RAF信号通路

为提高抗生素对耐药菌的作用效果和减少抗生素使用剂量，本研究以齐墩果酸、槲皮素、柠檬酸、芦丁、熊果酸、牡荆素、山奈酚和山楂酸8种山楂主要有效成分为研究对象，以超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌为目的菌株，筛选大肠杆菌β-内酰胺类抗生素增freedom from biochemical failure敏剂。首先将亚抑菌浓度（1/2 MIC）的上述8种山楂有效成分分别与目的菌株共培养72 h，采用2倍稀释法测定头孢噻肟（CTX）对目的菌株最小抑菌浓度（MIC）的变化；其次利用琼脂糖凝胶电泳试验筛选能够消除ESBLs大肠杆菌耐药质粒的山楂有效成分selleck抑制剂；采用qPCR法筛选能够降低ESBLs大肠杆菌外排泵基因转录水平的山楂有效成分；采用ELISA方法筛选能够抑制ESBLs大肠杆菌及其生物被膜（BF）形成的山楂有效成分；然后采用牛津杯法和微量棋盘稀释法结合筛选出与CTX联用效果最好的药物组方；最后通过PCR法检测组方对8株野生多重耐药ESBLs大肠杆菌β-内酰胺类耐药基因（bla _(CTX-M)、bla _(TEM)、bla_(SHV)、bla_(OXA)）的消除效果。结果显示：经柠檬酸和芦丁作用后，CTX对目的菌株的MIC由32.00 mg/mL降至8.00mg/mL；消除ESBLs大肠杆菌耐药质粒效果最显著的是柠檬酸，抑制ESBLs大肠杆菌外排泵AcrA mRNA、AcrB mRNA基因转录水平最显著的是柠檬酸、芦丁和山楂酸，抑制ESBLs大肠杆菌ESBLs活性最显著的是齐墩果酸和柠檬酸，抑制ESBLs大肠杆菌BF形成最显著的是Roxadustat说明书芦丁和山奈酚；柠檬酸、芦丁（1:1）与CTX联合应用的中西药联合用药指数为0.53，有联合增效作用；柠檬酸、芦丁（1:1）对8株大肠杆菌耐药基因bla _(CTX-M)、bla _(TEM)、bla _(SHV)、bla_(OXA)的消除率为50%；这表明柠檬酸和芦丁（1:1）组方能够消除ESBLs大肠杆菌耐药性，增强ESBLs大肠杆菌对CTX敏感性。本研究首次验证了山楂有效成分中可作为大肠杆菌β-内酰胺类抗生素增敏剂的组方，为畜禽养殖生产中减少抗生素使用量和耐药菌感染的防控提供参考依据。

【目的】小柱孢酮脱水酶（scytalone dehydratase,SCD）是黑色素合成过程中的关键酶。本文旨在鉴定玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）Calakmul biosphere reserve小柱孢酮脱水酶基因（StSCD）家族，并分析玉米大斑病菌附着胞发育过程中StSCD基因家族表达量差异及SCD抑制剂对黑色素合成的影响，为进一步研究StSCD基因家族在黑色素合成和附着胞发育中的作用打下基础。【方法】利用玉米大CCRG 81045临床试验斑病菌野生型菌株01-23的全基因组数据，获得StSCD基因家族的全序列，并与玉米小斑病菌（Cochlibolus heterostrophus）、稻瘟病菌（Pyricularia oryzae）、瓜类炭疽病菌（Colletotrichum lagenaria）等真菌的SCD进行序列比对；收集玉米大斑病菌附着胞不同发育时期的材料进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析，获得不同时期、不同StSCD的表达量，从而确定与病菌侵染和附着胞黑色素化密切相关的脱水酶基因；使用SCD抑制剂环丙酰菌胺处理玉米大斑病菌，测定菌落生长速GDC-0973生产商度、黑色素合成量、附着胞膨压等，确定StSCD在附着胞发育过程中的作用。【结果】玉米大斑病菌全基因组中共鉴定到4个StSCD，其编码蛋白具有SCD保守结构域及保守的催化及底物结合氨基酸残基。StSCD3与灰葡萄孢（Botrytis cinerea）中功能冗余的SCD2蛋白具有较高同源性，StSCD4与多主棒孢（Corynespora cassiicola）中参与黑色素合成的SCD蛋白具有较高同源性。通过分析玉米大斑病菌生长发育过程中不同时期StSCD的表达量发现，在附着胞时期4个StSCD表达量均上调，其中StSCD3、StSCD4表达量上调尤为显著，附着胞再生菌丝时期StSCD3、StSCD4的表达量均显著下降，并且在附着胞诱导整个时期StSCD4的表达量较高。环丙酰菌胺处理玉米大斑病菌后，黑色素合成受阻，附着胞膨压显著降低。【结论】玉米大斑病菌含有4个StSCD，推测StSCD4参与DHN(1,8-间苯二酚)黑色素的合成，并进而影响附着胞膨压积累。

人肠道病毒71型(Human Enterovirus 71,HEV71)是可引发人类手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要病原体之一。易感群体为5岁以下儿童,部分儿童会出现较为严重的呼吸困难、并伴有神经系统以及循环系统的并发症,甚至出现死亡现象。目前,尚无对症治疗EV71引起的手足口病的药物,通常的治疗方式以支持性治疗为主,而接种预防性疫苗是预防EV71感染的有效手段。目前我国有3种EV71灭活疫苗上市,还没有病毒样Bioaccessibility test颗粒(VLPs)疫苗面世,由于VLPs独特的安全性及免疫原性,以及开发EV71相关联合疫苗的需求,使EV71 VLPs疫苗成为研制热点。本研究旨在建立一个用于检测昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备的EV71 VLPs(IB-EV71 VLPs)的检测方法,以满足IB-EV71 VLPs疫苗开发过程中检测抗原含量的要求。用IB-EV71 VLPs免疫日本大耳白兔,获得抗体效价大于1:100000的血清,经亲和层析纯化,获得多克隆抗体。使Nirmatrelvir临床试验用该多克隆抗体和HRP标记的抗EV71 VX-765小鼠P1抗体初步建立了双抗体夹心ELISA法来检测IB-EV71 VLPs,筛选最佳的包被浓度以及酶标抗体的稀释倍数;并根据方法学验证相关要求,对该方法进行了专属性、线性、范围、准确度、定量限及精密度的初步评价研究。结果显示:建立的方法专属性良好;在25～400ng/ml范围内,线性关系良好,R~2值大于0.99;检测范围内的回收率在86%～116%之间;定量限为2ng/ml;板内精密度和板间精密度的相对标准偏差(RSD)值均小于15%。综上所述,本研究建立了双抗体夹心ELISA法用于检测IB-EV71 VLPs。该方法专属性、线性、范围、准确度、精密度等均较好,定量限为2ng/ml,符合生物分析方法学验证指导原则的基本要求,为IB-EV71 VLPs疫苗的开发与质量控制奠定了基础。

为了获得具有良好免疫效果的候选抗原，本研究原核表达了副猪格拉瑟菌六个具有潜在保护力的蛋白，对小鼠免疫后进行攻毒，以期筛选获得具有免疫保护CX-5461体外效果较好的候选抗原，从而为开发具有交叉保护作用的副猪格拉瑟菌亚单位疫苗奠定基础。63只BALB/c小鼠随机平均分为9组：HPSNAG-1330、CyaY、HPSNAG-0978、HPSNAG-0140、AfuA以及Fe~(3+)ABC-tbp 6个亚单位疫苗组、G. parasuis-SAG纯度5灭活苗组、攻毒对照组和空白组；亚单位疫苗组每种对应蛋白各免疫50 μg·只~(-1)，灭活苗组免疫4×10~(9 )CFU，一免与二免间隔14 d，二免14 d后攻毒，副猪格拉瑟菌Nakasaki菌株攻毒剂量为1.26×10~(9 )CFU。在二免14 d后检测特异性抗体水平、淋巴细胞增殖和IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α的表达，攻毒后观察小鼠的临床症状并观察肺、脾的组织病理变化。免疫组小鼠均能产immune genes and pathways生体液免疫反应；淋巴细胞增殖试验显示：除rAfuA外，其它重组蛋白均能刺激灭活苗组中小鼠淋巴细胞显著增殖（P＜0.05），而6个重组蛋白对相应的亚单位疫苗组和空白组小鼠淋巴细胞增殖均不显著；同时，CyaY组和HPSNAG-1330组小鼠机体的炎性反应和脾、肺的损伤程度相对温和，综合评价效果优于灭活苗组。本研究通过小鼠免疫保护试验筛选出CyaY和HPSNAG-1330两个具有免疫保护性的候选抗原，为后续开展多个抗原的联合免疫和猪体试验提供了素材。

目的观察全程多维引流管护理方RNA virus infection案在乳腺癌患者中的应用及效果。方法选取400例行乳腺癌改良根治术的女性患者,以寻找更多实施全程多维引流管护理为时间节点,实施前200例为对照组,予以乳腺癌术后引流管常规护理;实施后200例为观察组,建立并Puromycin实施全程多维引流管护理方案。比较两组患者引流管护理缺陷发生率、患者满意度及留置引流管并发症。结果观察组导管滑落、堵塞、感染及导管相关性压力性损伤等引流管护理缺陷发生率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);患者满意度改善;留置引流管2周后两组皮下积液和皮瓣坏死差异检验P>0.05;但切口裂开的发生观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对乳腺癌患者实施全程多维引流管护理方案可减少引流管护理缺陷的发生率,有效提升了专科护理质量,同时提高了患者满意度。

骨肉瘤是临床上常见的一种原发性骨恶性肿瘤，具有肿瘤异质性高，预后差，易发生病变局部侵袭和远处转移及病死率高的特点。新辅助化疗联合保肢术为目前治疗骨肉瘤的主要治疗手段，虽然通过此种治疗方法有效地降低了骨肉瘤患者的致残率和致死率，但随着化疗技术的应用，长时间化疗药物的使用使得骨肉瘤细胞对其产生耐药作用，降低了肿瘤细胞对药物的敏感度，使得此治疗方式具有了一multiscale models for biological tissues定的局限性。近年来，随着中医药抗肿瘤的发展和进步，中医药以其治疗效果明显，不良反应少PI3K/Akt/mTOR抑制剂等优势受到了广泛的关注。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路作为经典的癌症信号通路，在骨肉瘤细胞中被异常激活，通过影响肿瘤细胞的周期、抑制肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞的自噬及促进肿瘤新生血管的生成，影响骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和转移等活动。临床研究发现，中药D-Lin-MC3-DMA纯度单体可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的活性，对骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、自噬及新生血管的生成等方面产生作用，发挥抑制骨肉瘤组织和细胞发展的作用，并且能高效的逆转肿瘤细胞对抗癌药物的多药耐药。该文将从中医对骨肉瘤的认识和经验积累，及中药单体调控PI3K/Akt/mTOR信号通路在治疗骨肉瘤疾病的研究进展作一综述，以期为中医药治疗骨肉瘤疾病的应用提供参考。

抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes，ARGs)的流行受到了国内外研究者的广泛关注，已有许多研究报道了 ARGs 在河流环境中的分布情况，然而关于西北干旱区典型内陆河中 ARGs 的研究甚少。本研究基于宏基因组学方法对 Y 河流域表层水中ARGs分布特征及细菌群落结构进行分析，探究了 ARGs 与环境因子、细菌群落间的关系。结果表明，Y 河流域表层水中检测到21种 ARGs 类型和 1295 种 ARGs 亚型，6 种抗性机制，多重耐药类为主要 ARGs 类型，macB为优势 ARGs ，抗生素外排泵为主要抗性机制；分别检测到160个门水平和4149个属水平细菌。变形菌门（Proteobacteria）是优势门，Liminohabitans等为优势属。相关性分析显示EC、TOC、DOC和COD_(MK-4827Mn)等与多种 ARGPR-171分子量s 亚型呈显著相关性（P<0.05）；黄杆菌属（Flavobacterium）、单胞菌属（Polaromonas）和类诺卡氏属（Nocardioides）等部分菌属与多种 ARGs 显著相关plant synthetic biology，且涉及多种抗生素抗性类型和抗性机制。本研究以期为西北干旱区典型内陆河水环境ARGs分布特征提供数据支撑。

为了解河南地区家兔呼吸系统感染的病原菌及其对抗菌药物的耐药性，本研究对采自河南不同地区36个规模化兔场的143例呼吸系统感染病兔的病料样品进行病原菌的分离，并对分离菌进行7种主要致兔呼吸系统感染细菌的PCR鉴定。采用K-B纸片扩散法检测分离菌对10类22种药物的敏感性。结果显示，经细菌分离培养、革兰染色，并经PCR鉴定共分离出262株病原菌，其中G+菌103株（39.31%）,G-菌159株（60.69%），而G+菌以金黄色葡萄球菌为主，感染率为50.35%(72/143),G-菌以肺炎克雷伯杆菌、支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌为主，感染率分别为41.96%(60/143)、36.36%(52/143)和19.58%(28/143)，其中两种及多种病原菌混合感染率高达76.22%(109/143)。豫东、豫南和豫北地区检出率最高的均为金黄色葡萄球菌，检出率分别为29.55%(13/44)、48.72%(19/39)和31.25%(25/80)，豫西和豫中地区检出率最高的分别为支气管败血波氏杆菌和肺炎intramammary infection克雷伯氏菌，检出率分别为28.57%(12/42)和38.10%(16/42)。药敏试验结果显示，分离的主要G+菌中的金黄色葡萄球菌对头孢菌素类（头孢哌酮、头孢氨苄、头孢唑林）、酰胺醇类（氟苯尼考）及多肽类中的多粘菌素B耐药性较低，耐药菌株占0～38.10%；而对其他氨基糖苷类、大环内酯类、喹诺酮类、磺胺类、β-内酰胺类、硝基呋喃类、四环素类药物及多肽类的杆菌肽耐药性均较强。分离的G-菌中肺炎克雷伯氏菌、支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌对多肽类的多粘菌素B耐药性最低，耐药菌占6.67%～25.00%，而对多肽类的杆菌肽GW4869价格耐药的菌株高达100.00%，且对大环内酯类、喹诺酮类、磺胺类药物的耐药性均较强。上述结果表明，河南省不同地区致家兔呼吸道感染的病原菌存在差异，病原菌的耐药性也各不相同，因此准确检测病原和快速有效用药控制病原菌的感染非常重要。本Crizotinib小鼠研究为河南地区防控家兔呼吸道疾病提供了参考数据。

目的：探讨微丝附着梁蛋白(Girdin)与血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌组织中的表达及意义。方法：收集2020年1月～2022年1月佳木斯市中心医院40例乳腺癌患者与80例良性乳腺腺病患者病理组织标本，所有患者接受手术治疗与病理检查，采用免疫组化SP法测定所有受试者病理组织中的Girdin与VEGF表达情况，分析Girdin与VEGF在乳腺腺病和乳腺癌组织中的表达情况；分析不同Girdin、Medical KnowledgeVEGF表达情况的乳腺癌患者临床病理特征差异。结果：免疫组化结果显示，乳腺癌患者病理组织中的Girdin阳性率(57.50%vs 13.75%)与VEGF阳性率(7Belumosudil配制0.00%vs 17.50%)均高于良性乳腺腺病患者(P<0.05)。Girdin阳性的乳腺癌患者与Girdin阴性的患者间年龄(χ~2=0.351)、分化程度(χ~2=2.283)、体重指数(χ~2=0.017)、HER-2阳性(χ~2=0.753)差异无统计学意义(均P>0.05),临床分期(χ~2=6.812)、淋巴结转移(χ~2=7.519)、肿瘤大小(χ~2=7.821)差异有统计学意义(均P<0.05)。VEGF阳性的乳腺癌患者与VEGF阴性的患者间年龄(χ~2=0.043)、体重指数(χ~2=0.0Torin 1说明书20)差异无统计学意义(均P>0.05),分化程度(χ~2=6.234)、临床分期(χ~2=10.545)、淋巴结转移(χ~2=13.413)、肿瘤大小(χ~2=10.178)、HER-2阳性(χ~2=6.234)差异有统计学意义(均P<0.05)。结论：Girdin与VEGF在乳腺癌患者病理组织中呈高阳性表达，且不同Girdin、VEGF表达的乳腺癌患者临床病理特征差异较大。

背景与目的：新的中心体调控蛋白Sec23同系物B(Sec23 homolog B,SEC23B)可以调节细胞中的自噬，从而提供有助于肿瘤生长和远处转移的能量和营养。然而，这种作用是否参与乳腺癌的浸润转移尚不清楚。本研究旨在探讨SEC23B在乳腺癌浸润转移中的作用及其分子机制。方法：使用Kaplan-MeierPlotter数据库和HCMDB数据库分析SEC23B表达与乳腺癌预后、转移之间的关联。将MPS-341 IC50CF-7细胞分为载体组（control）和SEC23B过表达质粒组（SEC23B），以及将MDA231-LM2细胞分为SEC23B敲低组（sh-SEC23B）和对照组（sh-NC）。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测乳腺癌细胞中SEC23B、自噬相关蛋白[死骨片1(SQSTM1,p62)、微管相关蛋白1的轻链3(microtubule-associated-protein light-chain-3,LC3)]和细胞外调节蛋白激酶（extracellular-regulatedproteinkinases,ERK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号转导通路蛋白的表达。通过transwell实验和伤口愈合实验评估细胞迁移，采用免疫荧光染色检测细胞中自噬颗粒。此外，构建体内腹膜内肿瘤模型研究SEgreenhouse bio-testC23B体内对乳腺癌细胞转移的影响。结果：SEC23B高表达的乳腺癌患者Ceralasertib配制的总生存期明显短于SEC23B低表达的患者。SEC23B在转移性乳腺癌中的表达明显高于没有转移的乳腺癌原发性乳腺癌细胞（MCF-7、BT-549、MDA-MB-468和MDA-MB-453）中的SEC23B蛋白水平低于转移性乳腺癌细胞（MDA231-LM2和ZR-75-30）。与control组相比，SEC23B组明显加速了细胞迁移（P<0.001）。与sh-NC组相比，sh-SEC23B组明显降低了细胞迁移（P<0.001）。与control组相比，SEC23B组LC3A/B的表达水平和自噬颗粒的形成明显增加，而p62蛋白表达和mTOR、ERK的磷酸化水平降低。与sh-NC组相比，sh-SEC23B组LC3A/B表达水平和自噬颗粒的形成显著降低，和mTOR、ERK的磷酸化水平升高，特别是在饥饿条件下结果更显著。在体内实验中，与sh-NC组相比，shSEC23B组肿瘤重量显著降低（P<0.01），并且小鼠肿瘤组织中坏死组织增多和肺组织肿瘤转移减少。sh-SEC23B组小鼠肺转移肿瘤数和LC3免疫组织化学染色明显低于sh-NC组（P<0.01）。结论：SEC23B通过抑制ERK/mTOR信号转导通路来诱导乳腺癌自噬，并促进癌细胞转移。