RAF信号通路

目的：舒芬太尼对缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)引起的心肌和肝损伤具有良好的保护作用，但其对肾的保护作用尚不清楚。本研究旨在探讨舒芬太尼是否可以预防IR引起的急性肾损伤(acute kidney injury,Aarmed servicesKI)，并确定其疗效是否与miR-145介导的自噬有关。方法：40只大鼠随机分为5组(每组8只)：假手术组、IR组、舒芬太尼组、舒芬太尼+miR-145抑制剂对照组(舒芬太尼+anti-NC组)和舒芬太尼+miR-145抑制剂组(舒芬太尼+antimiR-145组)。除假手术组外，其余组均建立了由IR诱导的大鼠AKI模型。舒芬太尼组、舒芬太尼+anti-NC组和舒芬太尼+anti-miR-145组在IR处理前30 min通过股静脉注射舒芬太尼(剂量为1μg/kg)，后两组大鼠在舒芬太尼预处理前通过尾静脉注射miR-145抑制剂对照或anti-miR-145(剂量为80 mg/kg)。评估大鼠肾的结构和功能，并测量自噬相关蛋白的蛋白Talazoparib价格水平、氧化应激水平和细胞凋亡水平。结果：与IR组相比，舒芬太尼组改善了肾结构和功能，并且血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、尿肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase related lipid transporter,NGAL)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和ROS水平均显著降低(均P<0.05)。此外，与IR组相比，舒芬太尼组肾组织肌球蛋白样BCL2结合蛋白(coiled-coil, myosin-like BCL2 interacting protein,Beclin-1)和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)水平均显著增加(均P<0.05)，并且肾组织中的细胞凋亡显著减少(P<0.05)。与舒芬太尼+anti-NC组相比，舒芬太尼+anti-miR-145组BUN、Cr、KIM-1、NGAL、TNF-α、IL-1β、IL-6和ROS水平均显著增加(均P<0.05)，肾组织Beclselleck PS-341in-1和LC3水平均显著降低(均P<0.05)，并且肾组织中的细胞凋亡显著增加(P<0.05)。结论：舒芬太尼可预防IR引起的AKI，其作用机制与上调miR-145介导的自噬有关。

骨肉瘤是常见的原发性恶性骨肿瘤,多发于儿童和青少年。目前临床上治疗骨肉瘤的化疗药物具有副作用高、破坏机体免疫力的缺点,且患者易产生化疗耐药性,降低治疗效果。因此,尝试新型药物,改善骨肉瘤的治疗效果成为研究重点。传统中药成分多样,具有毒副作用低、同时调节多靶点、降低耐药性等优势。鹿茸是我国珍贵中药,可抗肿瘤、保护神经系统、保护骨骼、增强免疫力,研究表明,鹿茸成分复杂,主要由鹿茸多肽等活性成分发挥主要作用。但目前有关鹿茸活性成分抗骨肉瘤的物质基础及作用机制的研究少见报道。本文拟通过网络药理学及体外细胞实验,探究鹿茸多肽及鹿茸其他活性成分调控骨肉瘤细胞死亡和迁移侵袭的作用机制。研究内容如下:(1)网络药理学分析获取鹿茸治疗骨肉瘤的物质基础和分子机制。结果发现TNF-α、Notch1等可作为鹿茸治疗骨肉瘤的关键靶点;17β-雌二醇和雌酮等可作为鹿茸治疗骨肉瘤的关键成分。TNF-α介导的坏死性凋亡可促进肿瘤细胞死亡,Notch1介导的NotchInsulin biosimilars信号通路可调控肿瘤细胞的迁移和侵袭,推测鹿茸活性成分可通过这两种途径调控骨肉瘤细胞的死亡和迁移侵袭。(2)体外细胞实验探究17β-雌二醇、雌酮及鹿茸多肽调控骨肉www.selleck.cn/products/VX-765瘤细胞死亡的机制。MTT实验结果发现,17β-雌二醇和雌酮均可有效抑制MG63细胞的增殖活性。酶联免疫吸附实验发现,17β-雌二醇和雌酮能够上调MG63细胞中TNF-α、RIPK3和MLKL蛋白的表达,TNF-α、RIPK3和MLKL介导骨肉瘤细胞坏死性凋亡。说明17β-雌二醇和雌酮可以促进骨肉瘤细胞MG63中坏死性凋亡的发生。同样通过酶联免疫吸附实验发现,鹿茸多肽也可上调骨肉瘤细胞MG63中TNF-α、RIPK3和MLKL的表达进而促进坏死性凋亡的发生。(3)体外细胞实验探究鹿茸多肽调控骨肉瘤细胞迁移侵袭的机制。细胞克隆形成实验结果显示,80μg/m L鹿茸多肽可以抑制骨肉瘤细胞MG63、U2OS的增殖能力;细胞划痕实验和Transwell实验结果显示,鹿茸多肽显著抑制骨肉瘤细胞MG63、U2OS的迁移和侵袭能力;Western blot和q PCR实验结果显示,20μg/m L和80μg/m L鹿茸多肽处理细胞后,细胞内Notch1、Hes1蛋白及其m RNA表达量明显下降,说明鹿茸多肽可以抑制骨肉瘤细胞MG63、U2OS中NotchRepSox浓度信号通路的表达。综上,鹿茸多肽、17β-雌二醇和雌酮可通过促进坏死性凋亡的发生进而促进骨肉瘤细胞死亡,鹿茸多肽下调Notch信号通路的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。

随着耐药菌及后抗生素时代的出现,人们越来越迫切的需要一类抗生素的替代品,抗菌肽是最具有潜力的替代品之一。抗菌肽是一种具有光谱抑菌活性,序列较短的多肽类化合物化合物,其使致病菌产生耐药性的速度远低于抗生素。然而,抗菌肽也存在着一些问题。可以通过对其进行末端修饰进行改造。本文以固相合成法合成(LLKK)_3抗菌肽,并以此为模板对其末端进行了修饰,并对修饰后的抗菌肽的抑菌活性、溶血活性、细胞毒性、稳定性、抑菌机Liraglutide理及其在乳胶膜中应用进行了研究。其主要研究内容及结果如下:(1)以(LLKK)_3为模板,在其N-末端加Gly和C-末端加Leu,得到四条抗菌肽序列分别为:P1:(LLKK)_3,P2:G(LLKK)_3,P3:(LLKK)_3L,P4:G(LLKK)_3L。通过固相化学合成,液质联用检测得到实际分子量为1466.35、1523.40、1580.40和1631.20,均与其理论分子量相符,表明合成的四条肽皆为目标肽。四种抗菌肽的疏水值和疏水力矩大小顺序均为(LCCRG 81045分子量LKK)_3L>G(LLKK)_3L>(LLKK)_3>G(LLKK)_3。通过抑菌圈实验、MIC和CFU测定,结果表明四种抗菌肽对E.coli、S.aureus和C.albicans皆有明显的抑菌活性;其中G(LLKK)_3L的抑菌效果最好,而(LLKK)_3和G(LLKK)_3的抑菌效果相对较差。(2)分析了四种抗菌肽的温度、pH、胃蛋白酶和时间稳定性,以及溶血活性和细胞毒性。结果表明,四种抗菌肽均具有较好的热稳定性、pH稳定性和时间稳定性;然而它们的抑菌活性会受到人工模拟胃液较大的影响,其中G(LLKK)_3L的抗菌活性受胃液的影响较小。另外,G(LLKK)_3L和G(LLKK)_3的溶血活性和细胞毒性小于(LLKK)_3和(LLKK)_3L,表明N-末端添加Gly能够降低溶血活性和细胞毒性。(3)分析了G(LLKK)_3L对E.coli、S.aureus和C.albicans细胞形态、细胞壁成分、细胞膜损伤、DNA阻滞与合成以及蛋白质合成的影响,探讨G(LLKK)_3L对致病菌的抑菌机理。扫描电镜结果表明,E.coli由表面光滑、完整的杆状变得皱缩和坍塌;S.aureus由圆润的圆形向内皱缩,变为扁平向内坍塌状;C.albicans由光滑的椭圆状变为梭状。E.coli、S.aureus和C.albicans细胞壁红外光谱吸收透过率明显低于对照,表明G(LLKK)_3L抗菌肽抑制了细胞壁成分的合成。荧光显微染色和流式细胞术结果表明,随着G(LLKK)_3L浓度的增加,其对E.coli、S.aureus和C.albicans细胞膜的损伤率也增加,且G(LLKK)_3L对E.coli和S.aureus细胞膜的损伤作用大于白色念珠菌。DNA和蛋白质电泳结果表明,G(LLKK)_3L能够阻滞DNA的迁移,能够抑制E.coli和S.aureus基因组DNA的合成,而对C.albicans基因组DNA没有影响。G(LLKK)_3L抗菌肽能够抑制E.coli、S.aureus和C.albicans胞内部分蛋白质合成或造成其降解,导致部分条带缺失和胞内蛋白质含量减少。(4)采用甘油对天然乳胶膜进行了改性,在改性后的乳胶膜中添加G(LLKK)_3L抗菌肽制备乳胶抗菌膜,并对天然乳胶甘油抗菌肽膜进行了表征和特性分析。结果表明,添加10%的甘油可以有效的改变乳胶膜的柔软性,膜中若甘油含量较高,会从膜中析出。G(LLKK)_3L抗菌肽添加量对膜的拉伸性能无影响,但过高的抗菌肽添加量会产生细胞毒性,适宜的抗菌肽添加X-liked severe combined immunodeficiency量为每毫升成膜液600μg。通过改性,增强了其水蒸气透过率,降低了吸水性与保水性。扫描电镜观察结果表明,甘油能够改变乳胶膜的致密性,使乳胶甘油膜和乳胶甘油抗菌肽表面出现密集的孔洞;红外光谱分析表明,乳胶、甘油和抗菌肽不是以共价键结合,这均有利于抗菌肽从膜中释放。改性后的乳胶甘油抗菌肽膜具有较好缓释性,并对大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)、白色念珠菌(Candida albicans,C.albicans)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)均具有一定的抑制作用。

目的 采用超声超微血管成像(SMI)技术探讨不同中医证型乳腺癌患者的血流特征。方法 选取2017年6月至2021年8月于黑龙江中医药大学附属第一医院就诊并经术后病理确D-Lin-MC3-DMA采购诊的肿块型乳腺癌患者62例(恶性组)和乳腺良性肿瘤患者50例(良性组)，将62例乳腺恶性肿瘤患者依据中医证型分为肝郁痰凝证组(24例)、冲任失调证组(20 例)、正虚毒盛证组(18例)。手术前各组均给予常规超声和SMI检查，分析比较各组间的二维超声及其超微血流特征。结果 二维超声结果显示恶性3个证型组及良性组4组间肿块大小、微钙化、后方回声及有无淋巴结转移情况的差异均有统计学意义(P均<0.01)。良性组与恶性3个证型组比较，SMI 血管数目差异有统计学意义(P<0.05)。肝郁痰凝证组SGSK2118436体内实验剂量MI血管数目0级患者比例高于冲任失调证组和正虚毒盛证组，正虚毒盛证组SMI血管数目Ⅲ级患者比例高于肝郁痰凝证组和冲任失调证组、Ⅰ级患者比例低于肝郁痰凝证组和冲任失调证组，差异均有统计学意义(P均<0.05)；病理组织学分级肝郁痰凝证组Ⅰ级患者比例较高，冲任失调证组Ⅱ级患者比例较高，正虚毒盛Medial extrusion证组Ⅲ级患者比例较高。结论 SMI可以有效判定不同中医证型乳腺癌患者超微血管特征，能够为乳腺癌中医辨证施治提供可靠依据。

氨肽酶(Aminopeptidase,AP,EC 3.4.11)点击此处是一类外切蛋白酶,能够特异性降解多肽链和蛋白质N末端疏水性氨基酸残基,释放出游离氨基酸。氨肽酶能够有效降低蛋白水解液的苦味,改善食品风味,提高营养价值。它与碱性蛋白酶等内切酶协同作用,可以促进蛋白质的深度水解,应用于多种活性肽的制备。本研究筛选到点击此处了一株产氨肽酶地衣芽孢杆菌,并克隆其编码基因,在Escherichia coli BL21和Bacillus subtilis 168中高效表达,研究了重组酶的酶学性质,及其与碱性蛋白酶协同作用高效水解大豆分离蛋白和酪蛋白,产生小分子活性肽和游离氨基酸。具体研究内容包括:(1)产氨肽酶菌株的筛选鉴定及基因克隆。利用酪蛋白平板水解透明圈法和酶活测定方法相结合,从土壤中筛选到一株产氨肽酶菌株。通过对菌株的形态和生理生化特性进行分析,以及16S r DNA测序结果比对,鉴定该产氨肽酶菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus licheniformis E7。利用染色体步移技术从B.licheniformis E7基因组DNA中克隆出完整的氨肽酶基因pep N,全长为1,4Congenital CMV infection46 bp,编码481个氨基酸。(2)重组菌E.coli BL21/p ET28-pep N和B.subtilis 168/p MA0911-pep N构建与重组蛋白的表达。以p ET-28a(+)和p MA0911为表达载体,以E.coli BL21(DE3)和B.subtilis 168为表达宿主,构建重组氨肽酶表达菌株E.coli BL21/p ET28-pep N和B.subtilis 168/p MA0911-pep N。SDS-PAGE结果表明重组氨肽酶在E.coli BL21胞内表达(命名为Ec Pep N),在B.subtilis 168胞外和胞内表达(命名为Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)),分子量约52 k Da,与理论值相符。Ec Pep N在0.1 m M IPTG和20℃诱导条件下表达最好,Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)在30℃诱导条件下表达最佳。(3)重组氨肽酶的纯化及酶学性质分析。利用镍离子亲和层析法纯化重组酶,经100 m M咪唑洗脱获得目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的重组酶在52 k Da左右显示为单一条带。酶学性质研究结果显示,三种酶的最适反应条件分别为:Ec Pep N为p H 9.0、50℃,Bs Pep N~(ex)为p H 9.0、45℃,Bs Pep N~(in)为p H 7.0、45℃,Ec Pep N、Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)最高比酶活分别为365.04、401.33和113.77 U·mg~(-1)。它们在p H 6.0-9.0范围内较稳定,在45℃条件下的半衰期分别为36 h、6 h和12 h。Ec Pep N表现出最佳的耐盐性,在3 M Na Cl溶液中孵育22天后,酶活力高于55%。以7种底物进行酶活测试,Ec Pep N、Bs Pep N~(ex)和Bs Pep N~(in)对底物Ala-p NA比酶活最高,是一种丙氨酸氨肽酶,它们对底物Ala-p NA的K_m值分别为1.20、1.01和1.09 m M,Ec Pep N和Bs Pep N~(ex)的k_(cat)/K_m值大约是Bs Pep N~(in)的4倍。(4)重组氨肽酶与碱性蛋白酶协同水解大豆分离蛋白和酪蛋白的产物谱分析。以商品化氨肽酶为对照,重组氨肽酶与商品化碱性蛋白酶协同催化大豆分离蛋白的水解液中,75%以上为分子量小于500 Da的多肽,2,000 mg·L~(-1)以上的多种游离氨基酸,其总量是碱性蛋白酶单独催化的50倍以上。双酶协同水解酪蛋白的水解液中,小于500 Da的多肽占78%左右,其中小于150 Da的小肽含量是碱性蛋白酶单酶水解时的6倍。不同表达形式的重组氨肽酶Pep N的蛋白水解效果差别不大,且与商品化亮氨酸氨肽酶的蛋白水解效率相当。该研究为提高富含蛋白质生物资源的增值和蛋白质的深度水解提供了重要研究途径。

目的 观察桃红四物汤(THD)对紫杉醇所致大鼠外周神经损伤模型的作用并探讨相关的潜在机制。方法 将雌性AD biomarkersSD大鼠随机分为4组(对照组、模型组、THD低剂量组、THD高剂量组),每组6只。对照组以外的3组大鼠分别在第1、3、5、7日腹腔注入紫杉醇(8 mg/kg),诱导外周神经损伤模型,大鼠机械刺激撤足阈值<4 g为造模成功;THD低、高剂量组在造模同时灌胃给予相应浓度(1 g/ml、2g/ml)的桃红四物汤(103-MA溶解度 ml/kg),2次/d,连续4周;给药结束后检测各组大鼠坐骨神经组织病理,对机械、冷、热刺激的敏感度,坐骨神经部位炎性因子白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和抗氧化因子还原型谷胱甘肽(GSH)及脂质过氧化因子硫代巴比妥酸反应物(TBARS)水平,并检测坐骨神经部位髓鞘碎片及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠的冷、热刺激敏感度和机械痛觉阈值均降低(P<0.05);坐骨神经病理结构显著破坏,且存在炎性浸润,髓鞘碎片增加(P<0.05);炎性因子IL-6、TNF-α和TRABS水平升高(P<0.05),GSH水平下降(P<0.05);自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和Beclin1表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,THD低剂量组和THD高剂量组大鼠的冷、热刺激敏感度和机械痛觉阈值均增高(P<0.05);坐骨神经病理结构JNJ-42756493改善,仍存在炎性浸润,髓鞘碎片减少(P<0.05);炎性因子IL-6、TNF-α和TRABS水平降低(P<0.05),GSH水平增高(P<0.05);LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和Beclin1表达水平增高(P<0.05)。与THD低剂量组比较,THD高剂量组冷、热刺激敏感度和机械痛觉阈值均增高(P<0.05),坐骨神经髓鞘碎片减少(P<0.05),LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和Beclin1表达水平增高(P<0.05)。结论 THD可缓解紫杉醇造成的大鼠外周神经损伤,其机制可能与降低炎性反应、诱导自噬清除损伤碎片而促进神经损伤恢复有关。

[目的]开发同时检测生乳中吡虫啉（Imidacloprid）、吡唑醚菌酯（Pyrazole ether ester）、氟虫腈（Fluorine worm nitrile）3种农药残留的胶体金免疫层析的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，冻干法制备胶体金标抗体冻干粉，置于微孔杯内，复溶后，吸取全部反应液于胶体金试纸条样品垫上，经层析，在免疫层析试纸条上显示结果。[结果]吡虫啉、吡唑醚菌酯、氟虫腈3种农药检测检测下限分别为0.1 Infiltrative hepatocellular carcinomamg/kg,0.03mg/kg,0.02 mg/kg，保质期为1年，符合《GB2763—2021食品安全国家selleckchem标准食品中农药最大残留限量》对生乳中农药残留做出明确限量规定吡虫啉、吡唑醚菌酯、氟虫腈最大残留量0.1 mg/kg,0.03 mg/kg,0.02 mg/kg要求。[结论]该方法操作简单，快速灵敏，稳定准确，可以作为前期农残检selleck NMR测的快速筛查手段。

目的 分析老年冠心病合并慢性便秘与Disease pathology心率变异性的相关性。方法 选取2020年8月—2021年1月中日友好医院中西医结合心脏科经冠状动脉造影诊断为冠心病的老年病人206例。根据病人是否符合慢性功能性便秘分为合并慢性功能性便秘的老年冠心病(合并组)和未合并慢性功能性便秘的老年冠心病(冠心病组),各103例。采用问卷调查表收集病人基本信息、一般情况、病史信息、中医证候信息、睡眠、焦虑、抑https://www.selleck.cn/products/Cisplatin.html郁情况等临床资料。结果 合并组睡眠质量评分、老年焦虑评分和老年抑郁评分均高于冠心病组(P<0.001)。合并组冠状动脉狭窄程度(Gensini积分)高于冠心病组(P<0.05)。合并组其他证素(热蕴证、阴虚证、寒凝证)多于冠心病组(P<0.05)。合并组每分钟R-R间期标准差(SDNN)、5 mindiABZI STING agonist半抑制浓度平均R-R间期标准差(SDANN Index)、每分钟平均R-R间期标准差(SDNN Index)、相邻R-R间期差的均方根(rMSSD)、相邻两个正常窦性R-R间期差值大于50 ms的个数所占百分比(pNN50)、三角指数、总功率、极低频、低频(LF)、高频(HF)、最小频域功率小时、最大频域功率小时低于冠心病组，最大QTc间期高于冠心病组(P<0.05)。老年冠心病合并慢性便秘病人胃肠道症状评定量表(GSRS)得分与心率变异性相关指标(SDNN、SDANN Index、SDNN Index、三角指数、总功率、极低频、LF)呈负相关(P<0.05)。结论 合并慢性便秘的老年冠心病病人睡眠及心理障碍增多，自主神经功能紊乱，冠状动脉病变严重。在中医证素上，老年冠心病合并慢性便秘病人以气虚证、阳虚证居多，中医证素复杂。

目的 探讨激素受体状态在不同临床特征的亚组中对Her-2阳性乳腺癌新辅助化疗效果的影响。方法收集北京儿童医院顺义妇儿医院2011年1月至2018年12月141例接受新辅助化疗的Her-2阳性乳腺癌患者进行回顾性分析，根据年龄、肿瘤T分期、淋巴结（LN）情况、Ki-67指数、是否抗Her-2治疗将患者分成不同的亚组，对每个亚组中两种激素受体状态的病理完全缓解（pCR）与非病理完全缓解（non-p此网站CR）的构成比进行比较。统计学采用两个独立样本的Pearson χ~2检验或Fisher确切概率法。结果 入组141例Her-2阳性乳腺癌患者新辅助化疗后均可行疗效评价，总体pCR率为44.0%(6https://www.selleck.cn/products/kpt-330.html2/141)。总体上，HR阴性的患者较HR阳性患者更容易在新辅助化疗后达到pCR(P=0.011)。亚组分析中，在年龄≤50岁、肿瘤T分期≤2 callergy and immunologym、LN阴性、Ki-67≤30%、应用抗Her-2治疗的亚组，HR阴性的患者较HR阳性患者更容易在新辅助化疗后达到pCR(P=0.005、0.032、0.045、0.017、0.003)。结论 对于Her-2阳性乳腺癌，HR状态是影响新辅助化疗效果的重要因素，HR阴性的患者较HR阳性患者更容易在新辅助化疗后达到pCR，尤其是在肿瘤负荷低、同时应用抗Her-2治疗的年轻患者中，这种优势更明显。

目的 探讨双硫仑(DSF)协同奥沙利铂(Oxa)联合用药对胃癌细胞BGC-823的协同抑制作用。方法 CCK-8实验检测细胞活力，CompuSyn软件做Fraction-Effect协同作用曲线评价联用效果；AnnexinV/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率；碘化吡啶(PI)染色流式细胞术检测细胞死亡率；染色流Modeling human anti-HIV immune response式细胞术检测脂质过氧化自由基(LipROS)水平变化；qRT-PCR检测铁死亡标记物PTGS2、GPX4、SLC7A11的mRNA表达水平变化。结果 DSF与Oxa单用或联合用药可通过时间和剂量依赖性抑制胃癌细胞BGC-823增殖，两药联用可Staurosporine IC50发挥明显协同作用，诱导BGC-823胃癌细胞凋亡和铁死亡。DSF与Oxa联用可诱导LipROS合成增多，导致促获悉更多铁死亡调控基因PTGS2 mRNA表达水平明显上升，抑铁死亡调控基因GPX4、SLC7A11的mRNA表达水平明显下降。结论 DSF与Oxa联用可抑制胃癌BGC-823细胞活力，引起BGC-823细胞凋亡和铁死亡。