RAF信号通路

骨质疏松症(osteoporosis, OP)是一种常见的全身代谢性疾病，是造成骨折的主要原因之一，其发病机制较为复杂，不同原因引起的OP涉及了Nucleic Acid Analysis体内多种代谢途径的紊乱，近年来随着代谢组学在中医药治疗OP过程中的不断研究，发现脂代谢紊乱会抑制骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stemcells, BMSCs)向成骨细胞(osteoblast, OB)增殖分化，促进造血干细胞(stem cell, SC)向破骨细胞(osteoporosis, OC)的分化。其中，脂质异常聚集、炎症反应、氧化应激、氧化脂质、对氧磷酶(paraoxonase, PON)等因素对OB的增殖及分化具有负向调控作用，同时，脂代谢紊乱会使白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)等炎症因子的表达上调，产生氧化应激与炎症反应，导致OC分化及增殖和骨吸收加剧。近年来，中医药在预防和治疗OP方面的研究也逐渐增多，其疗效也得到了普遍认可，有诸多研究发现中药有效成分和中药复方可以通过靶向信号分子调控脂代谢的过程来影响OB和OC的分化，在纠正骨代谢失衡方面潜力巨大。因此，通过调控脂代谢相关靶点通路来预防和治疗OP已成为了当下研究热点，现通过对中医药防治OP的作用机制及相关靶点方面的Bafilomycin A1分子量研究进行整理，总结了中医药通过调控脂代谢关键LGK-974因子来治疗OP的部分机制，旨在为中医药防治OP的深入研究提供参考依据。

背景:牙周炎是以菌斑为始动因子,发生于牙齿支持组织的慢性炎症性疾病,其特点是牙槽骨慢性进行性的破坏,并可导致成年人牙齿丧失,影响人类的口腔健康。大量研究表AMG510体内实验剂量明牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)是慢性牙周炎活动性病变区最主要的优势菌,与牙周炎的发生发展密切相关。牙周免疫细胞在P.g及其毒力因子脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的刺激下活化,通过“呼吸爆发”释放过量的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)杀灭细菌。但过量分泌的ROS会对自身及周围组织细胞内脂质、DNA及蛋白质造成损伤。目前牙周炎的治疗药物主要包括硝基咪唑类及四环素类抗菌药物,但长期应用抗生素存在引起不良反应,产生耐药菌株导致菌群失调的缺点。而传统中药姜黄素不仅能发挥抑菌作用,还具有调控炎症、改善氧化应激状态和抑制细胞发生凋亡等多种生物学活性,被认为是一种有效的治疗牙周炎的天然化合物。目前,姜黄素通过抑制铁死亡从而改善组织损伤的研究受到关注,这种药理作用可能与姜黄素的抗氧化作用有关。铁死亡是一种由脂质ROS引起细胞膜结构破坏而导致细胞死亡的新型死亡方式,主要特征包括线粒体皱缩、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)耗竭以及脂质过氧化产物异常蓄积等。脂质过氧化物的异常积聚不仅是铁死亡发生的直接原因,还与牙周炎密切相关。有研究表明,牙周炎患者的血浆及唾液中都含有较高的脂质过氧化物。在小鼠牙周炎模型上发现其牙龈组织有铁死亡相关基因的变化,且该变化可被铁死亡抑制剂Fer-1逆转,对牙周炎发生发展过程中铁死亡的调控可能为改善牙周炎炎症反应提供新的治疗策略。鉴于此,本实验拟通过建立丝线结genetic fingerprint扎诱导的小鼠牙周炎模型及P.g-LPS刺激RAW264.7的体外炎症模型,采用分子生物学、免疫组织化学等多种手段,观察和检测姜黄素对牙周炎发生发展的作用是否经由了铁死亡相关的信号通路,进而探究姜黄素是否经由抑制铁死亡减轻牙周炎炎症反应的机制。方法:(1)体内实验用丝线结扎诱导小鼠牙周炎,通过检测小鼠血浆超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)的酶活力,评估全身氧化应激状态;制作小鼠牙龈组织石蜡切片进行HE染色以比较牙龈上皮的炎症浸润程度;提取牙龈及颌骨组织的RNA和蛋白质,从基因及蛋白两方面进行溶质载体家族7成员11(Solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)及谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)的检测,同时对牙龈组织切片进行免疫组化染色,验证SLC7A11及GPX4表达情况;按照不同方法制作牙龈组织及牙槽骨组织匀浆以检测GSH、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,评价姜黄素对铁死亡分子标志物的影响。(2)体外实验采用P.g-LPS刺激RAW264.7,通过观察线粒体形貌,线粒体膜电位及线粒体ROS水平,证明姜黄素可维持线粒体形态稳定和功能正常;采用DCFH-DA探针检测ROS水平,评价姜黄素对细胞总ROS的清除作用;通过乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)释放,Calcein/PI细胞毒性检测及Annexin V-FITC细胞凋亡检测实验,证明姜黄素具有保护细胞的作用;检selleck激酶抑制剂测抑制铁死亡的通路蛋白SLC7A11及GPX4的表达水平,证实姜黄素可通过调控SLC7A11/GPX4轴发挥抑制铁死亡作用;通过检测抗氧化物GSH水平及脂质过氧化物MDA的积累,证明姜黄素促进脂质过氧化的清除,提高细胞对铁死亡的抵御能力。结果:(1)体内研究结果表明不同浓度的姜黄素可提高血清SOD酶活力,改善牙龈组织炎症浸润,上调SLC7A11及GPX4表达,提高牙龈及牙槽骨GSH含量,降低MDA累积。证实姜黄素可通过调控SLC7A11/GPX4轴抑制铁死亡,增高牙周组织内抗氧化物GSH含量,减少MDA积累,达到改善牙周炎炎症反应的作用。(2)体外研究结果表明不同浓度的姜黄素可改善线粒体形貌,提高线粒体膜电位,降低线粒体ROS及细胞总ROS水平,降低细胞的死亡率,提高SLC7A11及GPX4的表达,增高炎症细胞内GSH的含量,降低胞内MDA的异常累积。增强细胞的抗氧化能力。表明姜黄素可通过调控SLC7A11/GPX4轴抑制P.g-LPS刺激下RWA264.7的铁死亡现象。结论:(1)姜黄素对实验性小鼠牙周炎炎症具有调控作用,可减少牙周组织局部炎性浸润,保护牙周组织。(2)姜黄素通过调控SLC7A11/GPX4通路抑制牙周炎脂质过氧化物累积,进而保护牙龈及牙槽骨组织细胞。(3)姜黄素可维持炎症状态下RAW264.7细胞内线粒体形态稳定和功能正常,发挥对细胞的保护作用。(4)姜黄素影响巨噬细胞内铁死亡相关基因SLC7A11及GPX4的表达,推断姜黄素减轻牙周炎炎症的机制是通过调控SLC7A11/GPX4轴抑制细胞铁死亡现象实现的。

研究目的:Notch信号通路由4种受体、5种配体和下游靶基因组成,具有调控细胞增殖、分化和凋亡的功能。Notch1-4受体为跨膜蛋白,结构高度相似,但功能不同,有关运动对Notch1-4受体的影响还未见文献报道,故本研究通过有氧运动和抗阻运动对大鼠肾脏和骨骼肌中Notch1-4受体表达的影响,分析不同运动模式下Notch1-4受体的可能生物学机制,为运动模式下Notch信号通路的各途径研究,筛选出具有蛋白表达信号的受体。研究方法:本研究得到了成都体育学院伦理委员会批准,批准号为[2022]58号。(1)将24只雄性SD大鼠随机分为对照组(C组,n=8)、有氧训练组(AE组,n=8)和抗阻训练组(RE组,n=8)。(2)有氧运动干预方案:3天跑台适应性训练后,进入正式运动干预。第1天跑台坡度0°,速度16m/min、时间5min;第2天与第3天,坡度与速度不变,时间分别为10min、15min;3天后,大鼠以20m/min、60min/d、5d/w的强度进行训练,共计8周。抗阻运动干预方案:适应性无负重爬梯训练3天后,在尾部负重递增负荷训练3天。之后进入正式抗阻训练,尾部分别负重50%、75%、90%、100%,每一个负重级别爬行3次,100%最大负重时,如不能完成3次者以实际运动能力为限,5d/w,共计8周。(3)8周运动干预后,分别取大鼠左肾和左股四头肌,分成2份。一份置于4%的多聚甲醛固定液中,4°冰箱保存,用于HE染色的组织学观察、免疫组化检测的定位和相对定量研究。另一份装入冷冻管中,液氮急冻后-80°冰箱保存,用于免疫印迹法的半定量研究。使用SPSS26.0软件进行统计学检验,首先进行正态分布和方差齐性检验,如符合正态分布和方差齐性,进行单因素方差分析,如不符合,则使用秩和检验。研究结果:(1)HE染色的组织形态学观察。(1)肾脏:C组未见结缔组织增生及炎性渗出;皮质区肾小球未见毛细血管基底膜增生,无变性、坏死及纤维化;肾小管结构较为完整,间质未见明显炎性浸润及纤维增生;近曲小管与远曲小管界限清晰。AE组肾脏组织未见结缔组织增生及炎性渗出;皮质与髓质分界较为清晰,其中2例皮质区肾小球轻微肿大,肾小囊腔明显变小;肾小管结构较为完整,少量肾小管上皮细胞胞质空泡化,1例少量肾小管变性坏死,见上皮细胞胞质空泡化,胞核固缩,少量上皮细胞脱落;间质未见明显炎性浸润及纤维增生;髓质集合管结构完整清晰,其他未见明显病理改变。RE组肾脏组织未见结缔组织增生及炎性渗出;皮质与髓质分界较为清晰,系膜细胞与毛细血管内皮细胞轻中度肿胀,肾小囊腔隙变窄;间质未见明显炎性浸润及纤维增生;髓质集合管结构完整清晰,其中1例皮质区肾小球轻微肿大,少量肾小管变性坏死;间质未见明显炎性浸润及纤维增生;髓质集合管结构完整清晰。(2)骨骼肌:C组肌纤维呈长圆柱状,排列整齐,肌束结构清晰,边界分明,肌纤维形态正常,细胞核呈扁圆形或椭圆形,偶见部分肌纤维胞质染色不均,无波浪样、空泡或脂肪变性,未见明显坏死;间质未见明显炎购买AZD1152-HQPA细胞浸润和增Cobimetinib NMR生。AE组肌纤维呈长圆柱状,排列整齐,肌束结构清晰,边界分明,肌纤维形态正常,其中4例局部区域部分肌纤维轻微至轻度波浪样变,未见明显坏死;间质未见明显炎细胞浸润和增生。RE组肌纤维呈长圆柱状,排列整齐,肌束结构清晰,边界分明,肌纤维形态正常,其中1例局部区域少量肌纤维轻微波浪样变,未见明显坏死;间质未见明显炎细胞浸润和增生。(2)免疫组化检测研究。(1)肾脏:Notch1-4的阳性产物分布在肾小管的上皮细胞和足细胞、近端小管和远端小管的上皮细胞中,为胞质表达;Notch1蛋白水平AE组、RE组较C组呈显著性升高(P<0.05),Notch2蛋白水平AE组、RE组较C组呈极显著性升高(P<0.01),Notch3和Notch4蛋白水平未出现显著性变化。(2)骨骼肌:Notch1-4的阳性产物分布在肌纤维的胞浆中,也为胞质表达。Notch1蛋白水平AE组、RE组较C组呈极显著性升高(P<0.01),Notch2蛋白水平AE组较C组呈极显著性升高(P<0.01);Notch3和Notch4蛋白水平未出现显著性变化;(Ocular genetics3)肾脏与骨骼肌组织比较,各指标均未出现显著性差异变化。(3)免疫印迹法研究。(1)肾脏:Notch1蛋白水平AE组较C组呈显著性升高(P<0.05)、AE组较RE组呈极显著性升高(P<0.01);Notch2蛋白水平AE组、RE组较C组呈显著性升高(P<0.05),Notch3和Notch4蛋白水平未出现显著性变化。(2)骨骼肌:Notch1蛋白水平AE组、RE组较C组呈显著性升高(P<0.05),Notch2蛋白水平AE组、RE组较C组呈极显著性升高(P<0.01),Notch3和Notch4蛋白水平未出现显著性变化。(3)肾脏与骨骼肌组织比较,各指标均未出现显著性差异变化。研究结论:(1)有氧运动和抗阻运动使肾脏和骨骼肌组织有轻度病理改变,提示为组织重塑与功能提升打下基础;(2)Notch四种受体的细胞内结构域尽管高度相似,但在不同运动模式及不同部位的信号强度均未出现同步变化,即信号强度的不一致是Notch四种受体在不同组织产生功能差异的原因之一。(3)运动干预后,Notch1和Notch2受体在肾脏和骨骼肌中表达增加,其可能性机制是参与了血管内皮细胞和骨骼肌卫星细胞的分化与增生,故在有氧和抗阻运动模式下,可筛选出Notch1和Notch2受体作为Notch信号通路中与配体结合的研究对象。

目的:甲状腺癌(thyroid cancer,TC)是最常见的内分泌系统恶性肿瘤,随着甲状腺癌总体发病率的增加,晚期甲状腺癌的发病率和死亡率均呈上升趋势。肿瘤耐药是改善晚期甲状腺癌患者预后的主要障碍。Lenvatinib是一种口服、多靶向酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI),能对不同组织学病理亚型的甲状腺癌患者发挥抗肿瘤活性,但用药不良事件的频繁发生和肿瘤耐药的出现限制了患者临床获益的最大化。BRAF作为丝裂原活化蛋Dolutegravir IC50白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号级联通路的核心组成成分,与多种药物治疗抵抗密切相关。BRAF突变是甲状腺癌中最常见的分子事件,能够激活下游的细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路,促进肿瘤发生、增殖、分化和生存,维持甲状腺癌的恶性表型。本文通过构建人甲状腺癌Lenvatinib耐药细胞系,旨在分析人甲状腺癌中Lenvatinib耐药的原因,探讨了BRAF突变调控ARNTL参与Lenvatinib耐药的机制,并寻找可能的克服Lenvatinib耐药的小分子药物,为Lenvatinib进一步的临床应用提供参考,从而改善晚期甲状腺癌患者的预后。方法:首先选取KTC-1和8505C两种人甲状腺癌细胞系,通过梯度增加持续刺激的药物浓度构建耐药细胞系。利用转录组测序及TCGA数据库生信分析可能参与耐药的分子及通路。利用CCK-8实验、平板克隆实验检测药物浓度、BRAF及ARNTL表达水平对细胞增殖的影响。利用ROS、MDA、GSSG/GSH试剂盒检测药物、BRAF及ARNTL表达水平对细胞内氧化应激水平的影响。利用小干扰RNA(si RNA)、质粒、慢病毒构建BRAF、ARNTL、CREB干扰/过表达细胞系。利用q RT-PCR和Western Blot检测BRAF、ARNTL、CREB基因的转染效率、细胞系中BRAF、ARNTL、CREB基因间的调控作用及小分子药物对凋亡/铁死亡相关蛋白的表达影响。利用双荧光素酶报告基因和CHIP实验验证CREB与ARNTL启动子的结合作用及转录调控作用,以及BRAF对这种调控作用的影响。利用流式细胞术检测细胞内ROS水平及药物对细胞凋亡水平的影响。利用透射电镜观察药物耐药细胞发生铁死亡的超微细胞结构改变。利用荧光显微镜观察细胞内ROS和脂质过氧化物的改变。利用裸鼠成瘤实验检测了体内BRAF突变细胞系中ARNTL的表达水平对Lenvatinib药物敏感性的影响。结果:成功构建了KTC-1-R和8505C-R两种人甲状腺癌Lenvatinib耐药细胞系。耐药株KTC-1-R和8505C-R相比于亲本株KTC-1和8505C能够明显抵抗Lenvatinib的肿瘤抑制作用。高通量测序分析发现MAPK/ERK信号通路与肿瘤Lenvatinib耐药密切相关,由于BRAF突变对ERK信号通路的激活作用,BRAF突变可能参与甲状腺癌Lenvatinib耐药。功能富集分析发现甲状腺癌Lenvatinib耐药与细胞内氧化还原、ROS代谢等反映细胞氧化应激水平的通路相关。比较耐药细胞株与亲本细胞株细胞内ROS、MDA、GSSG/GSH水平发现耐药细胞株相对于亲本细胞株具有较高的氧化应激水平和抗氧化能力。BRAF突变状态能改变细胞内氧化应激水平进而影响细胞对Lenvatinib的敏感性。TCGA数据库分析ARNTL在BRAF突变样本中高表达,且与临床侵袭特性相关。ARNTL在耐药细胞株中高表达,并通过发挥抗氧化作用参与调控甲状腺癌Lenvatinib耐药。干扰ARNTL后,细胞内ROS水平明显增加,对Lenvatinib的敏感性增强;过表达ARNTL后,细胞内ROS水平明显下selleckchem降,细胞增强对Lenvatinib对耐药。BRAF突变可上调ARNTL的表达,促进其发挥抗氧化作用,进而参与Lenvatinib耐药。BRAF突变通过激活p-ERK,促进CREB核内磷酸化,从而上调ARNTL的表达。CREB能够与ARNTL启动子结合,激活转录调控,促进其表达;干扰BRAF后能抑制CREB对ARNTL的启动子的激活作用。BRAF突变质粒的插入可以促进ARNTL介导的Lenvatinib耐药,共转染si-CREB后减弱了对Lenvatinib的耐药。体内BRAF突变细胞系中,Lenvatinib对耐药细胞株的肿瘤抑制作用明显低于亲本细胞株,干扰ARNTL表达后细胞对Lenvatinib的药物敏感性增加,过表达ARNTL后,细胞对Lenvatinib的药物敏感性减弱。小分子药物筛选发现,Vitamin C能显著抑制人甲状腺癌Lenvatinib耐药细胞的增殖。Vitainfectious ventriculitismin C通过抑制p-ERK通路抑制ARNTL的表达,并显著增加耐药细胞株细胞内ROS水平,进而诱导耐药细胞死亡。Vitamin C能够显著增加耐药细胞株的凋亡比例,并影响凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-7和BCL-2的表达下降,以及Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-7的表达升高。Vitamin C能够诱导细胞铁死亡,表现为细胞内线粒体内嵴皱缩,线粒体膜断裂,细胞内脂质过氧化物水平增加,并下调铁死亡抑制相关蛋白Nrf2、SLC7A11、GPX4的表达水平。Vitamin C与Lenvatinib联合应用能有效抑制甲状腺癌Lenvatinib耐药细胞的活力。结论:成功构建人甲状腺癌Lenvatinib耐药细胞系后发现,BRAF突变通过激活p-ERK促进CREB的核内磷酸化,CREB与ARNTL启动子结合促进ARNTL表达发挥抗氧化作用,参与甲状腺癌Lenvatinib耐药;Vitamin C通过p-ERK抑制ARNTL的表达,显著增加耐药细胞株细胞内ROS水平,诱导耐药细胞株发生凋亡/铁死亡克服Lenvatinib耐药。

在中巴合作开展野外地质调查的基础上，结合巴西圣弗朗西斯科克拉通基底太古宙片麻岩和TTG或元古代碎屑岩锆石U-Pb、Sm-Nd同位素等年代学资料，初步构建了克拉通4个重要地质演化过程：（1）太古宙3.5 Ga前克Laduviglusib核磁拉通古陆核与微陆块形成，3.3～2.9 Ga和2.8～2.5 Ga间则由克拉通北区的盖维奥、索布拉迪纽、塞里尼亚和吉基耶等4个古陆核及南区的近圆形古陆核相互碰撞、拼合和绿岩-增生造山岩浆作用而形成稳定的克拉通陆块；（2）2.5Wang’s internal medicine～1.9Ga古元古代泛亚马逊造山岩浆作用；（3）1.78～1.20 Ga克拉通基底隆升与裂谷改造阶段，形成大量基性岩墙群及陆内非造山型岩浆，完成陆块增厚和最终克拉通化；（4）新元古代克拉通边缘经历巴西利亚/泛非运动（0.64～0.54 Ga）改造，又形成巴西利亚等6个活动造山带。圣弗朗西斯科克拉通形成4期重要成矿作用及相应矿床成矿系列：（1）太古宙（2.5 Ga前）形成绿岩型金矿、苏必利尔湖型硅铁建造为主的变质火山-沉积矿床等成矿系列；（2）古元古代早中期（2.5～1.8 Ga）形成与（超）基性岩相关的铜镍钴硫化物矿床、VMS型铅锌银矿床、IOCG等系列矿床；（3）固结纪-中元古代（1.8～1.0 Ga）形成与非造山岩浆作用相关的铌钽矿、铀矿床，与陆内(缘)裂谷获悉更多型的钒-钛-铁矿床等系列；（4）新元古代（1.0～0.54 Ga）主要形成铁锰矿、砂锡矿及磷矿等矿床，包括古陆缘-浅海沉积环境有关的（冲积）金刚石砂矿等系列矿床。

目的 探讨桂枝茯苓胶囊对大鼠良性前列腺增生（BPH）的作用机制。方法 72只雄性SPF级SD大鼠随机分为6组：对照组、模型组、非那雄胺（阳性药，2 mg·kg-1）组和桂枝茯苓胶囊低、中、高剂量（0.87、1.74、3.47 g·kg-1）组，每组12只；除对照组外，其余5组sc雌、雄激素（selleckchem GSK1260.05 mg·kg-1苯甲酸雌二醇和4 mg·kg-1丙酸睾酮），每天1次，连续28 d，建立BPH模型。同时ig给予药物，每天给药1次，连续给药28 d。HE染色观察前列腺组织病理变化；ELISA法检测血清中双氢睾酮（DHT）、雌二醇（E2）和前列腺中DHT、E2、转化生长因子β1(TGF-β1)、表皮生长因子（EGF）的水平；Western blotting检测前列腺中增殖细胞核抗原（PCNA）、雄激素受体（AR）、雌激素受体α (ERα)、胰岛素样生长因子（IGF-1）、成纤维细胞生长因子7(FGF-7)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测前列腺中PCNA、FGF-7、IGF-1和VEGF mRNA表达水平。结果 与对照组比较，模型组前列腺指数显著增加（P<0.01），前列腺上皮厚度显著增加（P<0.01），前列腺显著增生，间质充血、水肿；血清中DHT和前列腺中DHT、E2、EGF水平显著升高（P<0.05、0.01）；前列腺中TGF-β1水平显著降低（P<0.05）,PCNA、AR、 ERα、 FGF-7、 IGF-1、 HIF-1α和VEGF蛋白表达水平及PCNA、 FGF-7、 IGF-1和VEGFmRNA表达水平显著升高（P<0.05、0.01）。与模型组比较，桂枝茯苓胶囊高剂量显著降低前列腺指数（P<0.05），各剂量均显著减小前列腺上皮厚度（P<0.01），减轻间质充血、水肿；桂枝茯苓胶囊低剂量显著升高前列腺中TGF-β1水平，显著降低EGF水平（P<0.05）以及PCNA、FGF-7、VEGF mRNA的表达（P<0.01），显著下调前列腺中AR蛋白表达水平（P<0.05）；中剂量能显著升高前列腺中TGF-β1水平，显著降低EGF水平（P<0.05、0.01）以及PCNA、VEGF mRNA的表达水平（P<0.01），显著下调IGF-1蛋白表达水平（P<0.05）；高剂量显著升高前列腺中TGF-β1水平，显著降低血清中DHT水平、前列腺中DHT、 E2、EGF水平（P<0.05、0.01）以及PCNA、FGF-7、selleck激酶抑制剂IGF-1和VEGF mRNA的表达水平（P<0.01），显著下调PCNA、AR、ERα、FGF-7、IGF-1、HIF-1α和VEGF蛋白表达（P<0.05、0.01）。结Superior tibiofibular joint论 桂枝茯苓胶囊对BPH有明显的治疗作用，其作用机制可能包括降低DHT、E2水平，抑制E2与ERα结合及AR信号通路；并且升高TGF-β1水平、降低EGF水平，抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡，下调FGF-7、IGF-1、HIF-1α和VEGF生长因子的表达，抑制细胞增殖与血管生成。

水稻是冷敏感型作物,其产量和品质受到低温胁迫的制约。植物响应低温胁迫的生理机制和分子机制十分复杂,挖掘更多耐冷基因并解析其调控机制,将有助于水稻的遗传改良。核孔蛋白在植物的生长发育和环境胁迫应答中发挥着重要的作用,但是其调控水稻非生物胁迫尤其是耐冷性的生理和分子机制未见详细报道。本课题组前期利用全基因组关联分析的方法筛选到一个水稻苗期耐冷性相关基因OsSEH1,其编码一个核孔蛋白。在此基础上,本研究基于籼稻、粳稻之间的耐冷性差异,分别构建籼稻八重穗基因型(OsSEH1~(BCS))和粳稻芒水稻基因型(OsSEH1~(MSD))的过表达转基因材料,并利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创制osseh1突变体材料,分别从转录水平、蛋白水平和生理代谢水平上多层面解析了OsSEH1调控水稻苗期耐冷性的分子机制和生理机制。本研究丰富了植物核孔蛋白的研究,为水稻耐冷育种提供了理论基础和基因资源。具体研究结果如下:1.OsSEH1在低温胁迫下的表达特性分析。利用RT-q PCR方法分析OsSEH1表达水平,结果表明OsSEH1基因受到低温胁迫的诱导表达,低温处理1.5小时后达到表达水平的峰值,并且粳稻芒水稻中的OsSEH1~(MSD)的表达水平显著高于籼稻八重穗中的OsSEH1~(BCS)的表达水平。2.OsSEH1的耐冷功能分析。以OsSEH1两种基因型过表达转基因材料和功能缺失突变体Lorlatinibosseh1为材料,分析其低温处理后的表型和生理指标。结果表明,OsSEH1是一个水稻苗期耐冷性的正向调节因子。提高OsSEH1~(MSD)基因型的表达水平可以显著提高植株低温后的存活率,提高可溶性糖含量、脯氨酸含量和抗氧化酶活性,降低低温GSI-IX试剂胁迫造成的生理伤害,提高耐冷性。提高OsSEH1~(BCS)基因型的表达水平对植株耐冷性的提高和生理伤害的缓解没有明显作用。而OsSEH1基因功能缺失会降低植株低温后的存活率,降低可溶性糖含量和抗氧化酶活性,加剧低温对植株造成的生理伤害,降低耐冷性。3.OsSEH1的进化遗传学分析。对73份普通野生稻、150份“丁氏”核心种质和2499份3K水稻数据库中水稻的目标序列进行分析,结果表明,68.0%的粳稻具有OsSEH1~(MSD)基因型,95.82%的籼稻具有OsSEH1~(BCS)基因型,说明OsSEH1的不同等位基因型是导致籼、粳稻耐冷性差异的重要原因之一。OsSEH1的CDS上+157、+325 SNP位点与低温耐受性显著相关,两个位点的差异可能会导致基因功能的改变。遗传分化分析和群体中性测试表明,籼、粳稻亚种在OsSEH1位点有较大的遗传差异,该位点在水稻驯化过程中是被选择的目标。进化分析表明,OsSEH1~(MSD)基因型广泛存在于野生稻中,而OsSEH1~(BCS)基因并不存在于野生稻中,说明耐冷材料中的OsSEH1~(MSD)基因型可能起源于亚洲栽培稻祖先—普通野生稻。4.OsSEH1蛋白的亚细胞定位及同源性分析。利用水稻原生质体瞬时表达系统分析OsSEH1蛋白的亚细胞定位,结果表明,OsSEH1~(MSD)和OsSEH1~(BCS)蛋白都定位于细胞核和细胞质中。对来自46个品种的58个OsSEH1的同源蛋白序列分析表明,水稻中的OsSEH1蛋白包含6个典型的WD40结构域,其与小麦,大麦和短柄草中的SEH1蛋白具有较高的同源性,SEH1在真核生物中高度保守。5.OsSEH1互作蛋白的筛选与鉴定。利用酵母双杂交系统筛选到与OsSEH1互作的蛋白Os MT2b,并通过双分子荧光互补、免疫共沉淀和Pull-down技术验证二者互作的真实性,结果表明,OsSEH1Medicines procurement~(MSD)和OsSEH1~(BCS)蛋白都可以与Os MT2b蛋白互作,并且OsSEH1~(MSD)蛋白与Os MT2b蛋白的亲和力更高。进一步通过LUC活性检测、蛋白体外降解和RT-q PCR实验证实,OsSEH1~(MSD)可以增强Os MT2b的转录水平和蛋白的稳定性。Os MT2b基因功能缺失导致植株耐冷性降低,即Os MT2b是一个潜在的水稻低温耐受性调控基因,正向调控水稻苗期耐冷性。6.OsSEH1与Os MT2b共同参与调控低温胁迫下的氧化还原过程。低温胁迫下,提高OsSEH1~(MSD)基因型的表达水平可以显著降低植株体内的丙二醛(MDA)、H_2O_2和O_2~-含量,提高抗氧化能力。提高OsSEH1~(BCS)基因型的表达水平对H_2O_2和O_2~-含量没有明显影响;而OsSEH1基因功能缺失会造成突变体植株中MDA、H_2O_2和O_2~-含量增加,抗氧化能力降低。利用两种氧化胁迫诱导剂H_2O_2、甲基紫精(MV)处理野生型和OsSEH1转基因植株,结果与低温处理相一致。进一步分析Os MT2b在氧化还原过程中的作用,结果表明,在低温胁迫下osmt2b功能缺失突变体中MDA、H_2O_2和O_2~-含量都显著增加,抗氧化能力降低。7.OsSEH1在转录水平上的调控作用分析。基于野生型和osseh1突变体的RNA-Seq测序数据,通过GO分析表明,在常温条件下差异基因(DEGs)主要富集在植物激素水平调节、应激反应和氧化还原过程等。在低温条件下DEGs主要富集在植物防御反应、光合电子传递链和氧化还原等生物进程。通过测定野生型和osseh1突变体的内源ABA含量和萌发率,分析表明,osseh1突变体内源ABA含量显著高于野生型,外施ABA后osseh1突变体的萌发率受到明显抑制,说明osseh1突变体对ABA的敏感性更高,即OsSEH1负调控ABA信号。RT-q PCR分析表明,在低温胁迫下OsSEH1基因的缺失会引起ROS相关基因表达水平的变化,与转录组数据结果一致,说明OsSEH1参与植物体内的ROS清除相关的生物进程。转录因子预测与分析结果表明,OsSEH1的缺失引起大量转录因子的差异表达,野生型中DREB1A,DREB1B和DREB1C基因的表达水平显著高于osseh1突变体,说明OsSEH1可能正向调控DREB1s的表达水平。8.OsSEH1在代谢水平上的调控作用分析。基于野生型和osseh1突变体的代谢组分析表明,OsSEH1基因的缺失会引起大量代谢物的积累量发生改变。常温和低温条件下,野生型和osseh1突变体植株中氨基酸,类黄酮,有机酸,生物碱,酚酸和脂质的积累模式都明显不同。osseh1突变体中大量类黄酮代谢物的丰度显著降低,说明OsSEH1可能参与黄酮和黄酮醇的生物合成代谢途径。KEGG分析表明,常温下差异积累代谢物(DAMs)要富集在乙醛酸及二羧酸代谢,三羧酸循环(TCA)和碳代谢等代谢途径;而低温条件下,主要富集在三羧酸循环(TCA),氨基酸的生物合成,黄酮和黄酮醇的生物合成等代谢途径。转录组与代谢组联合分析结果表明,苯丙烷生物合成和黄酮生物合成途径是DEGs和DAMs最显著富集的代谢途径。

目的 研究“全人”理念下的全视角护理模式在急性闭角型青光眼手术患者中的应用效果。方法 选取2021年7月至2023年2月九江市第一人民医院收治的80例急性闭角型青光眼手术患者作为研究对象，按照护理方式的不同分为对照组和观察组，每组各40例。对照组施以眼科常规护理，观察组实施“全人”理念下的全视角护理模式。观察两组的心理状态评分、视力水平、眼压值、前房深度、生活质量以及护理满意度。结果 干预结束后，观察组的焦虑自评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）以及术后3 d时的最佳矫正视力（BCVA）、眼压水平均低于对照组，术后3 d时的中央前房深度（CACD）高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组干预结束后的生活质量评分（QOL）评分低于对照组，纽卡斯尔护理服务满意度量表（NSNS）评分高于对照组，差异有统计学意immune suppression义（P<0.05）。结论 对急性BMS-354825 IC50闭角型青光眼手术患者实施“全人”理念下的全视角护理模式能够较好地缓解其焦虑抑郁情绪，有助Smoothened Agonist核磁于患者术后恢复以及提升生活质量，护理效果令人满意。

肺癌是全球范围内发病率和死亡率增长最快的癌症类型，对于人群生命健康构成巨大威胁。辐射治疗是肺癌治疗的主要方法之一，肺癌的局部控制率与辐射剂量呈明显的剂量-效应学关系，但肺为辐射剂量受限器官，肺癌组织的辐射抵抗和正常组织的辐射损伤限制了肺癌辐射疗效。肺癌中医病机为正气先虚，邪气内侵，渐积而成。肺癌辐射治疗后，机体正气愈虚，痰凝气滞、瘀血阻络更甚， 导致肺癌组织辐射抗性产生并增强。因此，使用药物提升肺癌细胞的辐射敏感性和改善正常肺组织的辐照耐受性是显著提高肺癌患者辐射治疗临床疗效的关键问题。中医药作为辐射增敏剂，通过调节细胞周期增加辐射敏感期细NSC 125973 NMR胞比例、促进促凋亡基因上调及抗凋Ferrostatin-1体内实验剂量亡基因下调诱导细胞凋亡、增强辐照引起的脱氧核糖核酸（DNA）损伤和抑制损伤修复、改善血液循环及组织供氧等机制提高肿瘤细胞对辐照的敏感性，放大辐射对肿瘤组织的毒性。中医药也可作为辐射防护剂，通过抑制细胞损伤、调节细胞因子和免疫平衡、减少炎症因子和纤维化因medical screening子释放以及抑制相关信号通路激活等方面发挥防治放射性肺损伤的作用。本文对近年来中医药肺癌辐射增敏及辐射防护相关研究成果进行系统梳理，旨在阐明中医药调控肺癌辐射治疗作用机制，为中医药参与肺癌辐射治疗改善肺癌患者预后提供更多的理论和实践依据。

目的 分析原发性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（pHLH）患儿的基因及表型。方法 回顾性分析2018Flow Panel Builder年1月至2021年6月初诊于青岛大学附属妇女儿童医院且经基因检测确诊为pHLH的4例患儿临床资料及基因检测结果。结果pHLH患儿的起病年龄为1个月～9岁，临床表现以发热、血象异常为主，查体可见肝脾肿大等阳性体征，实验室检查提示机体内大量炎性因子释放。4例患儿经基因检测，均明确诊断为pHLH。其中2例为PRF1基因突变，表型均为家族性噬血细胞综合征（FHL）-2型；1例为UNC1SCH7729843D基因突变，表型为FHL-3型；1例为STXBPCanagliflozin2基因突变，表型为FHL-5型。3例患儿接受规范的化疗与造血干细胞移植，1例患儿接受抗感染、丙种球蛋白、地塞米松等治疗，但总体预后均较差。结论 pHLH病情进展快，早期识别难度大，基因检测可作为确诊依据，结合阳性家族史、临床治疗效果、蛋白功能检测等可为该病的综合判断提供帮助。