RAF信号通路

鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAst V)作为一种新发病原,可导致雏鹅全身性内脏痛风,表现为高感染率和高死亡率。2016年暴发以来,给中国养鹅业带来了严重损失。刺突蛋白(Spike)位于鹅星状病毒表面,是重要的抗原蛋白,可诱导宿主的免疫反应,并介导病毒粒子与细胞表面受体的结合,因此Spike蛋白是诊断试剂开发和药物筛选的重要靶标。1.鹅星状病毒Spike蛋白的表达与纯化首先将构建好的p ET-28a-Spike质粒转化到E.coli BL21感受态细MK-1775临床试验胞,经菌液PCR、测序后获得序列正确的阳性菌株。原核表达条件优化后,最终选择在16℃条件下加入终浓度为1 m M IPTG过夜诱导,SDS-PAGE结果显示可溶性Spike蛋白成功表达。使用镍离子亲和层析技术纯化获得了Spike蛋白,经SDS-PAGE、Western-blot鉴定,获得了高纯度(95%)、高浓度(1.5mg/m L)的Spike蛋白。2.鹅星状病毒Spike蛋白单克隆抗体的制备通过Spike蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合,亚克隆,采用ELISA、IPMA共筛选到3株阳性单克隆细胞,分别为:1A5、2B4、12E6。经Western-blot、IFA鉴定,3株单克隆抗体均与Spike蛋白具有良好的反应,其中2B4、12E6与GAst V发生反应。亚型鉴定结果显示单抗12E6、2B4为Ig G2b亚类,单抗1A5为Ig G2a亚类;轻链均为κ链。敏感性结果显示,抗体效价在1:51 200以上。依据GAst V XX株Spike序列合成15个氨基酸的25个重叠肽(包含7个氨基酸的重叠量),ELISA、Dot-blot结果显示单抗1A5识别的表位为(EP16)ELRNRLNIADGDYVI,单抗2B4识别的表位为(EP21)AGDSNPGETFQNFKM多肽,且均为线性B细胞表位。3.鹅星状病毒Spike蛋白亲和肽的虚拟筛选以火鸡星状病毒2型Spike蛋白的晶体结构为模板,利用SWISS-MODEL进行同源建模,获得GAst V Spike蛋白的三维结构。基于分子对接技Pexidartinib价格术进行计算机虚拟筛选,运用SYBYL软件选定Spike蛋白的C端部分区域为活性口袋来建立多肽库,再利用Surflex-Dock/SYBYL将库中的多肽配基与选定口袋进行对接,最后通过一致性评分函数(Cscore)综合评估对接结果,筛选出30条特异识别GAst V Spike蛋白的多肽,为后续的抗病毒研究Organic media奠定了基础。4.鹅星状病毒抗病毒亲和肽的筛选与鉴定利用IPMA初步筛选到3条抑制GAst V增殖的多肽,结合多肽的细胞毒性结果,最终筛选到多肽AP21。亲和性鉴定结果显示多肽AP21可以与Spike蛋白特异性结合,Western-blot、IFA、TCID_(50)结果显示亲和肽AP21对GAst V具有显著的抗病毒活性,为GAst V抗病毒药物开发奠定了基础。抗病毒靶点分析结果显示,AP21作用的靶点位于Spike蛋白结构的侧面,具有特定的空间构象。

贵金属纳米团簇由于其特殊的尺寸使其具备了与其它较大尺寸的纳米颗粒不同的物理和化学性能。例如特殊的光学性能及类酶催化活性,同时以生物分子模板制备的贵金属纳米团簇由于其表面具有丰富的官能团,使得制备的贵金属纳米团簇材料具有易于修饰的特点。从尺寸上来说,贵金属纳米团簇材料的尺寸通常不超过2 nm,分子数目是由几十个到上百个数量不等的贵金属原子按照一定规律聚集而成。制备方法主要聚焦于物理合成方法和化学合成方法。而在化学合成法中以生物分子模板制备的贵金属纳米团簇材料具有操作简便﹑水溶性好﹑重现性高等优点。除此之外,贵金属纳米团簇材料的生物相容性好﹑毒性低﹑具备可调控的荧光性能等多类优点使其被广泛使用于医学成像探针﹑肿瘤细胞成像、抗菌﹑抗病毒等基础生物医学和分析领域。另外基于其优良的光学性能,贵金属纳米团簇也可以应用于离子检测。前期我们实验室的研究发现贵金属纳米团簇具有良好的类酶催化活性,可实现肿瘤细胞的催化显色成像。因此本课题结合前期实验室实验结果以及相关报道的传统四氧化三铁的类酶催化活性,我们在本文中报道了以牛血清白蛋白(BSA)为模板通过生物矿化法合成了一种金和铁双元素整合生物纳米探针(BSA-Au-Fe NCs),并对其类酶催化活性以及肿瘤细胞成像应用进行了探究。除此之外,我们在本课题中还报道了利用谷胱甘肽(GSH)为模板合成了具有荧光性能的金纳米团簇探针(GSH-Au NCs),并利用金纳米团簇的荧光淬灭实现了对两种稀土离子的检测并对荧光淬灭机理进行了探究。具体研究内容如下:1.基于牛血清白蛋白(BSA)为模板通过生物矿化法制备整合纳米探针(BSA-Au-Fe NCs)及其对肿瘤细胞多模式成像的应用。以牛血清白蛋白(BSA)为模板,合成了具有荧光信号及类酶催化活性的金铁双元素整合纳米探针(BSA-Au-Fe NCs),并对其光Baf-A1浓度学性能及类酶催化活性进行了表征。表征的结果发现制备的BSA-Au-Fe NCs具有良好的荧光特性,其最佳激发峰为λ_(ex)=536 nm,最佳发射峰为λ_(em)=673 nm。通过高分辨www.selleck.cn/products/cobimetinib-gdc-0973-rg7420透射电镜(HRTEM)得到的数据我们发现制备的整合纳米探针具有很好的分散性及较小的尺寸。粒径统计结果显示整合探针的尺寸为3.85±0.17 nm,同时动态光散射结果显示制备的整合纳米探针粒径在4.2 nm左右。同时实验通过体外TMB催化实验探究了材料的体外催化活性并优化了催化的实验条件。结果显示制备的整合纳米探针具备优良的体外类酶催化活性。为了进一步探究整合纳米探针的细胞成像潜力,实验对整合纳米探针的生物安全性进行了初步评价。我们通过CCK-8体外细胞毒性实验﹑溶血实验以及死/活细胞染色等实验对合成的整合纳米探针的生物安性进行了评价。结果显示即使整合纳米探针中的金的浓度达到200μM时,对三种实验细胞系也没有产生明显的细胞毒性。实验选取A549肿瘤细胞来研究整合纳米探针的多模式成像能力,实验分别设置荧光成像实验﹑普鲁士蓝实验组及催化显色成像实验组。结果显示制备的整纳米合探针具有良好的细胞荧光成像能力。同时通过普鲁士蓝染色实验及DAB催化显色实验进一步验证了对细胞的标记成像能力。为了验证制备的整合纳米探针在实际中的是否可以通过受体诱导效应提升实验细胞对整合纳米探针的摄取量以提高其细胞成像效果。实验设置LHRH多肽偶联整合纳米探针组,并对标记细胞实现光学成像﹑普鲁士蓝染色及催化显色。结果显示LHRH多肽偶联整合纳米探针实验组能明显提高实验细胞对整合纳米探针的摄取率,进而更有效地实现对实验细胞的多模式成像。综述以上实验结果,我们初步non-medicine therapy确认制备的整合纳米探针具有良好的多模式成像能力及生物安全性,可以作为一种肿瘤细胞成像的辅助载体,同时也是一类可以应用于生物纳米医学的新型纳米材料。2.金纳米团簇(GSH-Au NCs)荧光淬灭实现对镧、铕离子的检测及相关淬灭机理的探究。以谷胱甘肽(GSH)为模板制备了具有橙红色荧光发射(λ_(ex)=420 nm,λ_(em)=600 nm)的金纳米团簇(GSH-Au NCs)。实验通过高分辨透射电镜(HRTEM)﹑动态光散射(DLS)等表征手段对金纳米团簇的形貌及尺寸进行了表征。通过荧光光谱及紫外吸收光谱对金纳米团簇的光学性能进行表征。高分辨透射电镜(HRTEM)数据显示制备的金纳米团簇在溶液中具有很好的分散性且大小均一。粒径数据统计的结果显示金纳米团簇的尺寸为1.95±0.19 nm,同时动态光散射的数据显示金纳米团簇(GSH-Au NCs)的粒径在2.1 nm左右。我们通过对制备材料不同时间点的紫外吸收光谱和荧光光谱进行追踪。结果显示我们制备的金纳米团簇具有很好的稳定性。TMB体外催化显色实验的结果显示我们制备的金纳米团簇的自身具备很好的类酶催化活性。不同离子荧光淬灭的实验结果显示镧离子(La~(3+))、铕离子(Eu~(3+))对金纳米团簇的荧光存在明显的淬灭效果。于是我们利用制备的金纳米团簇作为检测探针应用于这两种稀土离子的检测。根据Stern-Volmer淬灭方程得到了不同温度下两种稀土离子的淬灭常数。实验结果显示镧离子(La~(3+))、铕离子(Eu~(3+))和金纳米团簇(GSH-Au NCs)之间分别为动态淬灭和静态淬灭。且在一定浓度范围内两种稀土离子浓度对金纳米团簇探针的荧光淬灭程度具有良好的线性关系。本课题中利用金纳米团簇(GSH-Au NCs)的荧光淬灭作为检测探针来检测两种稀土离子的方法具备成本低,灵敏度高而且操作简单等优点。该方法同时也提供了一种很好的简易且灵敏检测稀土离子(La~(3+)、Eu~(3+))的新方法。

目的 探讨大分割与小分割X线放疗方案对乳腺癌MCF-7细胞长链非编码RNA GATA6反义RNA 1(GATA6-AS1)基因表达的影响。方法 给予MCF-7细胞4Gy X线照射，分为小分割组(每次0.5 Gy，共8次)、大分割组(每次2 Gy，共2次)，以未照射组为对照组。利用CCK-8VX-765采购实验检测各组MCF-7细胞的增殖能力，流式细胞仪检测各组MCF-7细胞凋亡，q RT-PCR法检测各组MCF-7细胞GATA6-AS1基因表达变化，进一步通过Westernblot法检测其邻近基因表达产物GATA6的表达情况。结果 通过CCK-8实验发现，X线照射能够抑制MCF-7细胞的增殖，大分割组MCF-7细胞增殖抑制较小分割组更明显，72 h抑制率可达(57.0±8.86)%，而小分割组仅为Biokinetic model(25.0±4.15此网站)%，差异有统计学意义(P<0.05)；流式细胞仪检测发现大分割组MCF-7细胞的凋亡较小分割组更明显，48 h凋亡率达(19.07±2.38)%，而小分割组仅为(13.22±2.71)%，差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR法检测发现，X线照射会引起MCF-7细胞内GATA6-AS1基因表达增强，大分割组GATA6-AS1基因表达增强更明显，达到对照组的(2.13±0.19)倍，差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot法检测发现，X线照射可下调GATA6-AS1基因邻近蛋白GATA6的表达，大分割组-GATA6蛋白下调更明显。结论 大分割法X线照射能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡，增强乳腺癌MCF-7细胞GATA6-AS1基因表达，并下调其邻近基因表达产物GATA6的表达。

甘蔗Belnacasan抑制剂(Saccharum officinarum)作为一种全球重要的糖料和工业原料作物，目前已在100多个国家成功实现商业化种植，甘Porphyrin biosynthesis蔗产业的高质量可持续发展，对于全球食糖有效供应和绿色能源经济的可持续发展具有重要战略意义。近年来，依托传统杂交育种技术的甘蔗产业遭遇发展瓶颈。随着现代生物学技术的迅速发展，遗传修饰技术在许多领域崭露头角。遗传修饰技术，即通过基因工程，特异性改造或改良靶标基因，从而实现对功能性selleck产品状的改变。甘蔗作为转基因生物安全等级最高的作物之一，以功能基因组学为基础的报告基因和筛选标记基因推动了甘蔗在抗病、抗虫、抗(耐)除草剂和抗寒、抗旱等方面的优质品种选育。此外，转基因技术也在提高甘蔗蔗糖含量、改良蔗糖品质及基于生物反应器的能源甘蔗等品质改良方面成果丰硕；以基因组组装、基因组学辅助育种(genomics-assisted breeding, GAB)、多等位基因诱变和功能缺失表型创建等为代表的基因编辑技术在甘蔗功能基因组研究和新材料创制方面表现优异。本文全面综述了遗传修饰技术在上述多个甘蔗领域的研究进展，重点关注兼具多个优良性状的多价融合转基因甘蔗研发和商业化，以期为我国甘蔗优质品种选育和品质改良提供参考，推动我国甘蔗产业高质量可持续发展。

目的：研究冠心病患者心率变异性(HRV)、心室晚电位(VLP)、QT间期离散度(QTd)、左室射血分数(LVEF)的相关情况。方法：选取收治的冠心病患者72例，将其作为观察组，另选取同期的健康体检者72例作为对照组，对两组受检对象均进行HRV、VLP、QTd、LVEF检测，比较两组检查结果。结果：观察组的HRV(时域)显著低于对照组。观察组的高频功率(HF)、总功率(TP)显著低于对照组，观察组的低频功率(LF)、低频功率与高频功率之比(LF/HF)显著高于对照组(均P<0.05),对比两组的极低频功率(VLF)、特高频功率(UHF)差异无统计学意义(P>0.05)。观察组的均方根值(RMS)显著低于对照组，观察组的总QRS时间(TQRS)、高频低幅时限(LAS)显著高于对照组，观察组的QTd显著高于对照组，观察组的LVEF显著低于对照组，差异MLN4924均有统计学意义(均P<0.05)。结论：冠心病患者对比健康体检者的HRV、VLP、QTd、LVEF具有显著性的差异，这BMS-354825说明书四大指bio distribution标间具有相应的关联性。

近红外(NIR)光谱，可提供样本丰富的结构和成分信息。机器学习主要用于数据的分析和挖掘，可以对数据进行精确分类和信息提取。本研究采用自研的NIR光谱探针技术进行乳腺癌组织的原位光谱采集并进行癌变(光谱)分析；运用基线校正(BC)、标准正态变量变换(SNV)、一阶导数二阶多项式21点Savitzky-Golay平滑(1~(st)-2-21SG)和二阶导数三次多项式25点SavitzTofacitinib分子量ky-Golay平滑(2~(nAY-22989采购d)-3-25SG))四种方法进行光谱预处理；结合机器学习方法，包括主成分分析(PCA)、K最近邻(KNN)、Fisher判别分析(FDA)及支持向量回归(SVR),进行乳腺癌变和癌旁组织的分类和判别。研Medial osteoarthritis究发现PCA-KNN模型的最优预测结果为基于BC+SNV,其准确率、敏感性及特异性达88.34%、98.21%、76.11%。PCA-FDA模型的最优结果为基于BC+1~(st)-2-21SG,其准确率、敏感性及特异性达90.00%、98.21%、79.54%。SVR模型的最优结果为基于BC+2~(nd)-3-25SG,其准确率、敏感性及特异性达90.00%、100.00%、79.55%。论证了机器学习方法结合NIR光谱可以实现小样本量乳腺癌的高效精确诊断。

目的 探讨冠心病合并亚临床甲状腺功能减退症患者血清脂代谢指标、超敏-C反应蛋白（hs-CRP）、血小板平均体积（MPV）水平、颈动脉内膜中层厚度（IMT）、Genisini评分与甲状腺功能指标的关系，为后期疾病的临床治疗提供参考。方法 回顾性分析成都西区医院2016年12月至2021年4月收治的80例冠心病患者的临床资料，根据患者甲状腺功能将其分为正常组（50例，未合并亚临床甲状腺功能减退症）与减退组（30例，合并亚临床甲状腺功能pre-formed fibrils减退症）。比较两组患者心功能、生化指标、冠状动脉病变严重程度、甲状腺功能指标水平，采用PearsDS-3201浓度on相关性分析法分析临床指标与甲状腺功能指标的相关性。结果 减退组患者血清总胆固醇（TC购买Alpelisib）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、hs-CRP、促甲状腺激素（TSH）、血浆MPV水平、Genisini评分均显著高于正常组，血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平显著低于正常组，IMT显著大于正常组（均P<0.05）；两组患者左室舒张末期内径（LVEDD）、左室射血分数（LVEF）水平，病变部位，血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）水平及心肌梗死占比比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）;Pearson相关性分析结果显示，血清TC、TG、LDL-C、hs-CRP、MPV、IMT、Genisini水平与血清TSH水平均呈正相关（r=0.398、0.454、0.416、0.425、0.529、0.637、0.214），血清HDL-C水平与血清TSH水平呈负相关（r=-0.521）（均P <0.05）。结论 亚临床甲状腺功能减退症可通过血脂代谢、炎症反应等多种途径加重冠心病患者病情，且冠心病合并亚临床甲状腺功能减退症患者血清TC、TG、LDL-C、hs-CRP、MPV、IMT、Genisini水平与血清TSH水平均呈正相关，血清HDL-C水平与血清TSH水平呈负相关，临床上可通过检测患者上述生化指标，及时发现可能造成亚临床甲状腺功能减退的危险因素，并制定有效的防治措施。

目的：探讨乳积方对乳腺癌MDA-Mselleck合成B-231细胞miRNA表达谱的影响。方法：将体外培养的MDA-MB-231细胞随机分为正常对照组和乳积方处理组，培养后确认细节使用miRNA芯片技术检测乳积方对MDA-MB-231细胞miRNA表达谱的影响。采用mirdbV5和TaregetScan7.1数据库对差异表达miRNA进行靶基因预测，并运用Go&Pathway分析获取其相关的生物学功能和信号通路。RT-PCR用于endocrine genetics验证miRNA表达谱结果。结果：乳积方药物作用MDA-MB-231细胞72 h后，miRNA芯片检测筛选出表达差异大于2倍的基因共有219个，其中上调109个，下调110个。进一步增大筛选标准(ForeGround强),miRNA的表达谱存在25个差异表达的miRNA,这25个差异表达miRNA靶基因显著富集于PI3K-Akt通路、miRNA癌症通路等信号通路，涉及细胞增殖、凋亡和迁移等生物过程。从这25个差异表达的miRNA中，选取21个miRNA进行RT-PCR验证，除hsa-miR-601外，其他20个miRNA的QPCR结果与芯片结果一致。结论：乳积方可能参与乳腺癌相关miRNA的表达调控，进而影响相关信号通路的转导，从而发挥其抗肿瘤作用。

目的 分析乳腺彩超诊断为低分类的乳腺肿物应用微创旋切术后的临床病理特征。方法 回顾性分析中山市人民医院于2008年3月至2021年12月术前彩超为低分类的乳腺肿物女性患者22 922例，其中284例患者微创旋切术后确诊CCRG 81045溶解度为乳腺癌，探讨彩超分类与患者年龄、肿物大小、病理组织类型、分子亚型之间的关系anti-infectious effect。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析敏感度、特异度。结果 284例患者中术前彩超Enasidenib分子量BI-RADS 2类11例、3类137例、4a类136例。组织学类型为浸润性导管癌198例，其中有68例伴部分原位癌；浸润性小叶癌19例，其中有6例伴部分原位癌；原位癌29例；黏液癌12例；其他类型癌共26例。分子亚型为Luminal A型96例，Luminal B型142例，三阴性乳腺癌37例，HER-2过表达型9例。ROC曲线分析发现彩超分类预测术前为乳腺癌的敏感度为47.9%，特异度78.1%，曲线下面积为61.8%。结论 乳腺癌患者肿瘤较小、原位癌、黏液癌及三阴性乳腺癌术前容易被乳腺彩超低估，应引起重视。

目的:通过对1例M抗原杂合子筛选细胞造成不规则抗体筛查假阴性病例的思考，指导不规则抗体筛选细胞、交叉配血方法的选择和手术备血流程的注意事项。方法:分别选择筛选细胞A、B用微柱凝胶法对同一样本进行不规则抗体筛查；分别用微柱凝胶法和聚凝胺法对同一组样本进行交叉配血。结果:应用筛选细胞A的不规则抗体筛查结果为阴性，筛选细胞B的不规则抗体筛查为阳性，北京市红十字血Biosimilar pharmaceuticals液中心抗体鉴定结果为抗-M抗体，说明筛选细胞A检测结果为假阴性。微柱凝胶法交叉配血不合，聚凝胺法交叉配血相合。结selleck论:筛选细胞中存在杂合子会造成不规则抗体筛查假阴性，因此在选择筛选细胞时尽量选择抗原多且纯合子的筛选细胞；在抗体效价较低时聚凝胺法检测结果可能出现假阴性，所以有妊娠史和输血史的患者配血时应尽量选择敏感性较好的微柱凝胶法selleck激酶抑制剂来检测。