RAF信号通路

目的 探讨山奈酚(kaempferol, KAE)对脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)大鼠神经性疼痛的作用机制。方法 采用脂多糖SB203580供应商(lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠星形胶质细胞建立炎症模型，用山奈酚单独或与miR-340-5p抑制剂共同处理细胞，RT-qPCR检测miR-340-5p表达，ELISA检测炎症因子白细胞介素(interleukin, IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平；荧光素酶报告基因实验验证AKT3与miR-340-5p的靶向关系；Western blotting检测自噬标志蛋白的表达。此外，建立SNL大selleckchem Elexacaftor鼠模型，山奈酚口服给药后，检测miR-340-5p表达，炎症因子以及自噬标志蛋白水平，并测定大鼠机械缩爪阈值和缩爪潜伏期。结果 在LPS诱导的星形胶质细胞中，山奈酚上调miR-340-5p表达，抑制IL-1β和TNF-α分泌，转染miR-340-5p抑制剂则逆转山奈酚对miR-340-5p表达的促进作用以及对炎症因子分泌的抑制作用。AKT3被确定是miR-340-5p的靶基因。山奈酚上调miR-340-5p表达，进而阻断AKT3/mTOR信号通路，增强星形胶质细胞自噬。山奈酚给药的SNL大鼠表现出miR-340-5p表达上调，炎症因子分泌减少，自噬相关蛋白表达增加，机械缩爪阈值增加，缩爪潜伏期延长。结论 山奈酚通过上调miR-340-5p靶向抑制AKT3/mTOR信号通路，抑制星形胶质细胞炎症反应，增强自噬legal and forensic medicine，减轻SNL大鼠神经性疼痛。

目的 探讨大建中汤治疗腹泻型肠易激综合征内脏痛和抑郁症共病的作用机制。方法 采用慢性不可预知性刺激加葡聚糖硫酸钠方法建立fee-for-service medicine腹泻型肠易激综合征内脏痛和抑郁症共病大鼠模型。大鼠随意分为正常对照组、模型组、大建中汤组[10.8 g/(kg·d)]、氟西汀组[0.01 g/(kg·d)]。治疗14 d后，采用强迫游泳评估各组大鼠的抑郁状况，腹壁撤退反应(AWR)评估各组大鼠肠道痛觉敏感性，酶联免疫吸附法检测各组大鼠前扣带回皮质(ACC)中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10、IL-4表达；蛋白质印迹法检测ACC区Y-27632髓鞘脂蛋白(PLP)、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)、髓鞘碱性蛋白(MBP)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62、Beclin-1,以及小胶质细胞相关蛋白精氨酸酶1(Arg1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达；免疫荧光双标法观察ACC区自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和MG离子钙结合衔接分子1(Iba1)共表达情况。结果 与正常组大鼠相比，共病大鼠强迫游泳时间减少(P<0.01),不动时间增加(P<0.01),在20、40、60 mmHg(1 mmHg≈0.133 kPa)3个压力下AWR分数上升(P<0.01),前扣带回皮质PLP、MOG、MBP蛋白表达下降(P<0.01),iNBlebbistatin生产商OS蛋白表达升高(P<0.01),促炎因子TNF-α、IL-1β升高(P<0.01),抗炎因子IL-10、IL-4水平有增加趋势，LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达下降(P<0.01),p62蛋白表达升高(P<0.01),LC3-Ⅱ、Iba1阳性细胞降低(P<0.01);与模型组大鼠比较，大建中汤组不动时间及各压力下AWR评分降低(P<0.01),ACC中PLP、MOG、MBP蛋白表达升高(P<0.01),Arg1蛋白表达升高(P<0.01)、iNOS蛋白表达下降(P<0.01),TNF-α、IL-1β下降(P<0.01),IL-10、IL-4升高(P<0.01),LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达升高(P<0.01),p62蛋白表达降低(P<0.01),LC3-Ⅱ、Iba1阳性细胞增加(P<0.01)。上述各指标，氟西汀组与大建中汤组差异均无统计学意义。结论 通过促进自噬以调控小胶质细胞清除髓鞘碎片，是大建中汤治疗腹泻型肠易激综合征内脏痛和抑郁症共病的可能作用机制。

目的探究运脾方对2型糖尿病患者一级亲属代谢影响。方法研究合计纳入河北省中医院内分泌科门Microscopes and Cell Imaging Systems诊及住院收治的119例2型糖尿病患者一级亲属（2019年1年～2020年1月），均为非糖尿病，并将受试者分成观察组与对照组（随机数字表法），对照组60例受试者均行个体化的健康教育，观察组59例受试者均行个体化的健康教育＋运脾方治疗，时间3个月，比较两组受试者治疗前后腰围及体质指数（BodyMassIndex，BMI）指标变化及空腹血尿酸指标变化、血压变化、糖代谢指标及脂代谢指标变化、治疗前后生活质量（theshort-form36itemhealthsurveyquestionnaire，SF-36）指标变化及受试者对本次干预满意率情况、不良反应情况。随访2年，观察组脱落3例，剩余56例，对照组脱落2例，剩余58例，比较两组受试者糖尿病发生情况、冠心病及高血压、脑卒中等心脑血管疾病发生率。结果两组受试者治疗前腰围及BMI指标、空腹血尿酸指标、收缩压及舒张压、空腹血糖（fastingbloodglucose，FBG）及空腹胰岛素(Fastinginsulin，FINS)、胰岛素抵抗指数（InsulinResistanceindex，HOMA-IR）等血糖代谢指标、总胆固醇(TotalCholesterol，TC)、甘油三脂(Triglyceride，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(Highdensitylipteincholesterol，HDL—C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-DensityLipoproteinCholesterol，LDL—C)等脂代谢指标、生活质量（SF-36）指标等比较，P＞0.05，治疗后各组受试者腰围及BMI指Colforsin细胞培养标、空腹血尿酸指标、收缩压及舒张压、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、HDL—C、LDL—C、SF-36评分等指标均改善，观察组受试者治疗后腰围及BMI指标、空腹血尿酸指标、收缩压及舒张压、FBG、FINS、HOMAAZD6738临床试验-IR、TC、TG、HDL—C、LDL—C、SF-36评分等指标情况均优于对照组受试者；观察组受试者满意率（96.61%）高于对照组（83.33%），P＜0.05；两组均未出现不良反应，P＞0.05；2年后，观察组受试者糖尿病发生率（5.36%）低于对照组（18.97%），脑卒中及冠心病、高血压等其他心脑血管疾病发生率（5.36%）低于对照组（20.69%），P＜0.05。结论运脾方对2型糖尿病患者一级亲属代谢具有积极影响，可较好改善2型糖尿病患者一级亲属糖代谢、脂代谢等指标，受试者生活质量改善，十分认可，且还可预防患者糖尿病、高血压、冠心病等心脑血管疾病，值得深入研究。

沙棘籽粕是沙棘果提炼完油Problematic social media use脂之后的废弃料,其中所含蛋白是一种优质的植物蛋白,但目前沙棘籽粕主要被用作饲料,并未得到有效的开发,存在严重的资源浪费问题。此外,高血压也是当今困扰多数人的疾病,严重时可诱发各种心血管疾病,食源性血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽是治疗高血压病症的新方法,目前,常见的植物蛋白源ACE抑制肽多从米糠、南瓜籽、杏仁等植物原料中提取,还未有沙棘籽粕ACE抑制肽的研究,本研究旨在开发制备沙棘籽粕蛋白源的ACE抑制肽NSC 127716采购,增加沙棘籽粕的利用率,减缓资源浪费,为沙棘籽粕综合利用提供一定的理论基础。本研究以沙棘籽粕为原料,利用碱提酸沉法提取蛋白,以蛋白得率为指标,优化提取条件,检测沙棘籽粕蛋白的粒径、电位等特性;以沙棘籽粕蛋白为酶解底物,通过响应面实验优化酶解条件;采用超滤技术制备得到分子量小于3 kDa的沙棘多肽样品,研究其ACE抑制活性和结构,通过分子模拟对接判断ACE与活性肽的结合位点,分析抑制机制;对沙棘籽粕ACE抑制肽制备工艺进行放大试验,分析此工艺应用的合理性。研究表明:(1)沙棘籽粕蛋白的最佳提取条件:过筛数目为120目,料液比1:30,碱提pH10,碱提温度60℃,碱提时间80 min,酸沉pH3,此条件下的沙棘籽粕蛋白得率为27.66%。(2)喷雾干燥蛋白和冷冻干燥蛋白的功能特性:喷干蛋白与冻干蛋白的粒径大小、热稳定性、起泡性及吸油性均存在显著性差异,喷雾干燥蛋白平均粒径(453.90±9.89 nm)高于冷冻干燥蛋白(154.20±6.36 nm);冻干蛋白的变性温度和变性焓(130.50±1.03℃、2.54±0.66 J/g)均高于喷雾干燥蛋白(125.79±0.65℃、0.77±0.15 J/g);冻干蛋白的起泡ABT-199小鼠性及稳定性(68.70±2.46%、51.10±2.42%)也优于喷雾干燥蛋白(61.30±1.66%、48.23±2.81%);冻干蛋白与喷雾干燥的溶解度有着极显著差异;两种蛋白的乳化性、电位、吸水性无显著性差异。整体来说,冻干蛋白的功能性质优于喷雾干燥蛋白。(3)ACE抑制肽制备最佳条件:经筛选得出,酶制剂ZF101制备ACE抑制肽的效果最好,由响应面预测,底物浓度7.00%,酶添加量4.20%,酶反应时间6.38 h为ACE抑制肽的最佳条件,此时所得肽的ACE抑制率为84.98%,多肽得率为24.29%。(4)沙棘籽粕ACE抑制肽的活性研究:通过超滤得到<3 kDa的肽样品,检测出IC_(50)为4.358 mg/mL;竞争机制为非竞争性抑制(km=4.29×10~(-3));对其抑制稳定性进行研究发现,在不同温度及pH处理后及体外模拟消化后的抑制率未显著降低。(5)沙棘籽粕ACE抑制肽结构鉴定:红外光谱检测发现,肽中61.87±1.42%为β-折叠结构,38.13±1.42%为β-转角结构,无其它结构;XRD检测得知为无规则非晶体结构;肽中含有17种氨基酸,其27.52%的谷氨酸占比最多,如按照氨基酸特性分析,酸性氨基酸占比39.33%,疏水性氨基酸含量为29.24%,还有20.92%的碱性氨基酸,11.27%的中性氨基酸,芳香族氨基酸仅为5.88%;利用液质联用技术,与数据库(NCBI、Uniprot)比对,检测出10条具有ACE抑制活性的肽段。对其抑制机制进行研究得知10条肽与ACE的结合位点均不同,结合肽的理化特性得知肽段4具有更好的抑制活性。(6)工艺放大研究:蛋白提取率为19.30%,多肽提取率为27.00%,ACE抑制率为72.22%,蛋白平均分子量为170280 Da,多肽的平均分子量为2842 Da。以上的研究表明,本文制备出的沙棘ACE抑制肽具有较好的抑制活性,制备工艺可应用于实际生产,终产品可作为降压类功能食品的原辅料,为沙棘产品开发提供了新方向。

p53蛋白是一种与细胞周期停滞和细胞凋亡有关的蛋白质。在受到细胞压力或环境扰动后,p53促进下游多个靶基因的转录,介导肿瘤抑制。MDM2是主要的E3泛素连接酶,也是p53的负调控因子。MDM2可促进p53的泛素化和核输出,抑制p5Dibutyryl-cAMP体外3的抑癌活性。因此MDM2对p53的负调控始终是肿瘤治疗中急切需要解决的问题。Nutlin-3a是被证明可以有效抑制p53-MDM2相互作用的小分子抑制剂。在本文中,我们使用全原子分子动力学模拟,研究Nutlin-3a对p53-MDM2复合物的稳定性的影响。结果表明,通过引起p53Antiobesity medications和MDM2间Phe19-Gln72的氢键和Glu17-Lys94的盐桥发生的断PLX-4720小鼠裂,Nutlin-3a可以削弱p53和MDM2间的相互作用。我们的工作对Nutlin-3a小分子抑制剂的作用机制进行了说明,揭示了抗癌药物Nutlin-3a介导的p53-MDM2复合物亲和力降低的分子机制,并为针对p53蛋白的有效抗癌治疗提供了理论基础。

目的探讨超声造影和常规二维超声在诊断三阴性及非三阴性乳腺癌中的价值。方法选取乳腺癌患者98例为观察对象,根据其术后病理community-acquired infections切片结果将其分为两组,其中对照组47例均为非三阴性乳腺癌;研究组51例均为三阴性乳腺癌;全部患者入院时均实施超声造影和常规二维超声,分析并对比两组患者常规二维超声以及超声造影特征和超声造影定量参数的差异情况。结果两组患者常规二维超声selleck AY-22989情况中的病灶内部回声、边界及高回声晕特征对比,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者超声造影表现中增强强度、增强后边缘、增强后形态、增强后范围及灌注缺损的超声造影表现对比,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者肿块整体和灌注最selleck LGX818强区的Peak值均较对照组高,而灌注最强区的SharPness较对照组低,差异明显(P<0.05)。结论三阴性和非三阴性乳腺癌在常规二维超声和超声造影方面存在一定的差异,临床可以根据其影像学表现进行初步判断,必要时穿刺活检,避免误诊或漏诊的发生。

目的 探讨重楼皂苷I(PPI)对人乳腺癌敏感及耐药细胞膜通透性和流动性的影响。方法 将MCF-7、MCF-7/ADM细胞分别分为空白组(0μmol·L~(-1) PPI)和低、中、高、超高浓度实验组(0.3,1.0,3.0和10.0μmol·L~(-1) PPI)。用改良噻唑蓝法检测细胞的增殖抑制率，用锥虫蓝染色法、乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞膜通透性，用激光共聚焦显微镜检测细胞的荧光漂白恢复率。结果 对于MCF-7细胞，高浓度实验组和空白组3 h的抑制率分别为(14.79±9.50)%和(0.00±0.00)%,48 h的锥虫蓝阳染率分别为(91.28±3.51)%和(0.00±0.00)%,24 h的ocular infectionLDH释放率分别为(68.64±5.86)%和(6.48±0.50)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对于MCF-7/ADM细胞，高浓度实验组和空白组3 h的抑制率分别为(24.87±8.00)%和(0.00±0.00)%,48 h的锥虫蓝阳染率PLX-4720作用分别为(92.61±4.23)%和(0.00±0.00)%,24 h的LDH释放率分别为(67.58±8.20)%和(5.00±1.73)%,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.001)。MCF-7/ADM细胞的超高浓度实验组和空白组1 h的荧光漂白恢复率分别为(26.80±4.77)%和(43.52±3.35)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PPI可增加人乳腺癌敏感及耐药细胞的膜通透性，降低耐selleckchem Telaglenastat药细胞的膜流动性。

目的 探讨糖化血红蛋白（HbA1c）、氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）、心肌肌钙蛋白I(cTnI)联合检测对冠心病合并糖尿病经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后支架内再狭窄（ISR）的预测价值。方法 选取于2019年1月至2021年12月南阳市第二人民医院心内科确诊且行PCI术治疗的冠心病合并糖尿病患者256例，根据随访6个月是否发生ISR分为ISR组（n=45）和无ISR组（n=211）。检测血清HbA1c、NT-proBNP、cTnI水平，更多比较不同情况患者的血清HbA1c、NT-proBNP、c TnI水平。以血清HbA1c、NT-proBNP、cTnI水平作为自变量进行logistic回归分析，并采用受试者工作（ROC）曲线分析三者单独检测以及联合检测对PCI术后ISR的预测价值。结果 ISR组的血清HbA1c、NT-proBNP、cTnI水平高于无ISR组，差异具有统计学意义（t=6.678,3.220,5.268,P<0.AZD9291采购05）。糖尿病病情程度轻度的血清HbA1c、NT-proBNP、cTnI水平低于重度，差异有统计学意义（t=8.852,2.900,4.508,P<0.05），冠脉病变严重程度的血清HbA1c、NT-proBNP、c TnI水平为：轻度<中度<重度，差异具有统计学意义（P<0.05）immune memory。Logistic回归分析显示，血清HbA1c、NT-proBNP、cTnI水平是PCI术后ISR的重要影响因素（P<0.05）。血清HbA1c、NT-proBNP、c TnI预测CPI术后ISR的AUC分别为0.814、0.851、0.863，三者联合检测预测CPI术后ISR的AUC为0.925，优于三者单独预测。结论 血清HbA1c、NT-proBNP、cTnI与冠心病合并糖尿病患者的病情具有一定的联系，三者联合检测具有较高的预测价值，能够在临床上推广使用。

免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors, ICIs）通过阻断免疫检查点与其配体的结合，解除免疫检查点引起的免疫功能抑制，从而重新激活免疫细胞发挥抗肿瘤作用。目前已有多个ICIs在抗肿瘤临床应用中取得显著成效，是肿瘤治疗领域的突破性进展。靶向细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4)、程序性死亡受体1(programmed death-1, PD-1)及程序性死亡受体配体1(programmed death-ligand 1, PD-L1)的抑制剂已成功用于黑色素Emricasan瘤和非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤的临床治疗。基于CTLA-4和PD-1/PD-L1抗体药物Alisertib的巨大成功，掀起了comorbid psychopathological conditionsICIs研究的新浪潮。近年来发现了更多的免疫检查点如淋巴细胞激活基因3(lymphocyte activation gene-3, LAG-3)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3, TIM-3)和分化簇47(cluster of differentiation 47, CD47)等，针对这些蛋白的抑制剂正在开展临床前或临床研究。综述围绕目前广泛研究的免疫检查点及其抑制剂，介绍了各免疫检查点在肿瘤免疫中的作用及其抑制剂的临床研究进展。

背景:原发性干燥综合征(primary Sj(?)gren’s syndrome,p SS)是由于免疫紊乱导致外分泌腺破坏和多系统病变的自身免疫性疾病,目前尚缺乏可以早期调节免疫紊乱阻止疾病进展,又可以修复晚期受损的组织,且安全有效的治疗方法。在p SS发病机制中CD4~+T细胞的异常增殖、凋亡及分化起着非常关键的作用,与疾病的发生、发展及转归密切相关,因此如何抑制其异常增殖、凋亡及分化进而阻止疾病进展,成为探索p SS治疗的新方向。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有高度增殖、免疫调节及多向分化能力,已有研究发现MSCs可抑制p SS患者及动物模型中T细胞增殖及促炎因子分泌,减少唾液腺和泪腺淋巴细胞浸润,恢复外分泌腺功能。MSCs来源的外泌体(MSCs-derived exosomes,MSC-Exos)具有MSCs的免疫调节及组织修复作用,规避MSCs细胞治疗的局限性,有望成为治疗各种风湿性疾病的新策略,但MSC-Exos是否可以调节p SS发病的关键环节CD4~+T细胞异常增殖、凋亡及分化,以及其中所涉及的具体机制尚有待阐明,这将为探索MSC-Exos作为p SS新的治疗方法及其在临床转化中的应用提供重要的理论依据和实验基础。目的:提取及鉴定人脐带MSCs(umbilical cord-derived MSCs,UCMSCs)来源的Exos(UCMSC-Exos),研究UCMSC-Exos对p SS患者外周血CD4~+T细胞的免疫调节作用及其中涉及的具体机制。方法:1.UCMSC-Exos的提取及鉴定:分离UCMSCs,检测细胞形态、表面抗原表型及成脂、成骨能力。差速超速离心法分离UCMSC-Exos,检测UCMSC-Exos形态、粒径大小、蛋白浓度及表面标记。2.UCMSC-Exos对p SS患者外周血CD4~+T细胞发挥免疫调节作用:免疫磁珠分选外周血CD4~+T细胞,设置健康对照(health control,HC)组、p SS组、UCMSC-Exos不同浓度组(30μg/m L、60μg/m L、90μg/m L),CCK8法检测CD4~+T细胞增殖,确定最佳干预浓度。之后设置HC组、p SS组、UCMSC-Exos组,流式细胞仪检测CD4~+T细胞周期、凋亡、细胞亚群及炎性因子。3.UCMSC-Exos对p SS患者外周血CD4~+T细胞自噬水平的调控作用:生物信息学技术分析HC和p SS患者外周血CD4~+T细胞差异基因富集于自噬通路;设置HC组、p SS组、UCMSC-Exos组,透射电镜检测CD4~+T细胞自噬体,Western blot方法检测自噬蛋白,RT-PCR方法检测自噬基因。4.UCMSC-Exos通过自噬途径对p SS患者外周血CD4~+T细胞发挥免疫调节作用:设置p SS组、UCMSC-Exos组、自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)组、RAPA+UCMSC-Exos组、自噬抑制剂羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)组、HCQ+UCMSC-Exos组,流式细胞仪检测CD4~+T细胞周期、凋亡及细胞亚群。结果:1.UCMSC-Exos的提取及鉴定:UCMSCs呈贴壁生长、成纤维样形状;流式细胞仪检测UCMSCs高表达CD73、CD90、CD105,低表达CD45、CD34、HLA-DR;具有成https://www.selleck.cn/products/jnj-42756493-erdafitinib.html骨及成脂能力。UCMSC-Exos为囊泡样结构,茶托状,周围为脂质双分子结构,平均直径约130nm;NTA技术分析直径为144.4±44.0nm,平均137.7nm,粒子浓度为2.0×10~(11)particles/m L;BCA法检测蛋白浓度为1.00μg/μL;Western blot法检测表面标记为CD9、CD63、TSG101阳性,calnexin阴性,而UCMSCs为CD9、calnexin阳性,CD63、TSG101阴性。2.UCMSC-Exos对p SS患者外周血CD4~+T细胞发挥免疫调节作用:⑴免疫磁珠分选CD4~+T细胞纯度达98.29%。⑵p SS组外周血CD4~+T细胞增殖较HC组增强;UCMSC-Exos(60μg/m L、90μg/m L)组增殖较p SS组降低,以90μg/m L作用最强,以此为后续实验干预浓度。⑶流式细胞仪检测p SS组外周血CD4~+T细胞增殖较HC组增加,并且处于G0/G1期的细胞比例减少,处于S期的比例增加;UCMSC-Exos组CD4~+T细胞增殖较p SS组降低,并且处于G0/G1期的细胞比例增多,处于S期的比例减少;三组之间处于G2/M期的细胞比例无显著差异。⑷p SS组外周血CD4~+T细胞早期、晚期及总体凋亡比例较HC组增加;UCMSC-Exos组早期、晚期及总体凋亡比例较p SS组降低,较HC组无显著差异。⑸三组Th1细胞比例无显著差异。与HC组比较,p SS组Th2、Treg细胞比例降低,Th17细胞比例、Th1/Th2、Th17/Treg升高;与p SS组比较,UCMSC-Exos组Th17细胞比例、Th1/Th2、Th17/Treg降低,Treg细胞比例升高,Th2细胞比例呈升高趋势,但无统计学差异。⑹与HC组比较,p SS组IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、IL-17A、IL-17F表达升高,TGF-β表达降低,IL-10呈下降趋势,但无统计学差异;与p SS组比较,UCMSC-Dinaciclib溶解度Exos组IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-17A、IL-17F表达降低,IL-10、TGF-β表达升高,IL-2呈下降趋势,但无显著差异;三组IL-4、IL-22无显著差异。3.UCMSC-Exos对p SS患者外周血CD4~+T细胞自噬水平的调控作用:⑴采用生物信息学技术分析HC及p SS患者外周血CD4~+T细胞转录组数据,共获得244个差异表达的基因,KEGG富集分析发现差异基因富集于自噬通路。⑵p SS组CD4~+T细胞中观察到自噬溶酶体,而HC及UCMSC-Exos组无此现象。与HC组比较,p SS组Beclin1、Atg5、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin1 m RNA、Atg5 m RNA、LC3Ⅱm RNA表达升高;与p SS组比较,UCMSC-Exos组这些指标均降低,且与HC组比较无显著差异。4.UCMSC-Exos通过自噬途径对p SS患者外周血CD4~+T细胞发挥免疫调节作用:⑴与p SS组比较,UCMSC-Exos、RAPA、RAPA+UCMSC-Exos组CD4~+T细胞增殖指数降低;与RAPA组比较,RAPA+UCMSC-Exos组CD4~+T细胞增殖指数进一步降低。与p SS组比较,UCMSC-Exos、HCQ、HCQ+UCMSC-Exos组CD4~+T细胞增殖指数降低;与HCQ组比较,HCQ+UCMSC-Exos组CD4~+T细胞增殖指数进一步降低。⑵与p SS组比较,UCMSC-Exos组CD4~+T细胞早期凋亡比例降低,RAPA组CD4~+T细胞早期凋亡比例升高;与RAPA组比较,RAPA+UCMSC-Exos组CD4~+T细胞早期凋亡比例下降。与p SS组比较,UCMSC-Exos、HCQ、HCQ+UCMSC-Exos组CD4~+T细胞早期凋亡比例降低;与HCQ组比较,HCQ+UCMSC-Exos组CD4~+T细胞早期凋亡比例进一步降低。⑶各组Th1、Th2细胞比例无显著差异。与p SS组比较,UCMSC-Exos组Th17细胞比例、Th17/Treg降低,Treg细胞比例升高;RAPA组Treg细胞比例降低,Th17细胞比例呈下降趋势,Th17/Treg呈升高趋势,但无统计学差异;与RAPA组比较,RAPA+UCMSC-Exos组Th17细胞比例、Th17/Treg降Barometer-based biosensors低,Treg细胞比例升高。与p SS组比较,UCMSC-Exos、HCQ、HCQ+UCMSC-Exos组Th17细胞比例、Th17/Treg降低,Treg细胞比例升高。与HCQ组比较,HCQ+UCMSC-Exos组Th17细胞比例、Th17/Treg进一步降低,Treg细胞比例进一步升高。结论:1.UCMSCs符合国际细胞治疗学会定义的MSCs标准;UCMSC-Exos符合MSCs来源的Exos特点。2.UCMSC-Exos抑制p SS患者外周血CD4~+T细胞过度增殖及过度凋亡,并将CD4~+T细胞阻滞于G0/G1期,抑制其进入S期;下调Th17细胞比例,上调Treg细胞比例,恢复Th1/Th2及Th17/Treg平衡;抑制CD4~+T细胞相关促炎因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-17A、IL-17F分泌,促进抗炎因子IL-10、TGF-β分泌,对CD4~+T细胞发挥免疫调节作用。3.p SS患者外周血CD4~+T细胞自噬水平升高,UCMSC-Exos可降低其自噬水平。4.UCMSC-Exos通过自噬途径调节p SS患者外周血CD4~+T细胞增殖及早期凋亡,抑制Th17细胞分化,促进Treg细胞分化,恢复Th17/Treg平衡。