RAF信号通路

氨肽酶(Aminopeptidase,AP,EC 3.4.11)点击此处是一类外切蛋白酶,能够特异性降解多肽链和蛋白质N末端疏水性氨基酸残基,释放出游离氨基酸。氨肽酶能够有效降低蛋白水解液的苦味,改善食品风味,提高营养价值。它与碱性蛋白酶等内切酶协同作用,可以促进蛋白质的深度水解,应用于多种活性肽的制备。本研究筛选到点击此处了一株产氨肽酶地衣芽孢杆菌,并克隆其编码基因,在Escherichia coli BL21和Bacillus subtilis 168中高效表达,研究了重组酶的酶学性质,及其与碱性蛋白酶协同作用高效水解大豆分离蛋白和酪蛋白,产生小分子活性肽和游离氨基酸。具体研究内容包括:(1)产氨肽酶菌株的筛选鉴定及基因克隆。利用酪蛋白平板水解透明圈法和酶活测定方法相结合,从土壤中筛选到一株产氨肽酶菌株。通过对菌株的形态和生理生化特性进行分析,以及16S r DNA测序结果比对,鉴定该产氨肽酶菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus licheniformis E7。利用染色体步移技术从B.licheniformis E7基因组DNA中克隆出完整的氨肽酶基因pep N,全长为1,4Congenital CMV infection46 bp,编码481个氨基酸。(2)重组菌E.coli BL21/p ET28-pep N和B.subtilis 168/p MA0911-pep N构建与重组蛋白的表达。以p ET-28a(+)和p MA0911为表达载体,以E.coli BL21(DE3)和B.subtilis 168为表达宿主,构建重组氨肽酶表达菌株E.coli BL21/p ET28-pep N和B.subtilis 168/p MA0911-pep N。SDS-PAGE结果表明重组氨肽酶在E.coli BL21胞内表达(命名为Ec Pep N),在B.subtilis 168胞外和胞内表达(命名为Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)),分子量约52 k Da,与理论值相符。Ec Pep N在0.1 m M IPTG和20℃诱导条件下表达最好,Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)在30℃诱导条件下表达最佳。(3)重组氨肽酶的纯化及酶学性质分析。利用镍离子亲和层析法纯化重组酶,经100 m M咪唑洗脱获得目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的重组酶在52 k Da左右显示为单一条带。酶学性质研究结果显示,三种酶的最适反应条件分别为:Ec Pep N为p H 9.0、50℃,Bs Pep N~(ex)为p H 9.0、45℃,Bs Pep N~(in)为p H 7.0、45℃,Ec Pep N、Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)最高比酶活分别为365.04、401.33和113.77 U·mg~(-1)。它们在p H 6.0-9.0范围内较稳定,在45℃条件下的半衰期分别为36 h、6 h和12 h。Ec Pep N表现出最佳的耐盐性,在3 M Na Cl溶液中孵育22天后,酶活力高于55%。以7种底物进行酶活测试,Ec Pep N、Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)对底物Ala-p NA比酶活最高,是一种丙氨酸氨肽酶,它们对底物Ala-p NA的K_m值分别为1.20、1.01和1.09 m M,Ec Pep N和Bs Pep N~(ex)的k_(cat)/K_m值大约是Bs Pep N~(in)的4倍。(4)重组氨肽酶与碱性蛋白酶协同水解大豆分离蛋白和酪蛋白的产物谱分析。以商品化氨肽酶为对照,重组氨肽酶与商品化碱性蛋白酶协同催化大豆分离蛋白的水解液中,75%以上为分子量小于500 Da的多肽,2,000 mg·L~(-1)以上的多种游离氨基酸,其总量是碱性蛋白酶单独催化的50倍以上。双酶协同水解酪蛋白的水解液中,小于500 Da的多肽占78%左右,其中小于150 Da的小肽含量是碱性蛋白酶单酶水解时的6倍。不同表达形式的重组氨肽酶Pep N的蛋白水解效果差别不大,且与商品化亮氨酸氨肽酶的蛋白水解效率相当。该研究为提高富含蛋白质生物资源的增值和蛋白质的深度水解提供了重要研究途径。

目的 观察桃红四物汤(THD)对紫杉醇所致大鼠外周神经损伤模型的作用并探讨相关的潜在机制。方法 将雌性AD biomarkersSD大鼠随机分为4组(对照组、模型组、THD低剂量组、THD高剂量组),每组6只。对照组以外的3组大鼠分别在第1、3、5、7日腹腔注入紫杉醇(8 mg/kg),诱导外周神经损伤模型,大鼠机械刺激撤足阈值<4 g为造模成功;THD低、高剂量组在造模同时灌胃给予相应浓度(1 g/ml、2g/ml)的桃红四物汤(103-MA溶解度 ml/kg),2次/d,连续4周;给药结束后检测各组大鼠坐骨神经组织病理,对机械、冷、热刺激的敏感度,坐骨神经部位炎性因子白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和抗氧化因子还原型谷胱甘肽(GSH)及脂质过氧化因子硫代巴比妥酸反应物(TBARS)水平,并检测坐骨神经部位髓鞘碎片及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠的冷、热刺激敏感度和机械痛觉阈值均降低(P<0.05);坐骨神经病理结构显著破坏,且存在炎性浸润,髓鞘碎片增加(P<0.05);炎性因子IL-6、TNF-α和TRABS水平升高(P<0.05),GSH水平下降(P<0.05);自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和Beclin1表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,THD低剂量组和THD高剂量组大鼠的冷、热刺激敏感度和机械痛觉阈值均增高(P<0.05);坐骨神经病理结构JNJ-42756493改善,仍存在炎性浸润,髓鞘碎片减少(P<0.05);炎性因子IL-6、TNF-α和TRABS水平降低(P<0.05),GSH水平增高(P<0.05);LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和Beclin1表达水平增高(P<0.05)。与THD低剂量组比较,THD高剂量组冷、热刺激敏感度和机械痛觉阈值均增高(P<0.05),坐骨神经髓鞘碎片减少(P<0.05),LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和Beclin1表达水平增高(P<0.05)。结论 THD可缓解紫杉醇造成的大鼠外周神经损伤,其机制可能与降低炎性反应、诱导自噬清除损伤碎片而促进神经损伤恢复有关。

[目的]开发同时检测生乳中吡虫啉（Imidacloprid）、吡唑醚菌酯（Pyrazole ether ester）、氟虫腈（Fluorine worm nitrile）3种农药残留的胶体金免疫层析的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，冻干法制备胶体金标抗体冻干粉，置于微孔杯内，复溶后，吸取全部反应液于胶体金试纸条样品垫上，经层析，在免疫层析试纸条上显示结果。[结果]吡虫啉、吡唑醚菌酯、氟虫腈3种农药检测检测下限分别为0.1 Infiltrative hepatocellular carcinomamg/kg,0.03mg/kg,0.02 mg/kg，保质期为1年，符合《GB2763—2021食品安全国家selleckchem标准食品中农药最大残留限量》对生乳中农药残留做出明确限量规定吡虫啉、吡唑醚菌酯、氟虫腈最大残留量0.1 mg/kg,0.03 mg/kg,0.02 mg/kg要求。[结论]该方法操作简单，快速灵敏，稳定准确，可以作为前期农残检selleck NMR测的快速筛查手段。

目的 分析老年冠心病合并慢性便秘与Disease pathology心率变异性的相关性。方法 选取2020年8月—2021年1月中日友好医院中西医结合心脏科经冠状动脉造影诊断为冠心病的老年病人206例。根据病人是否符合慢性功能性便秘分为合并慢性功能性便秘的老年冠心病(合并组)和未合并慢性功能性便秘的老年冠心病(冠心病组),各103例。采用问卷调查表收集病人基本信息、一般情况、病史信息、中医证候信息、睡眠、焦虑、抑https://www.selleck.cn/products/Cisplatin.html郁情况等临床资料。结果 合并组睡眠质量评分、老年焦虑评分和老年抑郁评分均高于冠心病组(P<0.001)。合并组冠状动脉狭窄程度(Gensini积分)高于冠心病组(P<0.05)。合并组其他证素(热蕴证、阴虚证、寒凝证)多于冠心病组(P<0.05)。合并组每分钟R-R间期标准差(SDNN)、5 mindiABZI STING agonist半抑制浓度平均R-R间期标准差(SDANN Index)、每分钟平均R-R间期标准差(SDNN Index)、相邻R-R间期差的均方根(rMSSD)、相邻两个正常窦性R-R间期差值大于50 ms的个数所占百分比(pNN50)、三角指数、总功率、极低频、低频(LF)、高频(HF)、最小频域功率小时、最大频域功率小时低于冠心病组，最大QTc间期高于冠心病组(P<0.05)。老年冠心病合并慢性便秘病人胃肠道症状评定量表(GSRS)得分与心率变异性相关指标(SDNN、SDANN Index、SDNN Index、三角指数、总功率、极低频、LF)呈负相关(P<0.05)。结论 合并慢性便秘的老年冠心病病人睡眠及心理障碍增多，自主神经功能紊乱，冠状动脉病变严重。在中医证素上，老年冠心病合并慢性便秘病人以气虚证、阳虚证居多，中医证素复杂。

目的 探讨激素受体状态在不同临床特征的亚组中对Her-2阳性乳腺癌新辅助化疗效果的影响。方法收集北京儿童医院顺义妇儿医院2011年1月至2018年12月141例接受新辅助化疗的Her-2阳性乳腺癌患者进行回顾性分析，根据年龄、肿瘤T分期、淋巴结（LN）情况、Ki-67指数、是否抗Her-2治疗将患者分成不同的亚组，对每个亚组中两种激素受体状态的病理完全缓解（pCR）与非病理完全缓解（non-p此网站CR）的构成比进行比较。统计学采用两个独立样本的Pearson χ~2检验或Fisher确切概率法。结果 入组141例Her-2阳性乳腺癌患者新辅助化疗后均可行疗效评价，总体pCR率为44.0%(6https://www.selleck.cn/products/kpt-330.html2/141)。总体上，HR阴性的患者较HR阳性患者更容易在新辅助化疗后达到pCR(P=0.011)。亚组分析中，在年龄≤50岁、肿瘤T分期≤2 callergy and immunologym、LN阴性、Ki-67≤30%、应用抗Her-2治疗的亚组，HR阴性的患者较HR阳性患者更容易在新辅助化疗后达到pCR(P=0.005、0.032、0.045、0.017、0.003)。结论 对于Her-2阳性乳腺癌，HR状态是影响新辅助化疗效果的重要因素，HR阴性的患者较HR阳性患者更容易在新辅助化疗后达到pCR，尤其是在肿瘤负荷低、同时应用抗Her-2治疗的年轻患者中，这种优势更明显。

目的 探讨双硫仑(DSF)协同奥沙利铂(Oxa)联合用药对胃癌细胞BGC-823的协同抑制作用。方法 CCK-8实验检测细胞活力，CompuSyn软件做Fraction-Effect协同作用曲线评价联用效果；AnnexinV/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率；碘化吡啶(PI)染色流式细胞术检测细胞死亡率；染色流Modeling human anti-HIV immune response式细胞术检测脂质过氧化自由基(LipROS)水平变化；qRT-PCR检测铁死亡标记物PTGS2、GPX4、SLC7A11的mRNA表达水平变化。结果 DSF与Oxa单用或联合用药可通过时间和剂量依赖性抑制胃癌细胞BGC-823增殖，两药联用可Staurosporine IC50发挥明显协同作用，诱导BGC-823胃癌细胞凋亡和铁死亡。DSF与Oxa联用可诱导LipROS合成增多，导致促获悉更多铁死亡调控基因PTGS2 mRNA表达水平明显上升，抑铁死亡调控基因GPX4、SLC7A11的mRNA表达水平明显下降。结论 DSF与Oxa联用可抑制胃癌BGC-823细胞活力，引起BGC-823细胞凋亡和铁死亡。

目的:研究miR-299-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法:以乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,q RT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中miR-299-3p和PAX3 m RNA的表达,Western blot检测MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中PAX3、增殖相关蛋CL 318952临床试验白Ki-67、PCNA以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,CCK-8法和流Smoothened Agonist式细胞术分别测定MDA-MB-231reverse genetic system和MDA-MB-468细胞增殖吸光度值和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-299-3p和PAX3的靶向关系。结果:与乳腺上皮细胞MCF-10A相比,在乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468中miR-299-3p的含量显著减少(P<0.05),而PAX3 m RNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05);过表达miR-299-3p可下调细胞吸光度值,提高细胞凋亡率,降低增殖凋亡相关蛋白Ki-67、PCNA和Bcl-2含量,上调Bax含量;miR-299-3p靶向负调控PAX3的表达;敲减PAX3可下调Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白含量,促进BAX表达,降低细胞吸光度值,提高细胞凋亡率;过表达PAX3逆转了miR-299-3p过表达对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的作用。结论:miR-299-3p通过靶向PAX3调控MDA-MB-231细胞增殖和凋亡,miR-299-3p可能是乳腺癌的潜在分子靶点。

目的:初步探索TLR9通路在缺氧诱导TAMs浸润和肝癌进展中的作用,研究结果将为深入探究肝癌微环境中缺氧与TAMs相互作用的分子机制提供新的见解。方法:通过Western blot、qRT-PCR、IHC和公共数据库等分析缺氧标志分子HIF-1α和M2型TAMs标志物CD163在肝癌组织样本中的表达及其相关性,并分析其与肝癌患者预后的关系。构建原位肝癌小鼠模型,采用HE、qRT-PCR、IHC等实验分析小鼠组织中缺氧对TAMs浸润和肝癌进展的影响。采用Western blot、IF、FCM等实验方法分析肝癌细胞缺氧对TAMs M2型极化和募集Against medical advice的影响。通过Western blot、FCM等实验探讨缺氧通过TLR9通路诱导TAMs M2型极化的作用机制。结果:1、Western blot、qRT-PCR、IHC等实验结果发现肝癌患者肿瘤组织中HIF-1α和M2型TAMAdavosertibs在HCC组织中浸润显著增加。公共数据库分析发现,在肝癌组织中HIF-1α与CD163的表达呈显著正相关,并与肝癌患者预后较差相关;2、构建原位肝癌小鼠模型结果表明,缺氧促进TAMs浸润和肝癌进展。3、qRT-PCR、Western blot、IF和FCM实验结果发现肝癌细胞缺氧促使TAMs向M2型极化,同时采用迁移实验证实了肝癌细胞缺氧促进TAMs募集;4、Weste点击此处rn blot实验结果发现肝癌细胞缺氧条件培养基孵育巨噬细胞后,明显增加了TLR9及其下游相关分子的磷酸化水平;使用TLR9干涉片段或拮抗剂(ODN INH-18)能够显著抑制缺氧条件培养基介导的TAMs M2型极化。结论:缺氧通过激活TLR9通路促进TAMs的浸润和肝癌进展。

目前,乳腺癌已经成为女性群体中非常常见的一种恶性肿瘤,依据以往的调查发现,目前我国绝大部分城市中乳腺癌已经成为了恶性肿瘤的首位,同时也是危害女性健康的头号杀手。对乳腺癌患者进行早期手术治疗是提升预后效果及确保患者身体健康的关键,但是许多患者在发现时就已经处于immune cell clusters乳腺癌晚期,大大影响了治疗的效果。因此,对科学化和准确化的影像学方式进行探究进而提升乳腺癌患者早期检出率具有非常重要的现实意义。自20世纪50年代以来,乳腺癌疾病患者开始采取超声技术进行诊断,迄今已经有60多年。乳腺癌超声检查不会被乳腺组织类型所限制,具有图像清晰、价格低、无辐射、方便简单和无创等优势,是目前运用范围最为广泛的一种影像学检查方式。近几年来,超声弹性成像、实时三维超声成像技术、萤火SBE-β-CD化学结构虫技术以及超声造影等超声新技术也逐渐研发出来,逐渐被应用于乳腺此网站癌的诊断中,大大提升了超声检查在乳腺疾病诊断的准确率、灵敏度及特异度,具有非常广阔的应用前景。本文正是基于此,对乳腺疾病超声影像诊断研究进展进行了综述,并且分析其对常见乳腺病变诊断的问题。

目的：分析孕妇产前常见传染病指标检测情况，及时采取干预措施，保证优生优育。方法：选取2020年3月至2021年12月在盐城市第三人民医院进行产检的86例孕妇为研究对象，对其体检中四项传染病指标[乙型肝炎病毒（HBV寻找更多）、丙型肝炎病毒（HCV）、梅毒螺旋体（TP）及人类免疫缺陷病毒（HIV）]检测结果进行分析和总结，观察孕妇以上四种传染病指标感染情况。结果：86例孕妇共计检出乙型肝炎5例（5.81%）、丙型肝炎2例（2.32%）、梅毒1例（1.16%），未检出艾滋病，同时2020年3—12月和2Tissue biomagnification021年1—12月乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒和艾滋病的检出率差异较selleck合成小，无统计学意义（P>0.05）;36～40岁阶段孕妇乙型肝炎感染率明显高于20～35岁（P<0.05），两个年龄段的丙型肝炎和梅毒的感染率无明显差异（P>0.05）;86例孕妇中，乙型肝炎合并丙型肝炎的患者共计2例（2.33%），乙型肝炎合并梅毒的患者共计1例（1.16%）；乙型肝炎孕妇主要感染有2种模式，共计4例，占全部乙型肝炎感染的80%，感染模式以大三阳为主，即乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）和乙型肝炎核心抗体（HBcAb）均为阳性，所占比例为60.00%，其次为小三阳，即HBsAg、乙型肝炎e抗体（HBeAb）和HBcAb均为阳性，所占比例为20.00%。结论：孕妇产前检查中，常见传染病包括乙型肝炎、丙型肝炎和梅毒，其中乙型肝炎以大三阳和小三阳为主，一经检查发现，应及时采取干预措施，保证优生优育。