RAF信号通路

背景:慢性髓系白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)是一种克隆性骨髓增殖性肿瘤,其特征是9号和22号染色体易位t(9:22)(q34:q11),Barasertib价格并形成BCR/ABL融合基因。BCR/ABL融合基因编码的BCR/ABL融合蛋白具有组成型酪氨酸激酶活性,激活下游一系列的信号通路,从而促进CML细胞增殖。伊马替尼(Imatinib,IM)等酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKIs)的问世,极大地改善了CML患者的生存和预后。然而,随着临床上TKI的广泛应用,部分患者却出现了治疗效果不佳和耐药现象,因此探索CML进展的具体机制和新的治疗靶点具有重要意义。脯氨酸代谢在肿瘤代谢重编程中起重要作用,并与肿瘤细胞中ATP、蛋白质和核苷酸的合成以及氧化还原稳态有关。吡咯啉-5-羧酸还原酶1(Pyrroline-5-carboxylate reductase,PYCR1)作为脯氨酸生物合成重要的关键酶,与多种实体肿瘤的进展密切相关,已被认为是抗癌药物开发的潜在靶点,但是PYCR1在CML中的研究尚未见报道。目的:本研究旨在探究PYCR1对CML细胞生物学表型的影响及其作用的机制,为探索CML治疗的新靶点、新思路提供理论和实验基础。方法:1.采用生物信息学方法分析GEO、TCGA等数据库CML细胞中PYCR1的表达水平,然后收集临床样本分离单个核细胞,通过RT-q PCR检测PYCR1 m RNA的实际表达水平。2.通过慢病毒转染技术,构建沉默和过表达PYCR1的CML细胞稳转株;采用RT-q PCR和Western blot检测转染的效果;通过CCK-8、流式细胞术、Transwell、细胞毒实验检测沉默和过表达PYCR1对CML细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移、伊马替尼敏感性的影响。3.采用Western blot检测沉默PYCR1对BCR-ABL通路的影响;通过RNA-seq筛选沉默PYCR1后的差异表达基因和影响的相关通路;进一步通过RT-q PCR验证RNA-seq中所鉴定相关通路的基因表达水平;最后利用流式细immune-checkpoint inhibitor胞术检测沉默PYCR1对CML细胞线粒体ROS水平的影响。结果:1.GEO数据库分析结果表明,PYCR1在健康人、CML慢性期和CML急变期的表达依次上调,且在CML患者骨髓干、祖细胞中的表达显著高于正常人。在TCGA数据库中的泛癌分析也显示PYCR1在大多数肿瘤中高表达;进一步临床样本验证CML病人中的PYCR1 m RNA的表达,结果显示PYCR1呈现高表达的水平。2.成功构建沉默和过表达PYCR1的CML细胞稳转株。沉默PYCR1可抑制CML细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡、细胞周期阻滞于G1期,并增强CML细胞对伊马替尼的敏感性;过表达PYCR1可促进CML细胞增殖、迁移和细胞周期G1期向S期的转变,抑制CML细胞凋亡和对伊马替尼的敏感性。3.沉默PYCR1可抑制BCR-ABL及其下游的Stat5、Crkl信号通路。转录组测序分析发现,沉默PYCRIACS-0107591可抑制CML细胞中三羧酸循环、氧化磷酸化等线粒体能量代谢通路,并诱导线粒体ROS水平升高。结论:PYCR1在CML中高表达,并且促进了CML细胞的增殖、迁移,抑制了CML细胞的凋亡和对伊马替尼的敏感性。抑制PYCR1的表达,可通过下调BCR-ABL下游信号通路、破坏线粒体能量代谢、诱导线粒体ROS水平升高等机制诱导CML细胞的凋亡,从而抑制CML的恶性表型。

目的 探讨自我效能理论指Immediate Kangaroo Mother Care (iKMC)导的护理干预在高血压心力衰竭患者中的应用效果。方法 选取2018年11月至2019年10月漯河医学高等专科学校第二附属医院收治的68例高血压心力衰竭患者为研究组，另选取2017年11月至2018年10月收治的65例高血压心力衰竭患者为对照组。对照组采用常规护理，研究组在对照组基础上采用自我效能理论指导的护理干预。比较两组护理前、护理后负性情绪[汉密尔顿抑郁量表（Hamilton depression scale,HAMD）、汉密尔顿焦虑量表（Hamilton anxiety scale,HAMA）]、健康促进生活方式量表Ⅱ（health promoting lifestyle profile-Ⅱ，HPLPⅡ）评分、一般自我效能量表（general self-efficacy scale,GSES）评分、自我护理能力测定量表（exercise of self-care agency scale,ESCA）评分、明尼苏达心力衰竭生活质量量表（minnesota living with heart failure questionnaire,MLHFQ）评分、护理满意度。结果 护理前，两组HAMD、HAMA、HPLPⅡ各维度、GSES、ESCA、MLHFQ评分比较，差异无统计学意义（P>0.05），护理后，两组HAMD、HAMA评分均较护理前明显下降，HPLPⅡ各维度、GSES、ESCA、MLHFQ评分均较护理前显著升高，且研究组HAMD、HAMA评分均低于对照组，HPLPⅡ各维度、GSES、ESCA、MLHFQ评分高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。研究组护理满意度为97.06%(66/68)，高于对照组的81.54%(53/65)，差异有统计学意义（P<0.05）。GSK1120212体内结论 自我效能理论指导的护理干预在高血压心力衰竭患者中的应用效果显著，在改善其负性情绪，保持健康行为，提升其自我效能、自护能力selleck及生活质量等方面均有积极作用，护理满意度较高。

目的 探讨lncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过调节自噬对胃癌细胞活性及血管生成的机制研究。方法 将胃癌SCG-823细胞分为Control组、si-NC组、si-SNHG15组、miR-NC组、miR-123组、pcDNAPAK5组。RT-PCR检测细胞中SNHG15和miR-123表达；MTT法检测细胞增殖能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力；流式细胞仪检测细胞凋亡能力；Matrigel体外成管实验检测细胞血管生成能力；蛋白质印迹检测细胞中PAK5、VEGGSK1120212小鼠F、LC3、Beclin1、p62蛋白表达；双荧光素酶报告基因检验SNHG15和miR-123、miR-123和PAK5的靶向关系。结果 与人胃黏膜细胞系GES-1相比，人胃癌细胞系中ASG、MKN-45、SHepatoportal sclerosisCG-823细胞中SNHG15表达明显升高，miR-123表达明显降低（P<0.05）；且SCG-823细胞中SNHG15表达明显高于ASG、MKN-45细胞，miR-123表达明显低于ASG、MKN-45细胞（P<0.05）。si-SNHG15组细胞增殖CH-223191、侵袭及形成小管数量均明显低于Control组，细胞凋亡率高于Control组（P<0.05）;si-SNHG15组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显低于Control组，LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显高于Control组（P<0.05）。与miR-NC组相比，miR-123组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显降低，细胞凋亡率明显增加（P<0.05）;miR-123组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显低于miR-NC组组，LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显高于miRNC组（P<0.05）。通过向细胞中分别转染野生型SNHG15(SNHG15-WT)、PAK5(SNHG15-WT)时，miR-123组荧光素酶活性均明显低于miR-NC组（P<0.05）。与si-SNHG15组相比，pcDNA-PAK5组细胞细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显升高，细胞凋亡率明显降低（P<0.05）;pcDNA-PAK5组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显高于si-SNHG15组，LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显低于si-SNHG15组（P<0.05）。结论 lncRNA SNHG15可靶向miR-123/PAK5轴抑制胃癌细胞增殖、侵袭和血管生成，促进胃癌细胞凋亡和自噬，进而为调控自噬途径治疗胃癌提供新的思路。

目的我国多地微囊藻毒素污染超过WHO限值,其中微囊藻毒mechanical infection of plant素-LR(microcystins-LR,MC-LR)是最常见的类型。前期研究结果发现MC-LR暴露会降低精子质量,但其具体机制尚未阐明。本研究试图阐明ROS介导的SIRT6泛素化降解在MC-LR致小鼠精原细胞增殖阻滞中的作用。材料与方法本研究将24只4周龄ICR雄鼠随机分为对照和处理组,分别通过腹腔注射连续28天暴露生理盐水或MC-LR(2μg/kg),取右侧附睾精子计数,同时检测睾丸组织增殖指标PCNA、DNA损伤标志γH2AX及SIRT6的表达水平。体外采用GC-1细胞系建立体外MC-LR(5μM)暴露模型,检测PCNA、γH2AX及SIRT6的表达水平,流式细胞数检测细胞周期和细胞内ROS水平,免疫共沉淀检测SIRT6和USP10的相互作用及SIRT6的泛素化水平。此外,使用抗氧化剂NAC和蛋白酶体抑制剂MG132验证ROS介导的SIRT6泛素化降解在MC-LR致小鼠精原细胞增殖阻滞中的作用。结果与对照组相比,MC-LR暴露降低小鼠精子数量,损伤生精小管发育。免疫组化和WB检测结果表明MC-LR可以在睾丸组织和GC-1细胞中蓄积,MC-LR暴露抑制睾丸精原细胞和GC-1细胞的增殖。流式细胞数结果显示,MC-LR暴露会使GC-1细胞周期阻滞于G2/M期,WB结果也显示相关周期蛋白表达明显降低。相比对照组,体内外暴露MC-LR引起小鼠睾丸和GC-1细胞DNA损伤标志γH2AX水平明显升高。同时,研究发现MC-LR暴露降低睾丸GSK1120212配制和GC-1细胞SIRT6的水平,使GC-1细胞ROS水平升高,引起氧化应激。免疫共沉淀结果表明,MC-LR暴露使USP10与SIRT6相互作用减弱。随后发现,NAEmpagliflozin试剂C干预后能够缓解PCNA的降低。结论综上所述,本研究结合动物实验和体外细胞实验,阐明MC-LR可能诱导睾丸精原细胞产生过量ROS,抑制USP10与SIRT6相互作用导致SIRT6泛素化降解增加,致精原细胞DNA损伤,引起细胞周期阻滞,抑制精原细胞的增殖,最终导致精子数量的降低。

目的：比较控制点数量对右侧乳腺癌术后容积旋转调强放疗（volumetric modulated arc therapy,VMAT）计RP56976分子式划的剂量学影响。方法：选取15例右侧乳腺癌术后患者，利用Monaco 5.1计划系统进行计划靶区（planning target volume,PTV）勾画和计划设计。将控制点数量分别设置为20、3LGX818作用0、40、50、60，在同等优化条件下，比较不同控制点计划目标靶区和危及器官的剂量学差异。采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果：随着控制点数量的增加，靶区的适形性指数逐渐增大（分别为0.59±0.07、0.67±0.06、0.70±0.06、0.71Tooth biomarker±0.08、0.70±0.08）且差异有统计学意义（P=0.00），均匀性指数也逐渐增大（分别为1.23±0.10、1.11±0.03、1.09±0.02、1.07±0.02、1.08±0.02）且差异具有统计学意义（P=0.00）。当控制点数量低于30时，右肺V5更小但是靶区剂量覆盖较差（P<0.05）；当控制点数量设置为50时，目标靶区均匀性指数和适形性指数最优；当控制点数量大于50时，目标靶区适形性指数和均匀性指数开始变差。所有计划危及器官剂量均能达到临床限制要求。结论：设计右侧乳腺癌术后VMAT计划时，单弧最大控制点数量推荐使用50，若临床上对特定患者肺组织低剂量照射区有保护需求，可以选择适当减少控制点数量进行剂量优化。

目的:分析福州市2018年恶性肿瘤发病和死亡情况，为恶性肿瘤防治提供理论依据。方法:收集和评价福州市2018年恶性肿瘤发病和死亡资料，结合2018年福州市户籍人口数，计算福州市恶性肿瘤发病和死亡的粗率、selleck PF-02341066中国人口标化率(中标率)、世界人口标化率(世标率)、构成比和0～74岁累积率等，分析主要恶性肿瘤发病和Transgenerational immune priming死亡顺位。结果:2018年福州市恶性肿瘤发病率为288.36/10万，中标率为196.53/10万，世标率为190.15/10万，0～74岁累积率为21.91%。全市恶性肿瘤死亡率为160.72/10万，中标率为98.02/10万，世标率为96.55/10万，0～74岁累积率为11.10%。肺癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌、甲状腺癌为福州市最常见恶性肿瘤，男性发病前五位恶性肿瘤是肺癌、胃癌、肝癌、结直肠癌、甲状腺癌，女性是肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、结直肠癌、胃癌。结论:2018年福州市恶性肿瘤发病率和死亡率与福建省水平相当，胃癌的发病顺位高于福建省，肝癌和食管癌的顺位低于PR-171供应商福建省。肺癌、女性乳腺癌、胃癌是福州市最主要的恶性肿瘤，是福州市防控的重点。

目的 分析2018—2020年湘潭市2所高校教职员工高血压、糖尿病、血脂异常患病率及高血压、糖尿病控制率动态变化情况。方法 收集湘潭市2所高校教职员工2018—2020年健康体检的部分数据（血压、血糖、血脂）进行回顾性分析，了解2所高校教职员工高血压、糖尿病、血脂异常的患病率、控制率、共患率及其趋势。结果 14 062名受检者中，高血压、糖尿病、血脂异常患病率分别为33.2%、9.8%、35.0%，高血压、糖尿病控制率分别为12.2%、9.0%。高血压和糖尿病患病率随年龄增长呈上升趋势（χ_高~2=2 654.010，χ_糖~2=1 074.664,P<0.05），其控制率随年龄增长逐渐上升（χ_高~2=2 654.010，χ_糖~2=1 074.664,P<0.05），男性高血压、糖尿病、血脂异常寻找更多患病率均高于女性（P均<0.05);2018—2020年糖尿病、血脂异常患病率呈上升趋势，糖尿病控制率呈下降趋势（χ~2_(糖Ras抑制剂患)=24.077，χ~2_(血患)=9.036，χ~2_(糖控)=9.737,P<0.05）；一种、双重、三重慢性病的患病率分别为54.1%、20.5%、3.4%，且2018—2020年总体呈上升趋势（χ~2_(一种)=6.493，χ~2_(双重)=12.141，χ~2_(三重)=13.195,P<0.05），高血压、糖尿病和糖尿病、血脂异常共患率呈上升趋势（χ~2_(共高糖)=12.335，χ~2_(共糖血)=20.046,Plant-microorganism combined remediationP<0.05）。结论 湘潭市高校教职员工高血压、糖尿病、血脂异常患病率较高，且呈逐年上升趋势，控制率低。

目的 探讨敲除钾电压门控通道亚家族Q成员1(potassium voltage-gated channel subfamily Q member _1,Kcnq1)对大鼠左心室结构和功能及甲状腺功能的影响。方法 利用CRISPR/Cas9技术对大鼠的Kcnq1基因进行定点插入突变,构建Kcnq1纯合敲除大鼠模型。利用小动物超声成像系统检测大鼠的左心室结构和功能的变化。采用Power Lab测定大鼠心电图。通过ELISA检测Kcnq1敲除后大鼠血清中促甲状腺激素(thyrotropin,TSH)、游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT_3)和游离甲状腺素(free thyroxine,FT_4)的含量变化。通过腹腔注射左旋甲状腺素(levothyroxine,L-T_4),观察L-T_4替代治疗对Kcnq1~(-/-)大鼠的治疗作用。结果 超声成像检测结果表明,9月龄Kcnq1~(-/-)大鼠收缩末期室间隔厚度和左心室后壁厚度均显著减点击此处小(P<0.05);左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积显著增大(P<0.05);左心室射血分数和缩短分数显著下降(P<0.01)。心电图结果显示,Kcnq1~(-/-)大鼠QT间期延长,并伴有心率减慢。ELISA结果表明,Kcnq1~(-/-)大鼠血清中FT_4和FT_3含量均明显降低(P<0.05),TSH的水平未明显变化。Kcnq1~(-/-)大鼠腹腔注射L-T_4替代治疗两周后,与野生型相比,左心室后壁厚度显著增加(P<0.05);左心室收缩末期内径显著降低(P<0.05)BLZ945化学结构;左心室射血分数和缩短分数有所增加;同时,Kcnq1~(-/-)大鼠的QT间期缩短,血清中FT_3和FT_4的水平增加。结论 Kcnq1基因的敲除引起大鼠左心室功能的Immunochemicals减弱和QT间期延长,并且其甲状腺功能减退;进行L-T_4替代治疗后,能一定程度改善大鼠左心室的功能。

目的 探讨半夏白术天麻汤加减在原发性高血压病痰湿中阻证中的治疗效果。方法 采用前瞻性随机试验方法，选择2019年1月—2019年12月黄河中心医院收治的120例原发性高血压痰湿中阻证患者，依据随机数字表法分为两组各60例。对照组采用常规西药治疗，观察组在此基础上予以半夏白术天麻汤加减治疗，两组均治疗1个月，比较两组治疗前后的血压水平，治疗后的治疗效果、血压水平(收缩压[SBP]、舒张压[DBP])、血管内皮功能(内皮素-1[ET-1]、一氧化氮[NO])及炎症指标(C反应蛋白[CRP]、白细胞介素-6[IL-6]);记录并比较两组治疗期间不良反应发生率。结果 治疗后，对照组治疗总有效率较观察组低(P<0.05);治疗后，两组SBP、DBP水平均较治疗前低，且观察组SBP、DBP水平均低于对照组(P<0.05);治疗后，两组ET-1、CRP、IL-6低于治疗前，NO高于治疗前，观察组ET-1、CRP、IL-6低于对照组，NO高于对照组(P<0.05)Pexidartinib研究购买;两组组治疗期间不良反应发生率比较无差异(Padvance meditation>0.05)。结论 半夏白术天麻汤加减治疗原发性高血压病痰湿中阻证，能有效降低血压水平，改善血管内皮功能，降低炎症反应，提LY294002体内升治疗效果，安全性较好。

目的：探讨天然冰片（NB）增强人乳腺癌T47D细胞对他莫昔芬（TAM）的敏感性及其机制。方法：以6.25～800μmol/L梯度浓度的NB与20μmol/L TAM联合作用于体外培养的T47D细胞，处理时间为24 h,MTT实验检测细胞活力并计算TAM的半数抑制浓度（IC50），集落形成实验测定细胞集落形成率，以评估NB对TAM的增敏效应，并以流式细胞术检测NB联用TAM条件下细胞周期分布和凋亡率的变化。20μmol/L TAM与400μmol/L NB联合作用于T47D细胞24 h，以流式细胞术检测线粒体膜电位（MMP）和细胞活性氧（ROS）水平；比色法检测胞内谷胱甘肽（GSH）浓度；Western blot法检测铁死亡相关PLX5622分子量蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)、胱氨酸/谷氨酸反向转运体（xMediation effectCT）和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达水平，以评估NB联合TAM是否引起T47D细胞铁死亡。以ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）或铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)进行预处理，MTT实验检测细胞活Bafilomycin A1作用力并计算TAM的IC50，评估主动干扰铁死亡是否影响NB增强TAM的细胞杀伤作用。结果：（1）联用NB可促进TAM对T47D细胞的杀伤作用：NB(200和400μmol/L)与TAM联用导致TAM对T47D细胞的IC50降低（P<0.01）；细胞集落形成率受到抑制（P<0.01）;400μmol/L NB联合20μmol/L TAM可诱导T47D产生细胞周期S期阻滞（P<0.05）和增加细胞凋亡（P<0.01），晚期凋亡细胞占凋亡细胞的（78.0±6.8）%，而早期凋亡细胞仅占（22.0±6.8）%。（2）400μmol/L NB联合20μmol/L TAM触发T47D细胞铁死亡，表现为ROS积累增加（P<0.01）、MMP降低（P<0.01）、GSH浓度降低（P<0.01）以及铁死亡相关蛋白Nrf2、xCT和GPX4表达下调（P<0.05）。（3）1μmol/L NAC及1μmol/L Fer-1均可逆转NB联合TAM诱导的T47D细胞增殖抑制（P<0.01）。结论：NB联合TAM通过触发T47D细胞铁死亡的机制，增强TAM对人乳腺癌T47D细胞的杀伤作用。