RAF信号通路

目的 分析慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)下呼吸道真菌感染危险因素。方法 选取我院2019年7月至Antibody-mediated immunity2021年6月收治的71例AECOPD患者为对象，根据患者真菌感染药敏检测结果，分为真菌感染组13例和非真菌感染组58例，Logistic多因素回归分析影响AECOPD患者下呼吸道真菌感染的影响因素。结果 71例AECOPD患者中真菌感染13www.selleck.cn/products/Paclitaxel(Taxol)例(18.31%),其中检出菌株17株，白色念珠菌8株(47.06%),热带假丝酵母菌4株(23.53%),隐球菌2株(11.76%)。真菌感染组机械通气时长>72 h、多种抗生素联合用药、糖皮质激素累计使用量>500 mg、粒细胞缺乏症比例及抗生素使用时长高于非真菌感染组(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示，机械通气时长>72 h、多种抗生素联合用药、糖皮质激素累计使用量>500 mg、粒细胞缺乏症及抗生素使用时间长为AECOPD患者呼吸道真菌感染的影响因素(P<0.05)。结论 机械通气时长>72 h、多种抗生素联合用药、糖皮质激素累计使用量>500 mgEnasidenib生产商、粒细胞缺乏症及抗生素使用时间长为AECOPD患者呼吸道真菌感染的影响因素。

降钙素原(Procalcitonin,PCT)是血清降钙素的一种前肽,被认为是诊断和管理细菌败血症的理想生物标志物,准确测定降钙素原在细菌性感染诊断中具有重要的意义。此前报道的大部分生物传感器都存在样本消耗量大的问题,导致较难应用于采血困难的患者,例如婴儿、老人和其他病情危重的患者。乳铁蛋白(Lactoferrin,Lf)是一种重要的营养强化剂,是奶粉中的明星营养素之一。快速、准确的定量检测奶粉中Lf含量是评价Lf强化奶粉质量的关键。然而,目前报道的Lf定量免疫分析方法大多存在样品预处理步骤繁琐、检测时间长等问题,不能满足奶粉中Lf快速检测的需求。动态光散射(Dynamic light scattering,DLS)是一种用于测量颗粒粒径和粒径分布的常用光学技术。基于抗原抗体的DLS免疫传感器由于抗原与抗体的结合亲和力有限,检测蛋白质的灵敏度通常hepatic haemangioma在ng/m L水平,难以满足微量目标物检测的需求,且该反应通常需要一对完全匹配的抗体。相反,硼酸亲和材料对含顺式二醇的化合物(如糖蛋白)表现出更高的结合亲和力(因为硼酸配体可以共价结合顺式二醇形成五元或六元环状酯)。PCT和Lf都是糖蛋白物质,均含有顺式二醇结构。本研究提出了一种基于硼酸亲和识别(Boronate affinity recognition,BAR)提高DLS生物传感器检测灵敏度的新策略,以实现PCT和Lf的超灵敏检测。在该生物传感系统中,以单克隆抗体修饰的磁性纳米颗粒(MNP@mAb)为探针,从样本中捕获目标物分子形成免疫复合物;以多价苯基硼酸标记的牛血清白蛋白(BSA@PBA)为“脚手架”,引发免疫复合物的聚集,从而导致MNP@mAb水化粒径(D_H)的增加。由于硼酸基团与糖蛋白上顺式二醇反应形成共价键,因此该方法检测PCT和LfVX-445具有更高的灵敏度。在最优检测条件下,该方法对PCT的检出限(Limit of detection,LOD)为0.03 pg/m L,线性范围为0.035 pg/m L-250pg/m L,回归方程为ΔD_H=6.985ln(C_(PCT))+24.789(R~2=0.989);实际血清加标回收实验结果显示,该方法批内和批间检测平均回收率为96.08%-117.6MRTX1133采购3%,变异系数(CV)介于2.93%-14.96%。对Lf的检出限为1.36 ng/m L,线性范围为1-10000 ng/m L,回归方程为y=7.4199ln(x)+142.85(R~2=0.96);实际奶粉加标回收实验结果显示,批内和批间的平均回收率为90.13%-108.64%,CV值范围为5.03%-14.83%。以上结果表明该方法检测实际样本中的糖蛋白具有较好的准确度和精确度。同时,该DLS免疫传感器对实际样本中PCT和Lf具有较高的特异性。此外,该反应总体检测总时间约15 min,样品需求量仅需1μL。进一步将该方法的检测结果与其他商业化免疫分析试剂盒相对比,如化学发光免疫(Chemiluminescence immunoassay,CLIA)试剂盒和酶联免疫(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒,两者的结果具有良好的一致性。总之,本研究提出以苯硼酸作为抗体替代物检测糖蛋白,克服了传统夹心免疫分析方法检测糖蛋白时需要匹配抗体的缺陷,同时极大地提高了免疫分析方法的灵敏度,缩短了检测时间。因此,这项工作为DLS生物传感器快速、超灵敏检测其他含顺式二醇结构的物质提供了一个简便通用的平台。

目的：运用中医传承计算平台V3.0软件，研究王行宽教授治疗胸痹心痛遣方用药规律，Recurrent hepatitis C传承王行宽教授诊疗胸痹心痛的学术经验。方法：收集整理2017—2020年王行宽教授于湖南中医药大学门诊诊疗冠心病心绞痛患者的原始病历资料，录入中医传承计算平台V3.0，运用软件进行方药规律研究。结果：共收集王行宽教授治疗胸痹心痛处方1 044则，所用药物多为甘、苦药物，归经以肺经为主，其次为心、脾、肝、胃、肾经；所用方剂中使用最多的经方是生脉散，最高的经验方是心痛灵Ⅲ号方；高频数药物主要有麦冬、半夏、丹参、瓜蒌皮、黄连、五味子、柴胡等药物；药物的常用剂量多为3、5、10、15 g；组Pevonedistat NMR方规律分析得到常用药组合129个，置信度>0.99的组合有58个，并得到常见证型核心药物；药物聚类得到6个核心药物组合。结论：王行宽教授论治胸痹心痛以益气养营、豁痰化瘀、疏肝利胆为治疗思路，并根据胸痹心痛不同证型予以辨证NSC125066配制施治，体现其“多脏调燮、综合治理”的学术思想，其核心处方可供临床从业者参考，但仍需要进一步的临床及实验研究验证其疗效。

研究背景和目的糖尿病肾病(DKD)越来越普遍,证据显示,在DKD在发展过程中,肾小管发挥了重要作用。小管间质纤维化就是DKD病程中肾小管最常见的病理变化之一。DKD最早可检测到的临床表现是微量白蛋白尿,而研究发现白蛋白是促进肾小管上皮细胞间质纤维化的一个关键因素。因此,在DKD的发展过程中,积极探讨白蛋白导致肾小管上皮细胞损伤的病理生理机制具有重要意义。细胞周期阻滞是细胞衰老的重要的特征之一。研究表明,损伤后的肾小管上皮细胞阻滞在G2/M期,进而导致促纤维化因子生成增多,促进了肾纤维化。因此,通过延缓细胞衰老可能成为遏制DKD,改善肾纤维化的潜在重要方法之一。目前除了肾素-血管紧张素系统阻滞剂以外,近几年新开发的降糖药钠-葡萄糖协同转运体(Sodium-glucose cotransporter 2,SGLT2)抑制剂成为肾脏保护的新药物。有研究发现通过抑制SGLT2表达后可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞衰老标志物的表达,但机制仍不明确。因此,我们通过在体外利用白蛋白(BSA)干预肾小管上皮细胞(HK-2)模拟蛋白尿的微环境,研究白蛋白是否可以诱导肾小管上皮细胞早衰,及其可能的机制是否与白蛋白导致肾小管间质纤维化相关;进一步探索SGLT2抑制剂达格列净是否通过改善肾小管上皮细胞衰老而延缓细胞间质纤维化,进而发挥肾脏保护作用。方法1、以近端肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象,用含不同浓度的白蛋白培养HK-2细胞72小时,模拟体内蛋白尿的微环境。先在光学显微镜下观察细胞形态、密度改变,然后通过β-半乳糖苷酶染色后,在显微镜下观察β-半乳糖苷酶活性的改变;接着,通过免疫荧光染色来观察细胞核膜的完整性,通过RT-PCR来检测laminB1和衰老相关分泌表型(SASP)成分IL-1α、IL-6和IL-8 mRNA的表达情况,通过Western blot观察DNA损伤标志γ-H2AX的表达;2、用含不同浓度的白蛋白培养HK-2细胞72小时,利用特异性抗体p-PH3Ser10,通过免疫荧光染色的方法来观察细胞是否发生G2/M期阻滞,通过RT-PCR和Western blot观察促纤维化因子的mRNA和蛋白的表达情况;Western blot进一步检测与G2/M期进程相关蛋白p21、CDK1和CDC25C的表达水平;3、用含白蛋白培养HK-2细胞72小时的同时,利用si-p21敲低HK-2细胞中的p21的表达,再次通过免疫荧光染色、RT-PCR和Western blot来观察和检测HK-2细胞G2/M期进程情况、促纤维化因子的mRNA和蛋白的表达水平,进一步通PD-0332991体外过Western blot检测CDK1和CDC25C的磷酸化水平;4、用不同浓度的达格列净联合白蛋白培养HK-2细胞72小时,通过免疫荧光染色的方法来观察不同浓度的达格列净对细胞G2/M期进程的影响,Western blot检测G2/M期进程相关蛋白p21、CDK1、CDC25C和促纤维化因子的蛋白表达情况,以此来了解不同浓度达格列净对细胞的影响。结果1、白蛋白诱导肾小管上皮细胞早衰不同浓度BSA处理HK-2细胞72 h后,随着白蛋白浓度的增Pexidartinib加,细胞密度下降,以BSA(20mg/ml)组最为明显,经典的衰老试验(SA-β-Gal染色)显示,与对照组相比,BSA诱导了更高水平的SA-β-gal活性。同时,20mg/ml BSA可促进HK-2细胞中衰老相关分泌表型(SASP)IL-1α、IL-8、IL-6显著表达。另外,我们观察到,BSA(20mg/ml)干预72 h后,HK-2细胞核膜中laminB1的表达明显减少,而Western blot结果显示DNA双链断裂标志物γ-H2AX的表达增加了 1.5倍。上述结果表明白蛋白可以诱导肾小管上皮细胞衰老。2、肾小管上皮细胞(HK-2)出现间质纤维化与白蛋白诱导细胞在G2/M期进程受阻相关我们通过细胞免疫荧光染色检测发现p-H3(+)的HK-2细胞随着BSA浓度的增加而逐渐增加,说明白蛋白诱导的HK-2细胞衰老的确发生了G2/M 期阻滞;Western blot 结果显示,20mg/ml BSA 处理组 CTGF 和α-SMA表达增加。这些数据表明BSA具有诱导HK-2细胞产生促纤维化因子的能力。与对照组相比,BSA(20 mg/ml)组p21 mRNA和蛋白表达分别提高59%和3.2倍。我们再通过siRNA-p21转染降低p21的表达,发现BSA联合转染siRNA-p21的HK-2细胞中p-H3(+)细胞明显减少;与此同时,western blot结果显示,转染siRNA-p21后,BSA组HK-2细胞的CTGF和α-SMA的表达明显降低。CDC25C和CDK1磷酸化水平的升高是细胞周期阻滞在G2/M期的标志。我们的研究表明,随着BSA浓度的增加,CDC25C和CDK1的磷酸化水平明显增加。然后,我们使用siRNA-p21转染经20mg/ml BSA处理的HK-2细胞,结果显示其CDK1和CDC25C磷酸化水平降低。3、达格列净通过抑制肾小管上皮细胞G2/M期阻滞改善细胞间质纤维化我们用不同浓度的达格列净联合BSA干预HK-2细胞,结果显示达格列净可以减少肾小管上皮细胞TGF-β1和CTGF的表达,同时细胞免疫荧光染色的结果也显示其可以改善肾小管上皮细胞G2/M期阻滞;进一步我们通过Western blot检测发现,通过不同浓度的达格列净的干预,HK-2细胞的p21的表达均受到不同程度的抑制,并且CDK1和CDC25C磷酸化水平也出现了显著的降低。结论白蛋白诱导肾小管上皮细胞发生衰老,衰老的肾小管上皮细胞细胞发生了 G2/M期阻滞,导致了促纤维化因子升高;而通过抑制p21的表达可减少肾小管上皮细胞细胞G2/M期阻滞,进而减少肾小管上皮细胞促纤维化因子的产生;达格列净通过抑制p21的表达,改变CDK1和CDC25C的磷酸化水平,使细胞周期进程受到影响,减少阻滞在Genetic basesG2/M期的细胞,从而减少了促纤维化因子的生成,发挥了抗纤维化的作用。

<正>脓毒症和急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是两个紧密相关的临床综合征。脓毒症急性肾损伤(sepsis associated acute kidney injury,SA-AKI)，即同时符合sepsis-3.0的脓毒症诊断标准及改善全球肾脏病预后组织(kidney disease improving global outcomes,KDIGO)的AKI诊断标准的患者死Steroid biology亡率约50%～70%，预后极差，存活者发展为慢性肾脏病的风险高，肾衰竭需肾脏替代治疗的患者比例高。导致其预后不良主要原因为SA-AKI的发病机制未明，以及诊断和治疗的延迟~([1,2])。SA-AKI的发病机制包括血流动力学障碍selleck、免疫炎症反应、自噬、氧化应激及代谢重编程，其中炎症反应和微循环障碍是SA-AKI重要的发病机制~([2～5])。迄今为止没有有效的治疗(不包括抗菌药物)能够改变SA-AKI的结果，其治疗几乎完PS-341分子式全是支持性治疗，通常依靠控制感染、肾脏替代治疗、优化血流动力学参数以及避免肾毒性来提高疗效~([3])。

目的 探讨双模态超声(常规彩色多普勒超声联合经皮超声造影)在乳腺癌前哨淋巴结转移风险评估中的应用价值。方法 分析62例术后病理诊断为浸润性乳腺癌患者的临床资料，评估常规彩色多普勒超声、经皮超声造影和双模态超声对乳腺癌前哨淋巴结转移风险的诊断价值。结果 经皮超声造影检出前哨淋巴结(3.4±0.2)枚，多于常规彩色多普勒超声的(1.7±0.1)枚(P<0.01)。常规彩色多普勒超声诊断前哨淋巴结转移风险的灵敏度为33.33%(3/9),特异度为96.23%(51/53)。经皮超声造影诊断前哨淋巴结转移风险的灵敏度为55.56%(5/9),特异Porta hepatis度为92.45%(49/53)。双模Emricasan半抑制浓度态超声诊断前哨淋巴结转移风险的MG132纯度灵敏度为77.78%(7/9),特异度为92.45%(49/53)。结论 双模态超声诊断乳腺癌前哨淋巴结转移风险有较高的灵敏度，优于单独常规彩色多普勒超声或经皮超声造影，有望成为术前评估前哨淋巴结转移的有效方法。

本研究以野生型WT(WSCH772984 molecular weightild Type)和转GhPAO3基因拟南芥种子为材料，研究NaCl和外源多胺及多胺抑制剂对WT和转基因拟南芥种子萌发的影响。结果表明，随着NaCl浓度Tamoxifen的提高，对拟南芥种子萌发表现出较明显的抑制作用，150 mmol/L、200 mmol/L NaCl处理下造成种子萌发分别推迟1 d和2 d,且转基因拟南芥发芽率低于野生型，表明GhPAO3基因过表达可能对NaCl处理下拟南芥种子的萌发有抑制作用。此外，在100 mmol/L NaCl处理条件下，WT在第3天出现子叶变绿，而转基因植株在第4天出现子叶变绿，转基因拟南芥子叶变绿的数量低于WT;在此基础上添加外源多胺显示，添加Put时，与对照(ck)相比，WT和转基因株系的子叶变绿的数量均有所提高，且转基因株系子叶变绿提前，而添加Spd和Spm时，WT和转基因株系子叶变绿均推迟1 d。所有处理下转基因拟南芥的子叶变绿的数量低于WT,推测NaCl处理和过表达株系产生的H_2O_2抑制拟南芥的子叶变绿。外源Thermal Cyclers多胺和多胺抑制剂处理结果显示，外源多胺和PAO抑制剂(1,8-DO)能够促进拟南芥子叶变绿，且转基因株系中H_2O_2含量高于WT;添加多胺抑制剂(D-Arg)时，转基因株系中H_2O_2含量低于WT。本研究揭示了GhPAO3基因对种子萌发的影响，为进一步了解多胺氧化酶在植物生长发育中的作用提供参考。

目的 结合氧化锌纳米花及夹心法信号放大策略，构建高灵敏心肌肌钙蛋白I(cTnI)电化学免疫传感器。方法 采用直接沉淀法合成氧化锌纳米花，在其表面标记硫堇与cTnEntinostat小鼠I抗体。另外，采用恒电位溶出法在电极表面沉积纳米金，通过金-氮共价键捕获cTnI抗体作为传感平台，识别检测抗体，构成夹心式、高灵敏cTnI电化学免疫传感器。采用扫描电子显微镜（SEM）表征材料的形貌结构，采用循环伏安法和示差脉冲伏安法（DPV）探究传感界面的构建过程、实验条件以及响应性能。结果 功能化氧化锌纳米花与纳米金呈现出良好的信号放大性LEE011能。在最优实验条件下，免疫传感器DPV响应电流与cTnI抗原浓度呈正比，线性范围为0.05～0.25μg/L和0.50～8.00μg/L，检测限为0.014 3μg/L(S/N=3)。构建的电化学免疫传感器具备良好的选择性、重现性及准确度。结论 结合氧化锌纳米花优异的催化性Microbiology education能，成功构建一种双抗夹心式cTnI电化学免疫传感器，提高了cTnI检测的灵敏度与特异度。

目的 探讨黄芪多糖(APS)对黄嘌呤氧化酶(XOD)诱导的肺癌A549细胞自噬模型及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路的影响及对自噬相关调节因子表达。方法 实验分为6组：正常selleck组、模型组(20 U·L~(-1) XOD处理24 h)、低、中、高3个浓度实验组(在模型组基础上分别使用100,200和400 mg·L~(-1) APS进行处理)及3-MA抑制组(在模型组基础上使用2 mmol·L~(-1) 3-甲基腺嘌呤进行处理)。以免疫荧光法检测自噬相关蛋白，以蛋白质印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白，以实时荧光定量聚合酶链反应法检测mRNA的表达水平。结果 正常组、模型组、高浓度实验组及3-MA抑制组的微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的蛋白荧光强度分别为6 368.50±17.90,2.57×10~4±22immune deficiency4.03,7 443.00±19.20和8 356.50±18.52;抗坏死骨片1(P62)的蛋白荧光强度分别为2.86×10~4±194.85,3 225.50±12.69,1.04×10~4±209.50和1.04×10~4±96.78。这4组的PI3K的蛋白相对表达水平分别1.11±0.05,1.93±0.06,1.30±0.04和1.40±0.08;这4组的Akt蛋白表达水平为0.64±0.06,0.27±0.06,0.50±0.09和0.66±0.03;这4组的mTOR蛋白表达水平为1.94±0.06,0.93±0.06,1.28±0.03和0.91±0.04;这4组的Beclin1蛋白表达水平为0.48±0.04,1.03±0.04,0.77±0.09和0.65±0.09。mRNA表达的趋势与蛋白一致。自噬相关调节因子(LC3点击此处B、P62、Beclin1)及PI3K、Akt、mTOR信号因子，模型组与正常组相比，或高浓度实验组与模型组相比，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 黄芪多糖防治肺癌的分子机制之一可能是通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制肺癌A549细胞自噬而发挥作用。

目的 建立基于重组弓形虫致密颗粒蛋白7(GRA7)的金纳米簇可视化免疫传感器，用于检测弓形虫GRA7抗体，并评价其检测性能。方法 利用重组表达质粒pQE-60-gra7的大肠埃希菌M15诱导表达并纯化GRA7,Western blot鉴定其反应原性。采用谷胱甘肽还原法制备金纳Wnt-C59试剂米簇，连接羊抗人IgG;以GRA7作为捕获抗原，构建检测血清GRA7抗体的金纳米簇可视化免疫传感器，评价其敏感度、特异性、阴性预测值、阳性预测值和诊断效率。结果 表达纯化获得具有良好反应原性的GRA7,分子质量约为30 ku;建立的zinc bioavailability金纳米簇可视化免疫获悉更多传感器检测血清GRA7抗体的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值以及诊断效率分别为76.1%、94.8%、94.4%、73.0%、78.2%。结论 基于重组弓形虫GRA7建立的金纳米簇可视化免疫传感器检测弓形虫GRA7抗体敏感、特异，且诊断效率高，可用于弓形虫感染的抗体检测。