析表明,该SNP突变显著重塑了染色质结构和修饰状态,G等位基因比A等位基因具有更高的染色质活性。转录因子计算机预测发现该SNP位点区域是一个典型的FLI1转录因子结合位点,且对风险G等位基因有更高的选择性。我们使用GTEx数据库进行了 eQTL分析并在白血病细胞中进行了 CRISPRa和CRISPRi实验,确定CSGALNA CT1为rs1388941调控的靶基因。同时,在rs1388941基因组编辑的K-562单克隆细胞中,该位点区域的缺失会显著降低染色质的开放程度,大幅下调CSGALNACT1基因的表达水平,并能显著抑制细胞的增殖能力。进一步,我们还发现CSGALNACT1基因的过表达会增强转录因子STAT5的活性,并能上调CyclinD1基因的表达,促进细胞增殖。在本小节研究中,我们阐明了功能性SNP位点rs1388941的风险等位基因G通过增强转录因子FLI1的结合驱动下游基因CSGALNA CT1上调,促进细胞周期蛋白表达,加速细胞周期进程,进而介导8p21基因座白血病风险的一种可能的机制。3.基因调节性SNP rs6858698导致白血病风险的机制对于白血病风险相关SNP rs6858698,我们通过报告基因分析实验进一步确认风险等位基因C的增强子活性显著高于参考等位基因G。同时,ChIP-qPCR和FAIRE-qPCR分析与表观遗传组学数据都表明,rs6858698位于一个染色质开放活性增强子区域。进一步对Jurkat细胞ATAC-seq数据进行footprint分析并结合JASPR数据库预测,我们发现rs6858698位点参考等位基因G突变成风险等位基因C后形成了一个保守的E2F1结合基序,ChIP分析也表明E2F1能够与该位点区域结合。进一步,我们通过CRISPRa和CRISPRi实验分析确定CAMK2D为rs6858698位点调控的靶基因。并且,使用数据库TCGA和GTEx中的临床样本分析表明,白血病样本组织中CAMK2D表达水平明显高于正常组织。值得注意的是,在白血病患者中CAMK2D基因高表达与患者较低的总体生存率显著相关,提示CAMK2D与白血病的不良预后有关。进一步的报告基因分析实验表明,CAMK2D可能通过上调STAT5和NF-κB活性,影响下游Bcl-2、PIM-1、CAT、GLRX、c-FOS、c-Myc和c-IAP等众多靶基因的表达,参与细胞增殖、凋亡、分化和氧化应激等生理过程,从而促进白血病的发生发展。我们的结果系统地证明了 rs6858698位点风险等位基因C通过增强E2F1的结合,上调CAMK2D的表达,影响下游多条信号通路,增加疾病风险的机制。4.基于膜锚定亲和标签的基因转染阳性细胞分选系统对于获得的疾病相关基因进行体外致病功能研究时,基因递送效率成为白血病相关基因功能研究的重要限制因素。为了解决悬浮白血病细胞等难以转染细胞中的低转染效率制约基因功能研究的问题,我们开发了一种可以高效富集转染阳性细胞的亲和细胞分选系统。该系统使用带有亲和标签Twin-Strep-Tag(TST)的膜定位EGFP荧光蛋白作为质粒标记,在转染阳性细胞中可表达该荧光亲和分选标签并展示在细胞表面,基于亲和标签和配体之间的高亲合性,用配体偶联的磁珠即可实现转染阳性细胞的高效分离,并且分选标签中的荧光蛋白使阳性细胞易于通过荧光显微镜进行观察和通过流式细胞分析进行定量,便于评估分选前后样品中阳性细胞的比例。我们对比分析了 6种膜定位信号序列将分选标签靶向到细胞膜的能力,包括TST-EGFP-GPIBY55,TST-EGFP-GPIDAF,TST-EGFP-GPICEAM7 等三种糖基磷脂酰肌醇(GPI)变体和 TST-EGFP-TMITB3,TST-EGFP-TMITA5,TST-EGFP-TMITAV 等三种跨膜结构域(TMD)变体。激光扫描共聚焦显微镜观察分析表明,在Lenti-X 293T细胞中6种分选标签变体都能高水平的表达并展示到细胞膜上。并且,在K-562,Lenti-X293T和22Rv1三个细胞系中,均可以用Strep-Tatin偶联磁珠实现转染阳性细胞的高效分选和富集,其中,GPI膜锚定类型的分选标签表现出了优于TMD类型标签的性能,在K-562细胞中,亲和分选可以使阳性细胞比例从16%提高到95%,而根据EGFP RNA水平确定的富集倍数更是高达10倍以上。进一步,我们使用TST-EGFP-GPIBY55分选标签构建了基因过表达,shRNA基因敲低和CRISPR/Cas9基因组编辑实验的载体,分别转染K-562细胞,亲和分选之后测定目标基因的变化。结果显示,在基因过表达实验中,亲和分选富集的细胞中基因过表达倍数从10倍提高到了 58倍;在shRNA基因敲除实验中,分选富集的细胞中基因敲除效率从12%提高到53%;CRISPR/Cas9基因组编辑实验中分选富集的细胞表现出了更显著的基因编辑,indel百分比从20%增加到79%。总之,我们的新型转染阳性细胞亲和分选系统可极大提高转染阳性细胞的比例,有效的促进基因功能研究。研究结论本课题基于二代测序技术使用一种高效的并行报告基因分析系统,结合全基因组染色质活性分析高通量测序数据,分析鉴定出55个具有潜在基因调控活性的白血病风险相关SNP,并深入探究了 2个功能性风险位点rs1388941和rs6858698导致疾病易感性的机制。我们通过一系列分子、细胞水平的实验阐明了功能性白血病风险遗传变异的潜在生物学功能和机制。其中rs1388941风险等位基因G特异性结合转录因子FLI1,促进位点区域染色质开放,并上调CSGALNACT1基因表达,提高STAT5信号通路活性,促进下游CyclinD1基因的表达,影响细胞增殖,从而揭示了该位点在白血病发展中可能的致病机制。另外,rs6858698 SNP的参考等位基因G突变成风险等位基因C形成一个保守的E2F1结合基序,通过增强E2F1染色质结合驱动CAMK2D基因表达,上调STAT5和NF-κB信号通路活性,影响下游众多靶基因表达,参与细胞增殖、凋亡、细胞分化和氧化应激等生理过程,从而影响白血病的发生发展。我们的研究结果对于理解癌症遗传易感的机制具有重要的意义,为功能性白血病风险位点提供了细致的基因功能注释,为白血病的诊断和治疗提供潜在的生物标记物,也为其在临床治疗中的应用提供有力的证据支持。同时,为了克服悬浮白血病细胞转染效率低的问题,我们开发了基于膜锚定亲和分选标签的细胞分选系统来富集转染阳性细胞,可简单、高效地提高分选后细胞中的转染阳性细胞比例。为在白血病细胞系进行shRNA基因敲低以及CRISPR/Cas9基因组编辑分选细胞单克隆等实验高效地富集转染阳性细胞,促进了难转染细胞系中的基因功能研究。